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基于固定化金属亲和整体柱的痕量微囊藻毒素富集分析
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作者 陈小燕 杨玲 +1 位作者 苏立燊 吴晓苹 《分析测试学报》 CAS 北大核心 2025年第1期155-162,171,共9页
基于固定化金属亲和色谱(IMAC)识别原理,采用后修饰法在热引发自由基聚合反应得到的有机基质整体柱上直接固定Cu^(2+),设计并合成表征了poly(VIM-co-DVB)-Cu^(2+)亲和毛细管整体柱,用于微囊藻毒素(MCs)的富集研究。详细优化了亲和整体... 基于固定化金属亲和色谱(IMAC)识别原理,采用后修饰法在热引发自由基聚合反应得到的有机基质整体柱上直接固定Cu^(2+),设计并合成表征了poly(VIM-co-DVB)-Cu^(2+)亲和毛细管整体柱,用于微囊藻毒素(MCs)的富集研究。详细优化了亲和整体柱的萃取条件,在最优条件下,将poly(VIM-co-DVB)-Cu^(2+)整体柱用于毛细管微萃取(CME),并与高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)检测技术联用,建立了环境水样品中3种MCs的高效富集分析方法。方法检出限为0.89~1.23 ng/L,加标回收率为80.0%~105%,相对标准偏差(RSD)不大于6.8%。该方法灵敏度高、准确性好,可为污染水体中微囊藻毒素的监测分析提供有效手段。 展开更多
关键词 微囊藻毒素 固定化金属亲和整体柱 毛细管微萃取 高效液相色谱-质谱
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体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析
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作者 何汝琴 雷鹏 +3 位作者 邓龙芝 朱文武 朱雄伟 熊梦瑶 《发育医学电子杂志》 2024年第1期1-6,19,共7页
目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核... 目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。 展开更多
关键词 阻断剂 体外检测试剂盒 小鼠 单克隆抗体 G柱亲和层析 蓝胶+Q柱离子交换层析
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蛋白A连续床亲和毛细管色谱柱的制备及性能考察 被引量:4
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作者 潘再法 莫卫民 +3 位作者 吴仁安 罗权舟 叶明亮 邹汉法 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第11期2070-2072,共3页
An assay technique for the determination of the human IgG in human plasma has been developed by utilizing protein A immobilized monolithic capillary column. The affinity chromatography experiment was performed on a ca... An assay technique for the determination of the human IgG in human plasma has been developed by utilizing protein A immobilized monolithic capillary column. The affinity chromatography experiment was performed on a capillary electrophoresis instrument by using its pressure system as the driving force. Reactive monolithic capillary columns have been prepared by in-situ copolymerization of the monomers in the presence of porogenic dilute, and protein A was immobilized on the monolithic rods directly or through a 11 carbon atom space arm with molded synthetic methods. The non-specific adsorption of two kinds of media has been studied and the results showed that the medium without space arm gives very low non-specific adsorption of BSA. The affinity column without space arm was used to determine the human immunoglobulin G(HIgG) in human serum. The correlative coefficient of the calibration curve reaches 0 998 7. The total time of rapid analysis was less than 0 7 min. The consumption of eluent buffer and sample is much low than by conventional HPLC. 展开更多
关键词 制备 性能 亲和色谱法 连续床毛细管色谱柱 蛋白A 人免疫球蛋白G 分析
