鱼类神经激肽B生理功能及其分子机制

神经激肽B(Neurokinin B,NKB)是由tac3基因编码的一种下丘脑神经肽,属于Tachykinin家族重要成员之一,主要在脑中高表达,但也表达于外周组织中,通过其受体NK3R介导参与了哺乳动物多种生理功能。目前,已在斑马鱼(Danio rerio)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)等硬骨鱼中鉴定出NKB系统,并且NKB能够参与调节鱼类生殖和摄食等重要生理活动。本文对既有硬骨鱼NKB系统研究进行简要总结,从NKB及其受体基因鉴定、组织分布、生理功能、信号转导机制等方面进行全面概括讨论,以增加对鱼类NKB系统的认识和了解,以期为后续研究提供参考。

甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB动态变化及HPO轴NK3R的表达

为探讨神经激肽B(NKB)和神经激肽B受体(NK3R)在甘加型藏羊(Ovis aries)繁殖调控中的作用,本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blot)和免疫组织化学(IHC)方法,对甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB含量、下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴组织NK3R mRNA及蛋白的表达和分布进行检测。结果表明,甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆中NKB含量呈动态变化,NKB平均含量在发情期最低、间情期最高,二者差异显著(P<0.05),发情周期各时期的NKB含量均高于乏情期。发情周期和乏情期HPO轴组织均有NK3R mRNA和蛋白表达,且各时期表达存在差异,下丘脑中发情前期NK3R mRNA表达量最高,显著高于发情期、发情后期、间情期和乏情期(P<0.05),NK3R蛋白在发情后期表达量最高;垂体中间情期NK3R mRNA表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05),NK3R蛋白在发情期表达量最高;卵巢组织中NK3R mRNA和蛋白表达趋势一致,均在发情前期表达量高;NK3R蛋白主要分布于下丘脑神经内分泌小细胞和神经胶质细胞,垂体嗜酸性细胞、嫌色细胞、嗜碱性细胞,卵巢颗粒层细胞、卵泡膜、黄体细胞中。以上结果表明,NKB与HPO轴特异性受体NK3R结合,参与调节甘加型藏羊生殖内分泌和周期性发情等生殖活动。本研究结果可为深入探究藏羊繁殖调控机理提供科学依据。

NKB及其受体NK3R基因在发情周期不同阶段小鼠下丘脑-垂体-卵巢中的表达研究

为了揭示NKB/NK3R调控雌性哺乳动物生殖激素分泌的作用机制,试验将40只6~8周龄雌性小鼠按照发情周期不同阶段分类,处死后采集丘脑、垂体和卵巢组织,提取RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测发情周期各阶段小鼠下丘脑、垂体和卵巢中NKB、NK3R基因的相对表达量并进行比较分析。结果表明:在发情前期和发情期,小鼠NKB基因的相对表达量均为垂体最高,卵巢居中,下丘脑最低;在发情后期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,垂体居中和卵巢最低;在发情间期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,卵巢居中,垂体最低。NK3R基因的相对表达量在发情前期、发情期、发情后期和发情间期的趋势一致,均为下丘脑最高,垂体居中,卵巢最低。各组织中,NK3基因的相对表达量均为发情前期最高,发情期居中,发情后期和发情间期较低。在下丘脑中,发情周期不同阶段NK3R基因的相对表达量差异不大;在垂体和卵巢中,NK3R基因的相对表达量均为发情后期最高,发情间期居中,发情前期和发情期较低。提示NKB/NK3R可能参与了雌性哺乳动物发情周期各阶段生殖激素的合成与分泌。

