Transplantation of human hepatocytes into tolerized genetically immunocompetent rats

AIM: To determine whether normal genetically immunocompetent rodent hosts could be manipulated to accept human hepatocyte transplants with long term survival without immunosuppression. METHODS: Tolerance towards human hepatocytes was established by injection of primary human hepatocytes or Huh7 human hepatoma cells into the peritoneal cavities of fetal rats. Corresponding cells were subsequently transplanted into newborn rats via intrasplenic injection within 24h after birth. RESULTS: Mixed lymphocyte assays showed that spleen cells from non-tolerized rats were stimulated to proliferate when exposed to human hepatocytes, while cells from tolerized rats were not. Injections made between 15 d and 17 d of gestation produced optimal tolerization. Transplanted human hepatocytes in rat livers were visualized by immunohistochemical staining of human albumin. By dot blotting of genomic DNA in livers of tolerized rats 16 weeks after hepatocyte transplantation, it was found that approximately 2.5 X 10(5) human hepatocytes survived per rat liver. Human albumin mRNA was detected in rat livers by RT-PCR for 15 wk, and human albumin protein was also detectable in rat serum. CONCLUSION: Tolerization of an immuno-competent rat can permit transplantation, and survival of functional human hepatocytes.

中药“松友饮”对高转移人肝癌侵袭性及小鼠免疫功能的影响

目的:研究"松友饮"对高转移人肝癌MHCC97H细胞侵袭性和小鼠免疫功能的影响及其机制。方法:用不同质量浓度的"松友饮"(2、4、8 mg/mL)分别干预MHCC97H细胞48 h,用明胶酶谱实验及侵袭实验研究基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)活性和侵袭性变化。用高转移人肝癌裸鼠原位移植瘤模型进行体内实验,以检测对"松友饮"对肿瘤的抑制作用。C57BL/6小鼠和昆明种小鼠均随机分为"松友饮"剂量递增的C1、C2和C3组及阴性、阳性对照组,灌胃给药,每天1次,连续7 d,处死小鼠后检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的活性,观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能变化。结果:与对照组相比,"松友饮"4、8 mg/mL组细胞侵袭性下降有统计学意义(P<0.01),对应的MMP-2活性下降。此外,"松友饮"抑制了肝癌细胞生长,C1、C2和C3组的NK细胞特异性抑制百分率分别为24.6%、27.1%和27.7%,巨噬细胞吞噬百分率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:中药复方"松友饮"可能通过抑制MMP-2活性来抑制肝癌侵袭性,连续7 d"松友饮"灌胃给药能增强小鼠免疫功能。

围手术期乳腺癌患者情绪与免疫功能的研究

目的:探讨围手术期乳腺癌患者的情绪与免疫功能的关系。方法:测试30例乳腺癌手术患者手术前5d、手术后14、21d的免疫功能和情绪状况,在相同时间对30例健康者(对照组)进行测试。结果:手术前患者组与对照组相比,免疫功能较低,差异显著(P<0.01);患者组不良情绪得分明显高于对照组,差异显著(P<0.01)。手术后14d,患者的免疫功能较手术前低,且明显低于对照组(P<0.05);手术后21d时患者的不良情绪得分升高,与对照组相比差异显著(P<0.05)。手术前后患者的免疫功能与不良情绪呈显著负相关。结论:乳腺癌患者存在免疫功能低下和情绪障碍并呈动态变化,围手术期乳腺癌患者的免疫功能与不良情绪呈显著负相关。

沙苑子黄酮抗肝癌生长作用及对免疫功能的影响

目的:探讨中药提取物沙苑子黄酮(flavonoids extracts fromsemen Astragali complanati,FAC)对小鼠肝癌H22细胞生长的影响及其机制。方法:建立H22荷瘤小鼠模型,观察FAC对H22肝癌移植瘤生长的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫器官、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化功能及生存期的影响。结果:高、中、低剂量组FAC对荷瘤小鼠肝癌细胞生长具有显著抑制作用,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05);其中环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对照组的抑瘤率与FAC高剂量组相近(P>0.05)。FAC可以明显延长荷瘤小鼠的存活期,高、中、低剂量组的生命延长率分别为64.9%、56.7%和28.1%,与CTX对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。另外,高、中、低剂量组FAC明显提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且高、中剂量组能显著提高巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞转化能力,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01);而CTX的作用方向相反,与正常对照模型组比较差异也具有统计学意义(P<0.01)。结论:FAC可抑制肝癌H22细胞生长,延长荷瘤小鼠存活期,并能提高荷瘤小鼠的非特异性免疫功能。FAC可能通过调节机体免疫功能来发挥抗肿瘤作用。

