鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）对体外培养神经干细胞（NSCs）wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响，以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制。方法体外分离培养BALB／c胎鼠NSCs，用感染复数（MOI）为5、1和0．1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养，Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化，real-timeRT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1mRNA水平的动态变化。结果感染组c-mye蛋白表达量在分化培养后第0．5-5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组cyclinD1蛋白表达量在第0．5天和1天显著低于正常对照组（P〈0．05）；在第2天和3天显著高于正常对照组（P〈0．05）；在第4天和5天，MOI=5组显著低于其他3组（P〈0．05）；感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-1mRNA水平在第0．5～5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-2蛋白表达先降后升，与正常对照组先升后降相反，MOI=0．1和1组峰值后移至感染后第5天，且明显低于正常对照组峰值（P〈0．05）。MOI=5组未表现出明显的峰值，各感染组ngn-2表达量在感染后1d明显低于正常对照组（P〈0．05）；感染后2d，MOI=5组明显低于正常对照组（P〈0．05）；在感染后3、4、5d，各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组（P〈0．05）。感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显。结论MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达，抑制ngn-1mRNA表达，并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱，其效应随感染滴度增加而更为显著。MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一。