知柏地黄丸联合醋酸亮丙瑞林治疗儿童中枢性性早熟的疗效及血清神经激肽B、脂联素水平变化

目的:探究知柏地黄丸联合醋酸亮丙瑞林治疗儿童中枢性性早熟(CPP)的疗效及对血清神经激肽B(NKB)、脂联素(ADPN)等指标的影响。方法:选取2020年6月~2022年1月某院收治的100例CPP女性患儿为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,各50例。对照组给予醋酸亮丙瑞林,观察组在对照组治疗基础上加用知柏地黄丸,两组均治疗6个月。比较两组临床疗效、不良反应发生情况以及治疗前后卵巢/子宫容积、卵泡直径、性激素指标[雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)]、血清NKB、ADPN、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,并测量体重指数(BMI)与骨龄指数(BAI)。结果:观察组治疗总有效率(94.00%)高于对照组(80.00%,P<0.05)。与治疗前相比,两组治疗后卵巢/子宫容积、卵泡直径、E_(2)、FSH、LH、IGF-1水平及BAI均下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组NKB水平低于对照组(P<0.05),ADPN水平高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:知柏地黄丸联合醋酸亮丙瑞林治疗儿童CPP安全有效,能明显抑制骨龄增长速度,其机制可能与改善性激素、降低血清NKB、提高ADPN水平有关。

神经激肽B受体在小鼠中枢神经系统内的定位分布

目的 研究神经激肽B受体 (NK3)在小鼠中枢神经系统内的定位分布。 方法 免疫组织化学染色。 结果 在小鼠中枢神经系统的绝大部分区域 ,NK3受体样免疫反应产物位于胞体和树突上 ,少部分区域位于神经毡 (neuropil)内。大量NK3受体样免疫反应神经元出现于前嗅核、伏隔核、隔区、腹侧苍白球、苍白球、尾壳核、终纹床核、下丘脑前区、下丘脑结节区、下丘脑外侧区、穹隆周区、视上核、弓状核、乳头体、黑质、腹侧被盖区、红核后区、上丘和下丘、导水管周围灰质、孤束核、及延髓和脊髓背角浅层。大脑皮质的浅层、梨状皮质、背侧海马、杏仁核、脑干网状结构等核团内也含有一定数量的阳性神经元。在丘脑的中线核团和板内核、腹侧海马和脚间核等处 ,NK3受体免疫反应产物主要位于神经毡内。 结论 NK3受体广泛分布于小鼠中枢神经系统内 。

神经激肽B在犬生殖轴上的表达

【目的】研究神经激肽B(NKB)在犬生殖轴上的表达规律。【方法】以仔犬期、幼犬期、初情期母犬及成年公犬、母犬为研究对象,颈动脉放血处死后取其下丘脑、垂体、睾丸和卵巢,其中成年公、母犬的样本进行NKB免疫组化试验,观察NKB分布情况并拍照;仔犬期、幼犬期、初情期和成年期母犬样本进行RT-qPCR试验,以GAPDH为内参,测定样本中目的基因Tac3 mRNA的表达量。【结果】NKB主要分布于下丘脑外侧区和视上核、腺垂体、卵巢卵泡颗粒层细胞和卵母细胞及睾丸的间质组织和生精细胞,而神经垂体中未见分布。在母犬下丘脑、垂体和卵巢中,Tac3 mRNA表达量均表现为从仔犬期至初情期逐渐上升,于初情期达最高水平,至成年期又有所下降,且与其他各发育阶段差异显著(P<0.05)。【结论】NKB可能参与母犬初情期的启动。

妊娠期高血压孕妇胎盘组织中神经激肽B、胎盘生长因子的表达

目的:探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)孕妇胎盘组织中神经激肽B(NKB)、胎盘生长因子(PLGF)的表达及其与疾病发生发展的关系。方法:采用免疫组化法检测50例HDCP患者(妊娠期高血压患者15例,子癎前期轻度患者15例,子癎前期重度患者20例)及20例正常孕妇胎盘组织中NKB与PLGF蛋白定位及定量表达情况。结果:NKB蛋白及PLGF蛋白主要分布在绒毛合体滋养细胞和间质细胞的胞质,HDCP组胎盘NKB蛋白的表达高于正常组(平均灰度值分别为109.89±13.04和90.02±3.17,P<0.05),PLGF蛋白的表达低于正常组(平均灰度值分别为82.86±8.34和101.81±4.40,P<0.05);随着病情的加重,合体滋养细胞NKB的表达水平明显升高,PLGF表达水平明显降低(P<0.05)。结论:胎盘组织中NKB和PLGF蛋白的异常表达可能与HDCP的发生发展有关。