电针对Walker-256模型大鼠肿瘤生长和免疫功能的影响

目的:研究针刺治疗肿瘤的效应及作用机制。方法:采用Walker-256细胞株复制种植性Wistar大鼠肝癌、胃癌、皮下瘤模型,造模第3d,3种模型大鼠分别随机分为模型组和电针组。电针组针刺"足三里""合谷""三阴交",予电针治疗,每天1次,留针20min,连续治疗15d。检测各组大鼠肿瘤的体积和肿瘤抑制率及各组大鼠外周血中体液免疫(血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和补体C3、C4)以及细胞免疫(T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值)。结果:电针组肿瘤体积显著低于其模型组(P<0.01)。针刺组外周血IgG、IgM、C3含量较其模型组显著增高(P<0.05,P<0.01),IgA和C4含量较模型组增高不明显(P>0.05)。电针组外周血CD4+和CD4+/CD8+比值均显著高于其模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:电针"足三里""合谷""三阴交"能提高大鼠Walker-256肝癌、胃癌、皮下瘤的免疫功能,抑制其肿瘤的生长。

老年人食管癌和肺癌术前术后免疫状态的检测

目的了解老年肿瘤患者术前、术后体液免疫和细胞免疫功能状态。方法对26例食管癌和肺癌患者采集术前1天术后第1天、第8天外周血标本,测定体液免疫和细胞免疫功能状态。结果患者外周血体液免疫指标值术前、术后与正常值比较无明显变化,而外周血细胞免疫CD3+、CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+值术后明显回升,CD3+、CD8+明显下降,与术前比较均有显著意义(P<0.05)。结论老年肿瘤患者手术前后体液免疫无明显变化,手术后细胞免疫明显恢复。手术切除恶性肿瘤对患者细胞免疫恢复起积极作用。

树突状细胞对肿瘤浸润性淋巴细胞杀伤自体肝癌细胞活性影响的研究

目的 探讨树突状细胞 (DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞 (TIL )体外对自体肝癌细胞杀伤活性。方法 从肝癌患者外周血获取 DC,应用粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )和肿瘤抗原激活 DC,然后用 DC激活 TIL ,观察 TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果 DC激活的 TIL对自体肝癌细胞具有很高的杀伤活性 ,杀伤率为 (89.39± 3.0 5 ) % ,明显高于未经 DC激活的 TIL、DC激活的 T淋巴细胞和未经 DC激活的 T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率。其杀伤率分别为 (5 5 .2 3± 1.5 3) %、(5 4 .89± 1.4 8) %和 (3.6 5± 0 .2 6 ) %。结论 肝癌患者外周血 DC能诱导

肺癌患者化疗前后红细胞免疫功能的动态研究

目的:了解肺癌患者化疗前后的红细胞免疫功能?方法:应用郭峰法检测肺癌患者化疗前后的红细胞C3b受体花环(RBC-C3bR)?红细胞免疫复合物花环(RBC-ICR)?肿瘤红细胞花环(ATER)的动态变化?结果:肺癌组RBC-C3bR ?ATER明显低于健康对照组(P<0.001),RBC-ICR明显高于健康对照组(P<0.001),化疗后第7天,RBC-C3bR?RBC-ICR?ATER较未化疗时均明显降低(P<0.05),化疗后第21天,RBC-C3bR?ATER明显高于未化疗组(P<0.05)?结论:肺癌患者红细胞免疫功能低下,化疗对红细胞免疫功能造成一过性损伤,在化疗后第7天明显?