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粮食中赭曲霉毒素A的快速定量检测-超高效液相色谱法 被引量:7
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作者 谢刚 王松雪 +2 位作者 张艳 黎睿 崔华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第3期783-790,共8页
目的:建立了免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法快速定量测定粮食中赭曲霉毒素 A(ochratoxin A, OTA)的检测方法。方法样品经甲醇:水(80:20, v:v)提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩, Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 m... 目的:建立了免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法快速定量测定粮食中赭曲霉毒素 A(ochratoxin A, OTA)的检测方法。方法样品经甲醇:水(80:20, v:v)提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩, Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以乙腈:水:冰醋酸(100:98:2, v:v:v)为流动相,流速为0.2 mL/min,进样量为1μL,荧光检测器检测,激发波长为310 nm发射波长为465 nm,赭曲霉毒素A的保留体积小于1.15 mL,从样品前处理到分析整个过程小于45 min。结果根据3倍信噪比的峰响应值,确定赭曲霉毒素A的检出限为0.25 pg,在1~50 pg范围内呈线性相关,相关系数R2为0.998。在小麦、玉米、稻谷样品中加标回收率分别为81.5%~101.2%,81.3%~85.5%,和87.8%~97.5%,精密度为3.3%~6.4%。结论本方法简便快速,灵敏度高,重现性好,溶剂用量少,适用于粮食中赭曲霉毒素A的快速测定。 展开更多
关键词 粮食 赭曲霉毒素A 超高效液相色谱法 免疫亲和柱
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鸡卵黄抗体的制备及其不均一性 被引量:7
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作者 杨曜中 宋聿文 +2 位作者 欧伶 范龙彬 袁勤生 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第1期53-56,共4页
介绍了免疫期卵黄液中白蛋白(牛)抗体效价和亲合力的变化。研究了pH对稀释卵黄液去脂效果,以及硫酸铵浓度对IgY浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白IgY 的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和IgY盐析的最适合条件分... 介绍了免疫期卵黄液中白蛋白(牛)抗体效价和亲合力的变化。研究了pH对稀释卵黄液去脂效果,以及硫酸铵浓度对IgY浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白IgY 的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和IgY盐析的最适合条件分别是pH5.1 和2.2m ol/L。经免疫亲和柱层析或金属(Fe3+ )螯合亲和柱层析后,白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体,还可能存在反映基本结构、理化性质差异的白蛋白抗体。 展开更多
关键词 白蛋白抗体 鸡卵黄液 免疫亲和柱层析
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一种金属螯合连续棒色谱柱的制备及色谱性能 被引量:5
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作者 卫引茂 黄晓冬 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1664-1666,共3页
A procedure for the preparation of continuous rod consisting of poly(glycidyl methacrylate\|co\|ethylene dimethacrylate) for immobilized metal affinity chromatography (IMAC) is presented. When chelating Cu(Ⅱ), Zn(Ⅱ)... A procedure for the preparation of continuous rod consisting of poly(glycidyl methacrylate\|co\|ethylene dimethacrylate) for immobilized metal affinity chromatography (IMAC) is presented. When chelating Cu(Ⅱ), Zn(Ⅱ) or Ni(Ⅱ) on it, the rod displayed a property of IMAC and the selectivity for protein separation was different from that obtained from the naked rod. An abnormal increase in retention times of proteins was found under the condition of either very high pH or very low pH on the metal chelated rods. 展开更多