神经激肽B在支气管哮喘中的含量变化

目的 :研究哮喘患儿血浆中及哮喘豚鼠模型肺组织中神经激肽B (NKB)含量变化规律 ,探讨NKB与小儿哮喘发病机制的关系。方法 :酶联免疫方法测定 35例不同程度哮喘患儿血浆NKB在哮喘急性发作期及症状缓解期的含量变化 ;在豚鼠哮喘模型上对不同哮喘状态豚鼠肺组织中的NKB含量进行检测和对比分析。结果 :( 1)哮喘患儿急性发作期血浆NKB含量较其自身症状缓解期及正常对照组均明显增高 (P <0 .0 1) ;症状缓解期血浆NKB含量仍高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;( 2 )病情加重 ,患儿血浆NKB含量随之增高 ,与哮喘病情呈显著正相关。重度哮喘急性发作期较轻、中度哮喘急性发作期血浆NKB含量显著增高 (P <0 .0 5 ) ;重度哮喘与轻、中度哮喘缓解期比较 ,血浆NKB含量无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;( 3)哮喘豚鼠肺组织中NKB含量较正常豚鼠显著增高 (P <0 .0 1) ,反复诱喘豚鼠肺组织中NKB含量显著高于诱喘 1次豚鼠 (P <0 .0 1)。结论 :NKB在哮喘患儿血浆及哮喘豚鼠肺组织中的含量变化规律一致 ,与哮喘病情呈显著正相关。

下呼吸道及循环血液中的NKA和NKB

应用放射免疫分析方法,测定健康豚鼠下呼吸道及循环血液中神经激肽A(NKA)和神经激肽B(NKB)的含量。结果表明,两种肽的免疫反应存在于气管、支气管、肺组织和血液中,其中NKA的含量明显高于NKB。它们在肺内的含量最高,支气管次之,气管最低。实验结果为探讨NKA和NKB在呼吸道的功能和呼吸系疾病中的作用提供了理论依据。

SP、NKA、NKB和CGRP免疫反应纤维在豚鼠气管和支气管淋巴结内的定位

应用ABC免疫酶组织化学方法,在16只豚鼠的气管和支气管淋巴结内观察到SP、NKA、NKB和CGRP免疫反应神经纤维,4种阳性神经纤维在淋巴结内的分布基本相同。镜下可见阳性反应纤维分布于淋巴结的皮质和髓质,血管周围的区域中纤维数量较多,远离血管的区域纤维数量较少,血管壁内也见阳性纤维。阳性纤维还分布于淋巴窦周围和淋巴结被膜内。本研究证明的淋巴结内的4种肽能神经纤维,可能是这些神经肽类物质参与神经免疫调整机制的形态学依据。

大鼠下丘脑室旁核和视上核内神经激肽B受体和加压素的共存研究

目的研究神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）免疫反应产物在大鼠下丘脑室旁核和视上核的分布及其与加压素的共存。方法免疫组织化学染色，标本在光镜和电镜下观察。共存研究采用相邻切片染色法。结果致密的ＮＫ３受体阳性产物分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部。免疫电镜观察发现ＮＫ３受体阳性反应产物出现于室旁核和视上核的胞体和树突内。在相邻切片上观察到室旁核和视上核内有相当数量的ＮＫ３受体阳性神经元，同时含有加压素，它们主要分布于室旁核的后大细胞部和视上核的主部。结论根据本研究和以往的机能学的研究结果，推测下丘脑室旁核和视上核内的ＮＫ３受体阳性神经元可能参与调控机体内环境改变时下丘脑加压素的释放。

神经激肽B在成年大鼠基底前脑Nestin阳性神经元的表达

目的观察基底前脑Nestin-IR神经元是否表达神经激肽B(NKB),探讨基底前脑Nestin-IR神经元的递质属性。方法应用免疫组织化学双标染色方法,观察10只SD大鼠基底前脑的Nestin-IR神经元是否表达NKB。结果Nestin-IR神经元和NKB-IR神经元间杂分布于隔-斜角带(MS-DBB)复合体,两者数量相当。双标神经元在内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)和斜角带水平支(hDB)占Nestin-IR神经元的比例分别为31.5%(27.2%～35.5%)、17.2%(12.9%～22.1%)和23.3%(18.7%～27.4%),占NKB-IR神经元的比例分别为13.1%(9.8%～16.6%)、15.7%(11.2%～20.3%)和32.9%(26.5%～40.1%)。结论成年大鼠基底前脑部分Nestin-IR神经元表达NKB。