胸腺肽α1治疗高龄患者消化系统肿瘤的临床疗效分析

目的观察及评价胸腺肽α1(Tα1)对高龄消化系统恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响和临床疗效。方法96例高龄消化系统恶性肿瘤患者,随机分为对照组(化疗)和治疗组(化疗+Tα1),每组48例。治疗组在化疗的同时给予1.6mg Tα1皮下注射,隔日1次,连续应用8周,对照组则在化疗的同时给予等剂量生理盐水,用法与治疗组相同。在化疗前1周和化疗第2、4、8周分别检测患者T淋巴细胞亚群及NK淋巴细胞活性,并记录患者Karnofsky体力评分。结果治疗后治疗组患者的Karnofsky评分明显高于对照组(P<0.05)。治疗组机体免疫能力相关指标CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞活性在治疗后明显高于治疗前,差异有显著性(P<0.05)。治疗后治疗组CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞活性明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论胸腺肽α1可提高高龄消化系统恶性肿瘤患者的细胞免疫功能,改善患者生活质量,对消化系统恶性肿瘤有一定的辅助治疗作用。

新型免疫活性细胞CIK体外对肝癌细胞的杀伤

目的观察人体 CIK(cytokine-induced killer)细胞的体外增殖力及杀伤肝癌细胞活性。方法采取健康自愿者的成分血,用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),在体外培养条件下,通过加入不同细胞因子(如 IFN-γ,IL-1,IL-2,CD3 mAb)培养诱导成 CIK 细胞和 LAK 细胞,观察不同培养细胞的增殖能力;用流式细胞仪对培养细胞做细胞表型动态分析,观察培养细胞的表面标志;与 LAK 细胞作对比,用 MTT 法测定并比较不同效应细胞的体外抗肝癌细胞活性。结果 CIK 细胞在培养14d 后开始大量增殖且在含人血清的培养基中增殖数量最多,可达500多倍,经表型分析表明,CIK 细胞属于异质细胞群,在培养过程中,CD^(3+)CD^(56+)双阳性细胞的绝对数量获得了大量增殖,至56d 时可占细胞总数的51.26%,是 CIK 主要的效应细胞;实验表明,CIK 细胞体外杀伤肝癌细胞的活性明显优于 LAK 细胞。结论 CIK 细胞是一种具有较强杀伤肝癌细胞的免疫活性细胞,有可能应用于抗肿瘤的生物治疗。

乌司他丁在原发性肝癌术后化疗中的作用

目的:探讨乌司他丁对原发性肝癌术后化疗中氧自由基、肝功能和免疫功能的影响。方法:选择原发性肝癌切除术后行门静脉灌注化疗(PVI)和门静脉+肝动脉灌注化疗(PVI+HAI)的患者55例,随机分为治疗组(n=30,PVI 15例,PVI+HAI 15例)和对照组(n=25,PVI 15例,PVI+HAI 10例)。治疗组在化疗时连续使用乌司他丁7 d,每日20万单位微泵持续滴注,检测和分析化疗前、后不同时期丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肝功能和免疫功能的变化。对照组不用乌司他丁。结果:患者经化疗后MDA的含量增加、SOD降低、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)明显升高,第5天时变化明显(P<0.05)。患者经乌司他丁治疗后,MDA在不同时段变化不明显,但与对照组同时段比较明显降低(P<0.01),而SOD变化不明显,ALT、AST、TBil比对照组明显降低(P<0.01);两组患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值以及NK细胞活性均在化疗5 d后明显降低,7 d后回升,CD4+、CD4+/CD8+比值和NK细胞活性,治疗组与对照组同时段比较有显著性差异(P<0.05),而且治疗组波动幅度较小。结论:乌司他丁可能通过抑制化疗时机体内氧自由基的生成来保护肝功能,同时增强免疫功能。

不同术式对直肠癌患者免疫功能的影响

目的研究不同术式对直肠癌患者治疗后免疫功能的影响以及术后发生感染的风险。方法本研究尊重患者意愿根据前瞻性非随机研究对80例直肠癌患者分别给予开腹手术治疗(开腹组,n=40)和腹腔镜手术治疗(腹腔镜组,n=40)。比较两组患者术后发生感染的情况以及术后免疫功能改变情况。结果腹腔镜组患者感染发生率低于开腹组(P<0.05),且术后3 d T淋巴细胞比例差值(ΔT细胞)、自然杀伤(natural killer,NK)细胞比例差值(ΔNK细胞)与C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平差值(ΔCRP)均优于开腹组(均P<0.01)。结论腹腔镜手术治疗直肠癌患者创伤小,术后发生感染的概率与应激反应较低,患者术后免疫功能恢复较快,是一种安全的治疗手段。

凋亡相关因子FasL在大肠癌组织中的表达规律研究

1971年 Burnet 首先提出免疫监视学说,即机体免疫系统中的免疫活性细胞包括 T 细胞、NK 细胞、巨噬细胞等能识别和破坏肿瘤细胞,发挥免疫监视作用.而肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视,无限制地生长下去的现象则被称之为免疫逃逸.