关键词 金属螯合色谱 连续棒色谱柱 生物大分子 制备 色谱性能 分离 纯化
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聚(4-乙烯基苯硼酸-季戊四醇三丙烯酸酯)亲和整体柱的制备与应用 被引量:6
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作者 王超然 王彦 +3 位作者 高也 马丹丹 谷雪 阎超 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1207-1212,共6页
以4-乙烯基苯硼酸为单体,季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,乙二醇和二甘醇为致孔剂,经原位聚合制备了聚(4-乙烯基苯硼酸-季戊四醇三丙烯酸酯)毛细管整体柱。以单体、交联剂、致孔剂和引发剂的用量为4种因素,最大吸附... 以4-乙烯基苯硼酸为单体,季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,乙二醇和二甘醇为致孔剂,经原位聚合制备了聚(4-乙烯基苯硼酸-季戊四醇三丙烯酸酯)毛细管整体柱。以单体、交联剂、致孔剂和引发剂的用量为4种因素,最大吸附量、柱效和保留时间为3个考察标准,利用实验设计软件(DOE)优化了其合成条件,验证了正交实验最优结果,得到了整体柱合成的最佳配比为单体7.32 mg,交联剂6 mg,致孔剂100μL,引发剂1 mg。在最佳条件下合成整体柱,并进行表征,在微径液相色谱(μHPLC)和加压毛细管电色谱(pCEC)实验中考察了分离特性。结果表明,整体柱固定相表面的硼酸基团在碱性条件下能特异性吸附邻苯二酚、腺苷等含有邻二羟基结构的化合物,具有亲和色谱的特性;同时由于交联剂的性质使其具有反相分离机理,在含有20%有机相的条件下能够将极性不同的苯系物分开。 展开更多
关键词 硼酸亲和色谱 整体柱 加压毛细管电色谱
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牙鲆血清免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析 被引量:6
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作者 刘云 孙峰 姜国良 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期547-553,共7页
运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein A Sepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。... 运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein A Sepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。凝胶层析和亲和层析样品均出现2个蛋白峰,用还原SDS-PAGE检测确定牙鲆免疫球蛋白存在于第2个蛋白峰中。牙鲆免疫球蛋白重链分子量约为75.4kD,轻链分子量约为29.9kD和28.2kD,推测牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836kD。制备了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体,免疫双扩散法检测多克隆抗体效价为1:32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1:1600。运用免疫印迹法(Western—bloting)检测了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明该抗体与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应均成阳性。[中国水产科学,2007,14(4):547—553] 展开更多
关键词 牙鲆 免疫球蛋白 凝胶层析 亲和层析 免疫印迹
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开管毛细管亲和液相色谱初探 被引量:2
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作者 叶明亮 邹汉法 +2 位作者 刘震 雷政登 倪坚毅 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期529-531,共3页
提出了一种新的亲和色谱模式开管毛细管亲和液相色谱。在内径为 5 0 μm的毛细管内表面键合一层三嗪染料配体 ,利用毛细管电泳仪的压力系统进行亲和色谱实验。采用流动相切换洗脱技术 ,牛血清白蛋白和溶菌酶获得了有效的分离。连续运行... 提出了一种新的亲和色谱模式开管毛细管亲和液相色谱。在内径为 5 0 μm的毛细管内表面键合一层三嗪染料配体 ,利用毛细管电泳仪的压力系统进行亲和色谱实验。采用流动相切换洗脱技术 ,牛血清白蛋白和溶菌酶获得了有效的分离。连续运行 10次 ,溶菌酶的出峰时间、峰面积和峰高的相对标准偏差分别为0 1% ,4 3% ,3 7%。在 8 6ng~ 2 8 7ng范围内 ,溶菌酶的进样量与峰面积和峰高都呈线性关系 ,其相关系数分别为 0 9946和 0 展开更多
关键词 开管柱 开管毛细管亲和液相色谱 BSA Lys 分离
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一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达 被引量:5