高渗刺激诱导大鼠下丘脑室旁核和视上核神经激肽B受体阳性神经元表达Fos

目的研究神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）与机体渗透压调节之间的可能关系。方法用双重免疫组织化学染色技术，高渗刺激采用静脉内注射１．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的方法，观察了下丘脑室旁核和视上核内ＮＫ３受体阳性神经元在高渗刺激下的Ｆｏｓ表达情况。结果高渗盐水可诱导下丘脑室旁核和视上核内大量神经元表达Ｆｏｓ。在室旁核，双标细胞约占ＮＫ３受体阳性神经元的８８％，约占Ｆｏｓ阳性细胞的７１％；在视上核的主部，双标细胞约占ＮＫ３受体阳性神经元的７４％，约占Ｆｏｓ阳性细胞的４３％。结论室旁核和视上核内ＮＫ３受体阳性神经元可能参与大鼠渗透压调节过程。

实验性哮喘下呼吸道神经激肽B免疫反应纤维

用免疫组织化学方法研究了神经激肽B免疫反应纤维在实验性哮喘豚鼠下呼吸道的变化。在气管和支气管,实验组一抗最佳稀释浓度为1:1500,对照组为1:1000,当两组的一抗浓度均为1:1500时,两者的神经激肽B免疫反应纤维见于平滑肌层,上皮内、上皮和平滑肌交界处以及外膜层,实验组的纤维数量明显多于对照组。在肺组织,实验组一抗最佳稀释浓度为1:2000,对照组为1:1500,当一抗稀释浓度均为1:2000时,两组的神经激肽B免疫反应纤维主要见于肺内各级支气管平滑肌层、血管壁平滑肌层、血管周围结缔组织和肺泡隔内,但实验组的阳性纤维数量明显比对照组多。

子痫前期胎盘、脐血管中神经激肽B表达及组织病理变化的研究

目的研究子痫前期患者胎盘、脐血管中神经激肽B(neurok in in B,NKB)的表达及组织的病理变化情况。方法采用SP法对轻、重度子痫前期组共40例和正常妊娠组20例的胎盘和脐血管组织进行NKB的免疫组化染色,观察各组NKB的定位、分布和表达量的差异。同时常规HE染色观察各组胎盘、脐血管的病理变化。结果NKB在各组胎盘合体滋养细胞、毛细血管内皮细胞、脐静脉内皮细胞中均有不同程度的表达。轻、重度子痫前期胎盘组织中,其NKB含量明显高于正常组(P<0.05,P<0.01),HE染色可见子痫前期组细胞滋养细胞增生,合体细胞结节、纤维素样坏死显著增多等病理变化,与正常组相比有显著性差异。结论胎盘可能是NKB的重要产生释放部位。且NKB可能通过某些直接或间接的途径,参与了子痫前期损伤和代偿并存的复杂变化,在子痫前期的发生发展中起着重要作用。

炎性痛大鼠脊髓背角内神经激肽B受体的动态变化

目的 观察神经激肽 B受体 (NK3)与大鼠脊髓内伤害性信息传递和调控的可能关系。 方法 用免疫组织化学技术观察完全弗氏佐剂 (CFA )诱发慢性炎性痛大鼠脊髓背角神经激肽 B受体的动态变化。 结果 炎症侧腰骶段脊髓背角 NKB受体样免疫反应结构的染色强度有明显升高 ,背角浅层尤为显著。经时观察与图像分析结果表明 ,注射 CFA 2 d后脊髓背角内免疫染色强度即开始升高 ,2 1d左右抵达高峰 ,2 8d后渐恢复至正常水平。结论 NKB受体可能参与炎性慢性痛状态下伤害性信息在脊髓水平的传递与整合过程。

