准分子激光切削脉络膜制备视网膜神经上皮和色素上皮联合植片

目的应用准分子激光微切削脉络膜获得视网膜神经上皮及色素上皮联合移植片。方法将PN1-6广西巴马猪眼球冰浴下祛除巩膜、前节和玻璃体,环钻制成视网膜神经上皮-色素上皮-脉络膜复合体。将复合体脉络膜面向上平铺于直径7mm圆形明胶片上,置于无菌培养皿中。采用准分子激光鹰视酷眼系统,准分子激光角膜原位磨镶术(laserin situkeratomileusis,LASIK)和光治疗性角膜切削术(phototherapeutic keratectomy,PTK)模式发射,切削区域直径为6·5mm。LASIK模式矫正范围-2·64^-4·44D;PTK模式切削深度45~75μm。将切削后的标本浸泡于4%多聚甲醛中固定2~3d,石蜡包埋、切片、HE染色。结果使用LASIK模式矫正-4·44D相当于PTK模式切削深度67μm,可见被切削的脉络膜边缘到达RPE基底膜;而使用LASIK模式矫正-3·00D或PTK模式切削45μm时,都仅能祛除脉络膜主体。在判断切削终点上,PTK模式较LASIK模式容易。结论准分子激光切削脉络膜可获得较好的视网膜神经上皮和色素上皮联合移植片,避免了用酶消化对视网膜神经上皮的破坏。LASIK和PTK模式都可以到达所需切削的脉络膜深度,但PTK模式更适合这种取材方法。切削深度的变化应当考虑固定方法、组织的含水量及个体间脉络膜厚度的变化等因素。

准分子激光切削脉络膜制作视网膜神经上皮-色素上皮联合移植片

目的：应用193 nm准分子激光切削脉络膜获得视网膜神经上皮-色素上皮联合移植片。方法：将胚胎21-24 d胎兔眼球冰浴下去除巩膜、前节和玻璃体,环钻制成视网膜神经上皮-色素上皮-脉络膜复合体。将复合体脉络膜面向上,平铺于7 mm圆形明胶片上,置于底衬白色的培养皿中。采用193 nm准分子激光治疗性切削术（PTK）模式发射,切削区域直径为6.5mm,能量范围80-130脉冲（pu lses）,以肉眼下切削区域可透见映衬其下的白色为宜。将切削后的标本浸泡于4%多聚甲醛中固定2-3 d,石蜡包埋、切片,苏木精-伊红（H-E）染色。结果：取材近后极部的标本见130脉冲切削脉络膜至视网膜色素上皮细胞（RPE）基底处,残留薄层脉络膜,并见正常复合体的移行带;而80脉冲切削则残留较多脉络膜组织;取材近周边部或赤道部标本,用50-80脉冲切削可去除脉络膜组织。结论：准分子激光切削脉络膜可获得较好的视网膜神经-上皮色素上皮联合移植片,避免了用酶消化对视网膜神经上皮的破坏。本实验胎兔眼取材近后极部激光切削以〈140脉冲为宜,取材近周边部或赤道部标本以50-80脉冲为宜。对不同的供者组织和取材部位,需摸索采用不同的切削点数而获得相同的切削深度。