血管性痴呆与神经束蛋白155的相关性研究

目的:探讨慢性脑缺血致血管性痴呆与神经束蛋白155的相关性。方法:2013年12月-2014年5月期间选用Wistar大鼠40只,随机分为模型组24只、对照组12只。模型组大鼠使用双侧颈总动脉永久结扎法(2VO)制备慢性前脑缺血致血管性痴呆动物模型,对照组仅手术而不行双侧颈总动脉结扎。使用Morris水迷宫对各组大鼠手术前和手术后的记忆行为数据进行检测。比较手术前后及各组间逃避潜伏期的差异,明确模型组大鼠是否达到痴呆。术后30 d和60 d取大鼠脑组织并制成匀浆,使用ELISA检测各组NF155的表达情况。结果:造模前模型组小鼠逃避潜伏期与假手术对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,术后30 d组第6天开始,逃避潜伏期均明显长于假手术对照组,差异均有统计学意义(t=2.667、6.812、8.743、10.775;P=0.014、0.000、0.000、0.000);术后60 d组第5天开始,逃避潜伏期均明显长于假手术对照组,差异均有统计学意义(t=3.016、4.137、7.562、7.910、12.686;P=0.006、0.000、0.000、0.000、0.000)。经ELISA检测显示模型30 d组及60 d组大鼠NF155浓度分别为(48.27±7.32)、(37.65±6.88)ng/m L,与假手术对照组(85.07±6.75)ng/m L比较,差异均有统计学意义(P<0.05),说明模型组大鼠脑内NF155的含量较对照组明显下降。结论:脑内NF155含量的变化有可能参与了慢性缺血所致血管性痴呆的发生。

神经束蛋白155高表达少突胶质细胞模型的构建

目的构建神经束蛋白155(neurofascin155,NF155)高表达的少突胶质细胞模型。方法 RT-PCR法提取NF155 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与pUM-T simple重组,构建NF155慢病毒载体质粒,NheⅠ、AgeⅠ双酶切后,片段大小及基因测序均显示NF155慢病毒载体质粒构建成功。取对数生长期少突胶质细胞分为空白对照组、阴性慢病毒感染组、NF155慢病毒感染组,空白对照组不做任何处理,阴性慢病毒感染组予10 μL空载体慢病毒+100 μL培养基,NF155慢病毒感染组予10 μL慢病毒载体质粒+100 μL培养基。培养12 h采用荧光定量PCR法检测NF155 mRNA,采用Western blotting法检测NF155蛋白。结果 NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量分别为3.25±0.11、1.00±0.06、1.08±0.01,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量升高( P 均<0.05)。NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155 蛋白相对表达量分别为1.57±0.08、0.51±0.12、0.50±0.06,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155蛋白相对表达量升高( P 均<0.05)。结论 成功构建NF155高表达的少突胶质细胞瞬转细胞模型。