大鼠下丘脑内神经激肽B受体阳性神经元向孤束核的直接投射

为了研究神经激肽Ｂ（ＮＫＢ）可能的升压途径，用免疫荧光组织化学方法结合荧光金（ＦＧ）逆行追踪技术研究了下丘脑内神经激肽Ｂ受体（ＮＫＲ）阳性神经元向孤束核（ＮＴＳ）的投射。ＦＧ微量注射于ＮＴＳ后，ＦＧ逆标细胞主要分布于下丘脑背侧区、室旁核、穹窿周区、外侧区的背侧部和腹外侧部；而ＮＫＲ阳性细胞主要出现于下丘脑的背侧区、室旁核、穹窿周区、外侧区的中段、视上核和乳头体内侧核的内侧亚核。免疫荧光染色结果显示：双标神经元分布在下丘脑背侧区、穹窿周区、外侧区的背侧部和腹外侧部，主要为圆形或椭圆形的中型细胞。双标细胞占ＦＧ标记细胞总数的１１．２％、占ＮＫＲ阳性细胞总数的１１．９％。研究结果显示：下丘脑内部分ＮＫＲ阳性神经元投射至ＮＳＴ，这些投射神经元可能具有调节血压的作用。

神经激肽B受体在猫三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓内的分布

目的了解神经激肽Ｂ受体（ＮＫ３受体）与伤害性信息的传递和调制的可能关系，调查ＮＫ３受体在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布状况。方法免疫组织化学技术。结果ＮＫ３受体样免疫反应产物在三叉神经尾侧亚核和脊髓内的分布基本一致。致密的免疫反应产物分布于Ⅱ内层（ｉｎｎｅｒｐａｒｔ），而Ⅰ层和Ⅱ外层（ｏｕｔｅｒｐａｒｔ）染色浅淡。ＮＫ３受体阳性神经元胞体主要见于三叉神经尾侧亚核和脊髓的Ⅰ层和Ⅱ层，少量分布于脊髓后角深层。

神经激肽B受体在小鼠消化道内的定位

采用免疫组织化学ABC染色方法研究了神经激肽B受体 (NK3r)在小鼠消化道的分布。NK3r样阳性的神经元胞体及神经纤维主要分布在十二指肠、空肠、回肠及结肠的粘膜下层神经丛和肌间神经丛 ,NK3r样阳性产物在食管、胃和直肠的神经丛中未见分布 ;NK3r样阳性产物大部分局限于神经细胞表面 ,也存在于胞质和一些轴突内部 ,并在胞质中较细胞表面染色浅。统计结果表明NK3r样免疫阳性神经元占肠神经系统神经元总数的 0 5 %～ 1%。

大鼠延髓内神经激肽B受体神经元对腹膜伤害性刺激的Fos表达──免疫组织化学双重染色研究

为探讨神经激肽Ｂ受体（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎｂｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＮＫＲ）神经元在大鼠延髓的定位及其在腹膜伤害性传入信息整合中的作用。应用免疫组织化学双重染色方法，显示ＮＫＲ神经元的分布并观察它们对腹膜化学伤害性刺激的Ｆｏｓ表达。结果表明：ＮＫＲ样免疫反应（ＮＫＲ－ＬＩ）神经元主要分布在孤束核（Ｓｏｌ）、延髓腹外侧区（ＶＬＭ）、三叉神经脊束核尾侧亚核（Ｓｐ５Ｃ）浅层和三叉旁核（Ｐａ５）。腹膜伤害性刺激激诱导的Ｆｏｓ表达神经元多数分布在Ｓｏｌ、ＶＬＭ、Ｐａ５和最后区。Ｓｏｌ、ＶＬＭ和Ｐａ５中约３０．１％的ＮＫＲ－ＬＩ神经元同时呈Ｆｏｓ样免疫反应。本研究提示：延髓内上述核团ＮＫＲ－ＬＩ神经元与腹膜伤害性初级传入信息的整合有关，可能参与内脏伤害性刺激的抗伤害性感受（ａｎｔｉ－ｎｏｃｅｃｉｐｔｉｏｎ）过程。