50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响

目的研究50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响。方法Neuro2a/APP(695)细胞简单随机分为假性辐照组和磁场暴露组(n=3)。暴露条件为1.0 mT 50 Hz正旋波磁场,4 h/d,连续3 d;假性辐照组细胞除无磁场暴露外,余同磁场暴露组。暴露结束后按标准方法送样,进行转录组测序检测,包括样品RNA提取、数据质量评价和数据分析等。结果50 Hz磁场暴露后Neuro2a/APP(695)细胞有141种定性的基因表达发生了明显的变化,其中有129种表达上调、12种表达下调。GO富集分析结果显示,Neuro2a/APP(695)细胞中62种上调差异表达基因涉及432类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程337类、细胞组分16类、分子功能79类;3种下调差异表达基因共涉及275类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程260类、细胞组分5类、分子功能10类。KEGG通路分析显示,这些差异基因可能参与了20条KEGG通路,其中2个下调差异表达基因通路,18个上调差异表达基因通路。结论50 Hz磁场暴露可能对Neuro2a/APP(695)细胞的黏附连接、Hippo信号通路、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素、蛋白消化和吸收和甘露糖型O-聚糖生物合成等方面产生影响,以上通路可能是50 Hz磁场对Neuro2a/APP(695)细胞产生影响的主要途径。

黄芩苷对Neuro2A细胞氧糖剥夺的保护作用

目的观察黄芩苷对体外培养小鼠神经母细胞瘤Neuro2A细胞株氧糖剥夺所致损伤的保护作用。方法利用体外培养的Neuro2A细胞,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧,用不同浓度的黄芩苷作用于Neuro2A细胞,应用Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,应用四唑盐(MTT)法检测细胞的活性。结果黄芩苷在6.25,12.5,25μmol.L-1的浓度范围之内,可对缺血缺氧Neuro2A细胞起到保护作用,主要是减少细胞早期凋亡。结论在一定浓度范围之内黄芩苷可保护缺血缺氧Neuro2A细胞,提示对缺血性脑损伤有保护作用,值得进一步研究。

酒精对小鼠脑神经瘤细胞Neuro2a增殖的影响

目的探讨酒精通过控制中心体增长影响小鼠脑神经瘤细胞Neuro2a增殖的机制。方法免疫荧光细胞计数检测酒精对细胞周期进程的改变;免疫荧光法检测酒精对纺锤体表型以及对外源性和内源性中心体蛋白P4.1相关蛋白(CPAP)中心体定位浓度的影响。结果 100 mmol/L酒精处理Neuro2a细胞96 h后,阻碍了细胞周期的进程,减少了进入有丝分裂期的细胞量;有丝分裂期纺锤体的表型出现多种异常;酒精通过降低中心体上内源性和外源性CPAP的定位浓度,抑制了中心体的增长。结论酒精抑制CPAP在中心体增长中的功能,导致有丝分裂期纺锤体排列异常,从而阻止细胞进入有丝分裂期,引起Neuro2a细胞数量减少。

miR-16促进Neuro2a细胞的凋亡

目的检测过表达miR-16对小鼠Neuro2a细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-16在肿瘤发病过程中的可能机制。方法 构建能够在细胞中过表达miR-16的真核表达载体pcDNA3.1-miR-16,利用Real-time PCR验证了表达载体的过表达效应。应用pcDNA3.1-miR-16载体转染Neuro2a细胞,利用流式细胞术和TUNEL法检测Neuro2a细胞周期及凋亡改变情况。结果 转染过表达pcDNA3.1-miR-16载体后,成熟的miR-16表达与对照组相比明显升高(P<0.05)。在Neuro2a细胞中过表达miR-16后,用流式细胞术检测发现,Neuro2a细胞周期未见明显改变,与对照组相比,凋亡细胞数量有显著增加;进一步通过TUNEL法验证,发现miR-16的过表达能够促进Neuro2a的细胞凋亡。结论 过表达miR-16能够显著促进Neuro2a细胞凋亡而对细胞周期并无影响,提示miR-16可能对肿瘤治疗起作用。

B型肉毒毒素轻链荧光表达细胞模型的构建及应用

目的 构建B型肉毒毒素轻链(BoNT/B,BLC)荧光表达细胞模型,并用于小分子化合物效应评价。方法 将BLC基因导入荧光表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒,并将其转染至神经细胞系Neuro-2a细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察细胞内BLC-EGFP蛋白荧光表达水平,利用Western印迹法检测细胞中BLC-EGFP的酶切活性和稳定性,进一步利用该模型评价SRC激酶抑制剂KX2-391对BLC-EGFP蛋白胞内稳定性的影响。结果 成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-BLC。质粒转染后,BCL-EGFP蛋白在Neuro-2a细胞中的表达水平随时间逐渐增加并具有酶切胞内底物囊泡相关蛋白-2(VAMP-2)的活性;质粒转染12 h后加入CHX终止蛋白合成,BLC-EGFP的胞内水平在72 h内无显著变化;加入KX2-391作用24 h后,可显著促进BLC-EGFP蛋白的胞内降解。结论 成功建立B型肉毒毒素轻链荧光表达细胞模型,为后续B型肉毒毒素轻链胞内持留机制研究和胞内解毒剂筛选提供了技术储备。

人参皂苷Re对瞬时转染APPswe N2a细胞内β2-肾上腺受体及β-样淀粉蛋白肽的影响

目的:研究人参皂苷Re对瞬时转染瑞典型突变淀粉样前体蛋白(APPswe)cDNA的小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)内β2-肾上腺受体(β2-AR)及β-样淀粉蛋白肽(Aβ)的影响。方法:瞬时转染APPswe质粒入N2a细胞24h后,加入1、10及100μmol/L浓度的人参皂苷Re处理细胞24h后收集细胞。应用点印迹检测4G8(识别Aβ17-24片段)的表达,免疫印迹检测APP、β2-AR、β2-AR丝氨酸346位点磷酸化(pS346-β2-AR)和β2-AR苏氨酸68位点磷酸化(pT68-β2-AR)的表达,并采用免疫细胞化学技术分析统计pS346-β2-ARβ及β2-AR的染色强度。结果:瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达较pcDNA组增强(P<0.05),pT68-β2-AR的表达较pcDNA组减弱(P<0.05)。与APPswe组比较,1、10、100μmol/L的人参皂苷Re可降低pS346-β2-AR的表达(P<0.01),人参皂苷Re不能逆转pT68-β2-AR的表达水平。免疫细胞化学统计显示,转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR染色强度较对照组显著增强(P<0.05),人参皂苷Re可减弱其表达。β2-AR的表达在各组无显著差异。转染APPswe质粒的N2a细胞内APP及4G8的表达较对照组显著增加(P<0.01);与APPswe组比较,比较,100μmol/L的人参皂苷Re可减少APP蛋白的表达(P<0.05),10μmol/L及100μmol/L的人参皂苷Re降低4G8表达(P<0.05)。结论:人参皂苷Re可降低瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达水平,并显著减少该细胞内APP及Aβ的表达,改善AD的基本病变。