甘露聚糖肽对卵巢癌患者免疫功能及生存质量的影响

目的观察甘露聚糖肽序贯联合奥沙利铂和多西他赛对卵巢癌患者免疫功能及生存质量的影响。方法选择72例卵巢癌患者,按数字表法随机分成观察组(36例)和对照组(36例)。观察组应用甘露聚糖肽+奥沙利铂+多西他赛,对照组应用胸腺肽+奥沙利铂+多西他赛。21 d为1个周期。化疗6个周期后评价其免疫指标、近期疗效、不良反应及生存质量。结果化疗6个周期后,观察组患者的免疫指标白细胞分化抗原(cluster of differentiation,CD)3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+、自然杀伤细胞(natural killer,NK)细胞、IgA、IgG和C3水平均高于对照组(均P<0.05),CD8^+水平低于对照组(P<0.05)。治疗1年后,观察组的疗效优于对照组(Z=2.194,P=0.028);观察组生存质量优于对照组(Z=2.145,P=0.032),化疗相关不良反应(血液毒性、胃肠道反应、肝肾毒性和脱发)少于对照组(均P<0.05)。结论甘露聚糖肽序贯联合奥沙利铂和多西他赛治疗卵巢癌,能增强患者免疫功能,提高疗效,减少化疗不良反应,改善生存质量。

FTS理念对胃癌腹腔镜术后病人免疫功能影响

目的探讨加速康复外科（FTS）理念对行腹腔镜胃癌根治术病人术后免疫功能影响。方法 2012年10月—2014年10月,于青岛大学附属医院普通外科选择因远端胃癌行腹腔镜下根治性远端胃切除术的病人80例,随机分为FTS组和对照组。FTS组采用FTS理念指导围手术期处理,对照组给予传统的围手术期处理。比较两组病人术后1、3dC反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）以及T细胞亚群（CD3^＋、CD4^＋T细胞及CD4^＋/CD8^＋）水平。结果两组病人术前各指标差异均无显著性（P〉0.05）。术后1d,两组病人CRP水平均较术前增高,但FTS组低于对照组（t=2.032,P〈0.05）。术后1、3d,两组病人IL-6水平均高于术前,但FTS组低于对照组（t=2.248、2.368,P〈0.05）。术后1、3d,两组病人IgM水平均较术前下降,对照组下降更为明显（t=2.832、2.444,P〈0.05）。术后1、3d,两组病人CD3^＋和CD4^＋T细胞、CD4^＋/CD8^＋均明显低于术前,除术后3dCD3^＋T细胞外,对照组下降更为明显（t=2.152-4.744,P〈0.05）。结论应用FTS理念指导腹腔镜手术,能够减轻胃癌病人术后炎症反应,保护机体的免疫功能,可能对病人的术后康复及预后起到积极作用。

胃癌患者HLA-Ⅰ表达水平与免疫活性细胞反应及预后的相关性

目的分析胃癌患者癌组织中人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达水平与免疫活性细胞反应及预后之间的相关性。方法选取我院2014年12月-2016年12月收治的临床资料完整、手术切除的胃癌组织(胃癌组织组)和配对正常胃组织(正常胃组织组)为研究对象,每组80例。利用免疫组化技术检测2组HLA-Ⅰ、CD11c+树突状细胞、CD45RO+记忆性T细胞、CD8+细胞毒性T淋巴细胞阳性表达情况,并分析HLA-Ⅰ表达水平与树突状细胞、记忆性T细胞、细胞毒性T淋巴细胞表达及胃癌预后的相关性。结果胃癌组织组HLA-Ⅰ、CD11c+树突状细胞、CD45RO+记忆性T细胞、CD8+细胞毒性T淋巴细胞阳性表达率均低于正常胃组织组(P <0.05)。HLA-Ⅰ的表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期、CD11c+树突状细胞、CD45RO+记忆性T细胞、CD8+细胞毒性T淋巴细胞表达有关(P <0.05)。淋巴结转移、Ⅲ/Ⅳ期、3种免疫活性细胞阴性表达、HAL-Ⅰ阴性表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P <0.05)。结论胃癌组织中HLA-Ⅰ阴性表达与胃癌局部浸润的免疫活性细胞反应降低有关,并且具有成为预警淋巴结转移及预后生物标志物的潜在价值。

