创伤性肌筋膜触发点的形成对大鼠骨骼肌肌梭内NT-3及受体TrkC的表达影响

目的:确定创伤性肌筋膜触发点的形成对其周围肌梭组织内部蛋白和基因表达水平的影响,并分析触发点牵涉痛临床特点和针刺“打跳”的分子生物学依据。方法:32只7周龄雄性SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组采取对腓肠肌定点钝性打击结合离心运动的模式进行连续8 w造模。造模结束后两组均正常饲养4w。12 w结束后,检测造模成功指标,并在此基础上提取各组腓肠肌触发点组织和非触发点组织,以及各组比目鱼肌、胫骨前肌和跖肌处骨骼肌分别进行NT-3和NT-3的受体TrkC蛋白的免疫印迹学实验和基因的聚合酶链式反应实验。结果:与对照组相比,NT-3蛋白在触发点大鼠内外侧腓肠肌中的含量均表现为降低(P<0.05),而NT-3 mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌、趾肌、胫骨前肌和比目鱼肌中的含量均表现为降低(P<0.05);TrkC蛋白在触发点大鼠内侧腓肠肌、趾肌和胫骨前肌中的含量也均表现为降低(P<0.05),而TrkC mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌和趾肌含量也均表现为降低(P<0.05)。结论:慢性肌筋膜触发点的形成诱发了受累肌和多块关联肌肌梭内NT-3、受体TrkC蛋白和基因的下调。

神经营养因子3促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复

目的:探讨神经营养因子3(NT-3)促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复的作用及其机制。方法:将24只SD大鼠,随机分成假手术组(Sham)、大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)组、MCAO/R+NT-3组。应用改良Garcia评分对各组大鼠进行神经功能评分。应用Western Blot检测各组脑组织中NT-3和LC3B表达。将新生大鼠皮质来源的神经元分成正常组(Normal)、糖氧剥夺(OGD)组、OGD+NT-3组、OGD+NT-3+PF-06273340(TrkC抑制剂)组、OGD+NT-3+ZSTK474(PI3K抑制剂)组、OGD+NT-3+CCT128930(AKT抑制剂)组。应用Western Blot检测神经元中TrkC、p-PI3K、p-AKT及LC3B的水平。观察Normal组、OGD组、OGD+NT-3组中神经元形态变化并应用自噬体荧光染色剂染色,观察神经元自噬现象。结果:通过动物实验发现,NT-3在缺血再灌注损伤的脑组织中表达增多(P<0.05),且应用外源性NT-3治疗后,改良Garcia评分升高(P<0.05),自噬水平减弱(P<0.05)。通过细胞实验发现,NT-3能够抑制缺血缺氧状态下的神经元自噬并且最大限度的维持神经元形态。应用PF-06273340后p-PI3K、p-AKT表达减少(P<0.05)。应用ZSTK474、CCT128930后,NT-3抑制自噬的作用减弱(P<0.05)。结论:NT-3经PI3K/AKT信号通路抑制自噬以维持神经元存活,从而促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复。

NT-3对耳蜗螺旋神经节发育的调控机制研究进展

耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGN)的存活和增殖依赖于各种神经营养因子的调节。SGN的损伤和发育异常均可导致感音神经性耳聋,但SGN无再生能力,听力下降往往很难恢复。因此,对听力下降进行早期干预,防止其不可逆的损伤尤为重要。神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)在耳蜗中高表达并促进SGN的存活、轴突的生长和损伤的修复,这已得到广泛的共识,但对其如何将信息传递到细胞内,从而调节SGN的发育仍然不清楚。本文就NT-3在SGN发育期中作用机制的研究进展作一综述。

白藜芦醇对脑缺血小鼠BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血小鼠的神经保护作用。方法将72只SPF级♂昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、溶剂治疗组、白藜芦醇预治疗组,每组各18只。线栓法制作小鼠大脑中动脉永久性脑缺血模型(permanent middle cerebral artery occlusion,pM-CAO),免疫组织化学法检测脑组织BDNF及NT-3蛋白的表达,RT-PCR技术检测缺血脑组织中BDNF及NT-3的基因水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积的变化,以Zea Longa评分法进行神经功能学评分。结果与模型组及溶剂治疗组相比,白藜芦醇预治疗组梗死区周围BDNF及NT-3的表达水平均明显升高(P<0.01),脑梗死体积明显缩小(P<0.01),且神经功能学评分明显改善(P<0.01)。结论白藜芦醇可增加脑缺血后BDNF及NT-3的表达,减少脑梗死体积,改善神经功能缺损。