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作者 李静静 徐美娟 +1 位作者 张显 饶志明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期516-523,共8页
从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析... 从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8%。该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20~35℃范围内均表现出较高的活性。Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失。经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍。经5 L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 Α-乙酰乳酸脱羧酶 耐低温 双乙酰 Ni柱亲和层析 酶学性质
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高效液相色谱-串联质谱法测食品中的赭曲霉毒素A 被引量:11
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作者 史娜 路勇 +1 位作者 吴颖 姜杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第18期260-263,共4页
研究建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测食品中赭曲霉毒素A的方法。根据不同样品,用甲醇-2%碳酸氢钠溶液(60:40,V/V)或甲醇-水(80:20,V/V)提取样品中的赭曲霉毒素A,经OchraTest亲和柱净化,以甲醇-5mmol/L(含0.1%甲酸)乙酸铵为流动相... 研究建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测食品中赭曲霉毒素A的方法。根据不同样品,用甲醇-2%碳酸氢钠溶液(60:40,V/V)或甲醇-水(80:20,V/V)提取样品中的赭曲霉毒素A,经OchraTest亲和柱净化,以甲醇-5mmol/L(含0.1%甲酸)乙酸铵为流动相,采用正离子模式对赭曲霉毒素A进行检测。结果回收率在82.3%~98.5%之间,检出限为0.1μg/kg。该方法适用不同基质样品,准确性好、灵敏度高、抗干扰能力强,方法检出限可满足欧盟等最新限量要求。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱 赭曲霉毒素A 免疫亲和柱 多离子反应监测
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免疫法制备液相色谱生物样品的研究——血中沙丁胺醇的分析 被引量:4
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作者 袁倚盛 赵飞浪 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期12-14,共3页
用动物免疫法制备了免疫亲和柱纯化水溶性的沙丁胺醇血浆样品。琥珀酸酐交联沙丁胺醇和牛血清白蛋白获得抗原免疫家兔抗沙丁胺醇抗体——免疫球蛋白。琼脂糖Sepharose4B与抗体交联制成免疫球蛋白亲和柱。对高效液相色谱法测... 用动物免疫法制备了免疫亲和柱纯化水溶性的沙丁胺醇血浆样品。琥珀酸酐交联沙丁胺醇和牛血清白蛋白获得抗原免疫家兔抗沙丁胺醇抗体——免疫球蛋白。琼脂糖Sepharose4B与抗体交联制成免疫球蛋白亲和柱。对高效液相色谱法测定中的一般提取方法和固相小柱提取法作了比较,后者具有内源性杂质干扰少的优点。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 沙丁胺醇 血浆 免疫法
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用RhD阳性红细胞从含抗D抗体的IgG中提纯抗D抗体 被引量:1
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作者 石明隽 谢竞 +3 位作者 钟江 桂华珍 郭兵 张国忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1012-1014,共3页
目的:研究从含抗-D抗体的IgG中纯化抗D抗体的方法。方法:抗D含量为0.814μg/ml的健康人血浆,经柱层析法分离获得含抗D的IgG后,用遗传表现型CCDee的RhD阳性"O"型红细胞经亲和层析法从IgG中纯化抗-D抗体。检测相关指标。结果:... 目的:研究从含抗-D抗体的IgG中纯化抗D抗体的方法。方法:抗D含量为0.814μg/ml的健康人血浆,经柱层析法分离获得含抗D的IgG后,用遗传表现型CCDee的RhD阳性"O"型红细胞经亲和层析法从IgG中纯化抗-D抗体。检测相关指标。结果:经过亲和层析法纯化后去除了近90%的非目的IgG,使产物可以进一步浓缩以提高单位体积制剂中抗-D抗体浓度。所得制剂经检测各项指标均符合中国生物制品规程的要求。结论:本方法可从含抗D的IgG制剂中进一步纯化抗D抗体,为血浆综合利用提供参考。 展开更多
关键词 抗-D抗体 免疫球蛋白 红细胞 柱层析法 亲和层析法
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硅胶基硝化苯硼酸亲和色谱材料的合成及应用 被引量:1
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作者 李方楼 赵欣捷 许国旺 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1366-1370,共5页