二甲肼诱发大鼠大肠癌时下丘脑、垂体及脑桥ir－β－EP含量的变化

应用放射免疫法测定了二甲肼（ＤＭＨ）诱发大鼠大肠癌过程中下丘脑、垂体及脑桥组织中β－内啡肽样免疫活性物质（ｉｒ－β－Ｅｎ含量变化。结果显示：肿瘤组动物下丘脑ｉｒ－β－ＥＰ含量显著高于对照组；增生组下丘脑、垂体ｉｒ－β－ＥＰ含量亦显著升高；各组脑桥组织中ｉｒ－β－ＥＰ含量无明显变化。提示中枢神经系统中下丘脑－垂体轴分泌的β－内啡肽（β－ＥＰ）可能参与了大肠癌的发生、发展过程。

树突状细胞对免疫活性细胞抑癌效应的非限制性增强作用

目的研究抗原负载的树突状细胞(dendritic cell,DC)对免疫活性细胞抑癌的增强作用。方法在建立PC体外扩增的基础上,将抗原负载的DC作用于单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞,观察其对人肺癌GLC-82和A549细胞的体外和裸鼠体内抑癌效应。结果抗原负载的DC能显著增强单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞对GLC-82和A549细胞的抑制作用。当效靶化为10∶1时,抗原负载的DC-单个核细胞对GIC-82及A549细胞抑制率分别为100%和94.2%;而对照组分别为16%和8%。该作用不受主要组织相容性复合物基因(major histocompatibility com-plex,MHC)限制。结论抗原负载的DC对免疫活性细胞的抑癌作用有MHC非限制性增强效果。

喉癌与肺结核

目的 :探讨喉癌与肺结核的关系。方法 :分析 78例喉癌患者的临床资料。结果 :本组病例中合并肺结核 14例 ,发生率为 17.95 % ,而同期非喉癌患者肺结核发生率为 1.30 % ,两组肺结核发病率差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,14例喉癌合并肺结核患者 ,11例行PPD皮内试验 ,结果均为阴性。 结论 :喉癌与肺结核并存于机体 ,细胞免疫功能紊乱是内在联系 ,肺结核为喉癌发病的危险因素。

乌苯美司胶囊在三阴乳腺癌化疗中的临床价值

目的观察乌苯美司胶囊在三阴乳腺癌化疗过程中对患者免疫功能的影响和对骨髓抑制的干预。方法选择72例三阴乳腺癌患者入组,随机分为治疗组(40例)和对照组(32例)。两组临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。患者均行EC(表柔比星、环磷酰胺)-T(多西他赛)的方案化疗。治疗组在化疗期间及化疗后6月内均加服乌苯美司胶囊30 mg每天清晨空腹1次,治疗组与对照组其他辅助用药相同。采用流式细胞法检测EC-T化疗前、后及化疗结束后6月患者静脉血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK细胞)免疫功能和外周全血细胞指标的变化,评估乌苯美司胶囊在三阴乳腺癌化疗中对T抑制、杀伤淋巴细胞以及NK细胞和外周全血细胞的作用。结果比较EC-T化疗前、后及化疗后6月T抑制/杀伤淋巴细胞(CD3、CD4、CD8、CD19)、自然杀伤细胞(CD16、CD56)变化的差异性,治疗组与对照组差异有统计学意义(均P<0.05)。比较EC-T化疗前、后及化疗后6月外周全血细胞(WBC、RBC、PLT)变化的差异性,治疗组与对照组差异有统计学意义(均P<0.05)。结论乌苯美司胶囊在三阴乳腺癌患者化疗过程中的应用改善化疗药物对患者免疫功能的影响,减轻骨髓抑制的程度,保障患者顺利完成整个化疗过程,减轻化疗药物的近期和远期不良反应。