灵芝孢子对大鼠脊神经腹根切断后脊髓运动神经元存活及其NT-3、NOS表达的影响

目的探讨灵芝孢子(萌动激活赤灵芝孢子)对大鼠脊髓受损伤运动神经元存活和表达神经营养素_3(NT_3)及一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法对单侧腹根切断后的大鼠胃饲不同剂量的灵芝孢子,计算受损伤运动神经元存活率;用免疫组织化学及原位杂交方法检测NT-3的表达;用酶组织化学方法检测NOS的活性。结果腹根切断后35 d,对照组运动神经元存活率为47.32%,灵芝孢子低、中、高剂量组的运动神经元存活率分别为67.11%、72.67%和81.67%;腹根切断后高剂量组存活的运动神经元NT_3和NOS的表达都高于对照组。结论灵芝孢子促进大鼠脊髓前角受损伤的运动神经元存活,其存活率与用药剂量有关;灵芝孢子促进大鼠脊髓存活的运动神经元表达NT-3和NOS。

APP17肽对D-半乳糖性脑老化模型小鼠学习、记忆功能和海马神经元NT-3、NGF表达的影响

目的与方法 :用D -半乳糖 (D -gal)复制脑老化模型 ,给模型小鼠皮下注射 β -淀粉样肽前体蛋白 319- 335肽段 (APP17p) ,8周后应用水迷宫实验、神经免疫组化法 ,观察APP17肽对D -gal脑老化模型小鼠学习、记忆功能及海马神经元中神经营养因子 3(NT - 3)、神经生长因子 (NGF)表达的影响。结果 :(1)水迷宫实验D-gal组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显高于对照组 ;APP17肽组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显低于对照组和D -gal组。 (2 )APP17肽组海马神经元NT - 3、NGF表达高于C组和D -gal组 (P <0 0 1)。结论 :D-半乳糖性脑老化模型小鼠存在学习、记忆功能障碍 ,其海马神经元NT - 3、NGF表达降低 ;APP17肽有保护模型小鼠学习、记忆功能的作用 ,并能促进其海马神经元NT - 3、NGF表达的增加。

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和

稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系的建立及其意义

目的建立稳定过表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子(NT-3)的脂肪干细胞系并探讨其意义。方法采用胶原酶消化联合差速贴壁法获取大鼠脂肪干细胞,向成骨方向诱导2周、4周后,行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。采用Lenti-BDNF-GFP重组慢病毒液和Lenti-NT-3-RFP重组慢病毒液转染第3代脂肪干细胞,确定最佳感染复数值,按照最佳感染复数值感染脂肪干细胞,建立稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系。结果成功分离和培养的大鼠脂肪干细胞具有多向分化潜能,向成骨方向诱导后,碱性磷酸酶和茜素红染色呈阳性。Lenti-BDNF-GFP重组慢病毒液和Lenti-NT-3-RFP重组慢病毒液转染脂肪干细胞的最佳感染复数值为100,感染时间72 h,共转染组BDNF和NT-3在基因水平和蛋白水平均呈稳定高表达。结论成功建立稳定过表达BDNF和NT-3基因的脂肪干细胞系,这对脊髓损伤的治疗有重要意义,可以解决脂肪干细胞移植治疗脊髓损伤过程中神经因子分泌数量少和半衰期短等问题,为进一步研究脊髓损伤的修复机制提供了实验基础。

pIRES2-NGF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定

构建双基因共表达载体pIRES2-NGF-NT-3并检测其在HEK293细胞中的表达。人神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取,将人神经生长因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-NGF-EGFP。神经营养素3 cDNA片段通过替换绿色荧光蛋白基因(EGFP)的方式插入到pIRES2-NGFEGFP中构建成为pIRES2-NGF-NT-3双基因共表达载体,将pIRES2-NGF-NT-3用脂质体转染HEK293细胞并采用RT-PCR与Western-blot的方法检测其表达。人神经生长因子和神经营养素3被克隆,通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。pIRES2-NGF-NT-3转染HEK293细胞后双基因在mRNA和蛋白水平均得到了表达。人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建,它提供了一个新的表达系统,为进一步研究双基因的功能奠定了基础。