合成了硅胶基硝化苯硼酸亲和色谱材料,首先对间氨基苯硼酸进行硝基化,制得3-氨基-4-硝基苯硼酸功能基团,通过γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷把功能基团键合到硅胶基体上,在20.7MPa压力下装成亲和色谱预柱(35mm×4.6mmi.d.)。用该... 合成了硅胶基硝化苯硼酸亲和色谱材料,首先对间氨基苯硼酸进行硝基化,制得3-氨基-4-硝基苯硼酸功能基团,通过γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷把功能基团键合到硅胶基体上,在20.7MPa压力下装成亲和色谱预柱(35mm×4.6mmi.d.)。用该预柱通过六通阀后接ODS分析柱(250mm×4.6mmi.d.),构成中心切割二维HPLC。该系统能对含有顺二羟基结构的化合物进行在线富集,实现生物复杂样品直接进样分离分析。使用该系统对尿中多种修饰核苷进行了分离分析,以pH值7.95的0.25mol/LNH4Ac碱性缓冲液把实际尿样(100μL)中核苷保留在预柱上,生物大分子无保留通过,再切换六通阀,以pH4.50的25mmol/LKH2PO4酸性洗脱液把保留在预柱上的核苷洗脱,进样到下一级ODS分析柱柱头上聚焦,然后用梯度洗脱法(pH4.50的25mmol/LKH2PO4缓冲液与体积比60∶40的甲醇-水梯度混合构成洗脱液)完成核苷在ODS分析柱上的分离(紫外检测260nm),11种目标核苷的分离分析取得了良好的定性定量结果。 展开更多
关键词 亲和色谱 硼酸亲和色谱预柱 多维液相色谱 直接进样
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抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制 被引量:2
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作者 韩亮 曾国华 +5 位作者 赵丽欣 杨桂云 刘淑玲 张秀霞 张志 李金凤 《微生物学免疫学进展》 1998年第4期19-24,共6页
应用鼠-鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α2a型干扰素(rHu-IFN-α2a)单克隆抗体细胞系1A5、1B5和27A7。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清... 应用鼠-鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α2a型干扰素(rHu-IFN-α2a)单克隆抗体细胞系1A5、1B5和27A7。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价1∶256~1∶4096,腹水1∶26×105~1∶27×108。Ig亚类测定,1A5和1B5McAb为IgG1,27A7为IgG2a。三系McAb均识别rHu-IFN-α2a和-α2b,与rHu-IFN-α1和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ELISA试验,三系McAb分别针对rHu-IFN-α2a上三个不同表位。同McAb建立双抗体夹心ELISA对rHu-IFN-α2a和-α2b均可检测到150pg/ml,约10IU/ml的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率95%以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制rHu-IFN-α2a提纯到97%以上纯度。平均回收率为:1A5单抗柱902%,1B5单抗柱953%,27A7单抗柱947%。比活性平均值依次为194×108IU/mg,197×108IU/mg和164×108IU/mg,残余鼠IgG量均符合规程要求。纯化rHu-IFN? 展开更多
关键词 重组人干扰素 单克隆抗体 亲和层析柱 纯化
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采用免疫亲和柱高效液相色谱法检测稻米中的黄曲霉毒素B1 被引量:3
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作者 李旭 马力 《西华大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第4期72-75,共4页
采用免疫亲和柱净化高效液相色谱法检测稻米中的黄曲霉毒素B1(AFB1).稻米样品经甲醇/水(80/20,v/v)粗提取,再经免疫亲和柱净化和三氟乙酸衍生化,最后经高效液相色谱法测定.经检测,AFB1含量在0.01 ~2.50 ng范围内,所得到的AFB1标准... 采用免疫亲和柱净化高效液相色谱法检测稻米中的黄曲霉毒素B1(AFB1).稻米样品经甲醇/水(80/20,v/v)粗提取,再经免疫亲和柱净化和三氟乙酸衍生化,最后经高效液相色谱法测定.经检测,AFB1含量在0.01 ~2.50 ng范围内,所得到的AFB1标准曲线呈良好的线性关系,回归方程为Y=60.355x+0.054 3,相关系数为0.999 7.该方法检出限为0.1μg/kg,加标回收率为89.26%~99.45%,SD为2.48%~ 3.74%.由于该方法操作的选择性高、灵敏度高、检测效果好,因此适于较大批量粮油作物中黄曲霉毒素的检测,便于示范推广. 展开更多
关键词 稻米 黄曲霉毒素B1 免疫亲和柱 高效液相色谱法
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胱抑素C原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化 被引量:1
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作者 唐红卫 刘一凡 +4 位作者 孙禅 端永艳 李迪 李绵洋 王成彬 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第10期1055-1058,共4页
