烟草SKP1基因cDNA的克隆分析及原核表达

应用DDRT-PCR法获得可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟SKP1基因cDNA的3′端序列,通过5′RACE扩增该基因cDNA的5′端,进而扩增此基因cDNA的全长,通过同源性比较分析表明,与本塞姆氏烟草的SKP1基因同源性达81%,其cDNA全长653bp(GenBank登录号:AY702087),其中编码区位于73～540bp,编码一条155个氨基酸的多肽。经预测该多肽的分子量为17527.78Da,等电点为4.57,定位于细胞质,功能结构域分析结果显示在4～105位氨基酸有一明显的Skp1结构域,其E值为1.25e-52,因此推断该基因为枯斑三生烟的SKP1基因。将该基因编码区亚克隆到原核表达载体pET23b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达出与预测分子量一致的蛋白。为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

三生烟和心叶烟对TMV挑战接种的响应差异

用TMV溶液分别感染三生烟和心叶烟,36h,24h和12h后挑战接种同一浓度的TMV溶液,对其产生枯斑的数目和大小进行了分析比较.结果表明:在感染病毒后同一间隔时间挑战接种TMV,三生烟各处理叶片上形成的全叶枯斑数显著少于心叶烟;两品种烟草感染病毒36h后挑战接种TMV产生的全叶平均枯斑数与其他各处理组的差异都极为显著.