推拿对坐骨神经损伤大鼠NT-3、TrkC的影响

目的研究推拿对坐骨神经损伤大鼠感觉功能及NT-3、TrkC表达的影响。方法采用夹持法建立坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,以按摩推拿手法模拟仪进行干预,通过热痛阈实验观察各组大鼠行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠背根节内NT-3、TrkC表达情况。结果模型组、模型对照组大鼠的PWL值与正常组相比明显延长,推拿组与模型组相比PWL值明显缩短,与正常组相比无显著差异。模型组、模型对照组及推拿组NT-3免疫组化表达与正常组比较均有明显提高,推拿组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,对神经元胞体和突起的生长产生积极的影响,促进损伤神经的修复,改善坐骨神经损伤大鼠的感觉功能。

电针对糖尿病大鼠学习记忆障碍及海马NT-3表达的影响

目的观察电针对糖尿病性认知功能障碍大鼠学习记忆的改善作用,及其对海马神经营养因子-3(NT-3)mRNA和免疫反应阳性细胞表达的影响。方法采用2%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)构建糖尿病大鼠模型,将模型大鼠随机分为电针组(EA)、对照组(DM)与正常组(CN)进行比较。电针4周后糖尿病测定血糖水平,并用Morris水迷宫法观察电针对糖尿病大鼠学习记忆的影响,应用RT-PCR和免疫组化方法检测海马NT-3mRNA和免疫反应阳性细胞的表达水平。结果对照组血糖、上台潜伏期高于正常组和电针组(P<0.01),对照组NT-3 mRNA和免疫反应阳性细胞的表达明显低于正常组和电针组(P<0.01);电针组NT-3表达明显高于对照组(P<0.01)。结论电针能在一定程度上降低血糖,促进海马NT-3 mRNA和免疫反应阳性细胞的表达,改善糖尿病认知功能障碍者的学习和认知功能。

GDNF和NT-3对噪声性毛细胞损伤的防护作用——细胞核形态学观察

观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)和神经营养素 3 (NT 3 )对噪声性毛细胞损伤的防护作用。将GDNF和NT 3缓慢注入内耳 ,以灌注人工外淋巴液动物为对照 ,检测噪声暴露后耳蜗毛细胞核形态、数量的变化。噪声暴露 10天后 ,毛细胞核荧光染色计数发现 ,实验组手术耳和非手术耳耳蜗外毛细胞核肿胀率明显低于对照组 (P <0 0 1)。研究表明 ,GDNF和NT

APP17肽对卵巢去势大鼠学习、记忆功能和海马神经NT-3、NF表达的影响

目的 探讨APP1 7肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能及作用机制。方法 雌性大鼠分三组 :①正常组 ,②去卵巢组 ,③用APP1 7肽保护去卵巢组。通过水迷宫测试 ,观察行为学的改变。而后灌注固定 ,取大脑组织冰冻切片 ,做NT 3、NF免疫组化染色。结果 (1 )行为学检查 :给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠游完全程的时间及错误反应次数均较未给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠少 (P<0 0 5)。 (2 )用APP1 7肽保护的卵巢去势大鼠海马区神经元神经营养素 3(NT 3)、神经丝蛋白 (NF)的表达与正常大鼠相似 ,阳性细胞计数及平均灰度 (反映染色强度 )与卵巢去势大鼠比较差异显著 (P <0 0 5)。结论 卵巢去势大鼠存在学习、记忆障碍 ,APP1

Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响

目的探讨Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠,体重280～320g,随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组、Lactuside B低剂量组、中剂量组和高剂量组,共6组,8只/组。采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,各组动物均按5ml/kg的容量腹腔注射相应的实验药物,每天给药一次。动物持续脑缺血2h,在再灌注24h和72h对其神经系统体征进行客观评分后分别处死4只动物,采用RT-PCR技术检测大鼠海马和纹状体不同时间段NT-3 mRNA的表达。结果研究发现Lactuside B各剂量组均可降低神经缺损症状评分,提高海马和纹状体NT-3 mRNA的表达,且低、中剂量组作用较好,与模型组和阳性对照药比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),用药72h后两部位的NT-3mRNA表达更多,与24h比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论 Lactuside B可通过上调海马和纹状体NT-3 mRNA的表达起到抗缺血性脑损伤的作用,两部位升高的NT-3 mRNA对目标蛋白的合成具有积极的导向性质。

缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件（five copies of hypoxia responsive elements,5HRE）的缺氧调控表达的神经营养因子-3（neurotrophin-3,NT-3）的逆转录病毒载体。方法用PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5HRE和人来源NT-3片段克隆入逆转录病毒载体pLNCX中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒RV-5HRE-NT3;用逆转录病毒感染NIH 3T3细胞48h后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒RV-5HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×10~6 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。

BDNF和NT-3对体外培养胎鼠脊髓神经元生长发育的影响

目的:观察脑源性神经生长因子(BDNF)和神经营养因子-3(NT-3)单独及联合应用对体外培养胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响。方法:胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞记数和显微测量,观察神经元存活和生长分化的状况。结果:BDNF和NT-3均能促进培养胚胎大鼠脊髓神经元的存活,BDNF的作用效果更好。BDNF主要促进胞体发育;NT-3主要促进突出分化和伸长,二者有互补作用。结论:BDNF和NT-3能促进体外培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长,其作用具有选择性。

APP17肽对糖尿病视网膜神经元表达NT-3和星形胶质细胞增殖的影响

目的 观察糖尿病早期视网膜神经元表达 NT- 3和星形胶质细胞增殖情况 ,并观察 APP17肽的作用。方法 用链脲佐菌素 (streptozotocin,STZ)复制 Wistar大鼠糖尿病模型 ,于模型建立 2周后 ,皮下注射 APP17肽 ,1月后处死大鼠取视网膜 ,进行神经免疫组化 ,观察 APP17肽对糖尿病早期视网膜神经元中神经营养因子 3(neurotrophin- 3,NT- 3)和星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glial fibrillary acidi protein,GFAP)表达的影响。结果 同正常对照组相比模型组 (DM组 )视网膜神经元 NT- 3阳性细胞数明显减少 ,但APP17+DM组阳性细胞数多于 DM组 (P<0 .0 1) ,并且对照组与 APP17+DM组中星形胶质细胞 GFAP阳性数少于 DM组 (P<0 .0 1)。结论 在糖尿病视网膜病变早期存在视网膜神经细胞 NT- 3表达减少及星形胶质细胞增生 ,APP17肽可明显改善早期糖尿病大鼠视网膜神经元的表达 。

NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤后的神经再生修复

目的 NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤,以期促进损伤神经再生修复.方法 (1)用贴壁法体外培养人脐带间充质细胞(HUMSC),同时进行分离,提纯和鉴定;(2)构建NT-3基因真核表达载体,利用基因转染技术将其转入HUMSC,构建NT-3-HUMSC细胞,体外检测其存活情况及NT-3表达情况;(3)筛选作用于SOCS3的特异性靶点,进行序列同源性分析,设立阴性对照,设计并合成SOCS3-siRNA,同时在体外检测功能;(4)建立SD大鼠脊髓损伤模型分为为:I.假手术组10只;Ⅱ.T12全脊髓横断损伤模型40只,随机分为4组,生理盐水治疗组10只;siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组10只;NT-3-HUMSCs治疗组10只;SOCS3-siRNA治疗组10只.以上各组造模成功后,分别存活12周进行神经电生理监测;(5)对SD大鼠进行灌注固定和取材,观察局部胶质疤痕降解情况和轴突再生情况,同时运用生物素化葡聚糖(BDA)荧光顺行追踪取损伤移植区-宿主交界处头尾侧脊髓组织,镜下观察皮质脊髓束再生的情况.结果(1)siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组横断脊髓空洞明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05);(2)BDA顺行追踪结果表明siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组神经轴突生长明显;(3)神经电生理检测损伤12周后治疗组P40潜伏期较假手术组缩短,siRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组比较潜伏期缩短明显,波幅升高明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤,可以促进损伤神经再生修复.