目的构建胱抑素C(cystatin C,Cys-C)原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列,采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列,经PCR、酶切及测序确认最终获得重组载体pET-30a(+)-CysC... 目的构建胱抑素C(cystatin C,Cys-C)原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列,采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列,经PCR、酶切及测序确认最终获得重组载体pET-30a(+)-CysC,转化大肠埃希菌Rosetta,通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalac-topyranoside,IPTG)诱导表达、经镍柱亲和层析法纯化获得Cys-C融合蛋白。结果序列分析表明,人Cys-C基因成熟肽编码区编码122个氨基酸;与GeneBank(NM-000099.2)中已报道的序列有100%的同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和ELISA分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的20%,重组蛋白相对分子质量约为20 000,经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带并与商品化的人Cys-C单抗呈特异性反应。结论在大肠埃希菌中获得了Cys-C的表达,并经镍柱亲和层析得到较纯的胱抑素。 展开更多
关键词 胱抑素C 基因表达 大肠埃希菌 镍柱亲和层析
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免疫亲和层析法纯化发酵液中的核糖基异戊烯基嘌呤 被引量:1
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作者 马志超 陈正贤 +1 位作者 徐幼平 吴建祥 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第4期429-432,共4页
用过碘酸钠氧化法交联核糖基异戊烯基嘌呤和卵清蛋白,并免疫Bal.b/c小鼠.鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选获得抗核糖基异戊烯基嘌呤单克隆抗体.将活化的Sepharose6B与单克隆抗体交联制成免疫亲和色谱... 用过碘酸钠氧化法交联核糖基异戊烯基嘌呤和卵清蛋白,并免疫Bal.b/c小鼠.鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选获得抗核糖基异戊烯基嘌呤单克隆抗体.将活化的Sepharose6B与单克隆抗体交联制成免疫亲和色谱柱.发酵液经免疫亲和柱纯化后用高效液相色谱检测,其纯度极高.比较了不同洗脱条件对免疫亲和柱纯化的影响,认为利用免疫亲和柱纯化发酵液具有内源性杂质干扰少的优点,是生物样品预处理的一种有效方法. 展开更多
关键词 免疫亲和色谱 单克隆抗体 高效液相色谱 发酵液
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适应高滴度抗体制备的抗体捕集纯化技术研究进展 被引量:1
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作者 史清洪 孙彦 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期576-585,共10页
抗体捕集纯化是单克隆抗体和Fc融合蛋白药物制备过程的关键步骤。但相较于大规模动物细胞培养技术的迅猛发展,抗体的捕集纯化已经成为了制约单抗药物生产的主要"瓶颈"。本文回顾了蛋白A亲和层析和阳离子交换层析等当前抗体药... 抗体捕集纯化是单克隆抗体和Fc融合蛋白药物制备过程的关键步骤。但相较于大规模动物细胞培养技术的迅猛发展,抗体的捕集纯化已经成为了制约单抗药物生产的主要"瓶颈"。本文回顾了蛋白A亲和层析和阳离子交换层析等当前抗体药物工业生产过程主要捕集纯化技术的发展现状和应用情况,介绍了近年来亲和肽层析和混合模式吸附层析等新型层析分离技术的发展以及膨胀床吸附和多柱串联吸附等过程集成方法在提高抗体捕集效率方面所展现的良好前景。在此基础上,指出了影响抗体捕集纯化的主要因素以及各技术发展中存在的问题,展望抗体捕集纯化技术的发展方向。 展开更多
关键词 抗体 捕集纯化 蛋白A层析 阳离子交换层析 亲和肽层析 混合模式层析 膨胀床吸附 多柱串联吸附
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一种新型亲和开管毛细管电色谱柱的制备与应用
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作者 张志胜 杨屹 《Journal of Chemistry and Chemical Engineering》 2008年第1期23-27,共5页
本文用3-氨丙基三乙氧基硅烷(KH550)做偶联剂,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),制得了3代PAMAM键合的毛细管柱,利用溴化法在PAMAM的端氨基上键合了核糖核酸(RNA),制得了新型的亲和毛细管电色谱柱,封... 本文用3-氨丙基三乙氧基硅烷(KH550)做偶联剂,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),制得了3代PAMAM键合的毛细管柱,利用溴化法在PAMAM的端氨基上键合了核糖核酸(RNA),制得了新型的亲和毛细管电色谱柱,封键合结果进行了表徵。并利用制得的亲和柱成功分离了溶菌酶和核糖核酸酶A。 展开更多
关键词 枝形大分子 聚酰胺-胺 开管毛细管电色谱柱 亲和色谱
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