牛黄解毒片中重金属及有害金属元素测定及健康风险评估

目的测定牛黄解毒片中重金属及有害金属元素残留情况,并将风险评估引入中药外源性污染评价。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法对60批牛黄解毒片中重金属及有害金属元素含量进行测定,按照危害识别、危害特征描述、暴露评估和风险描述的程序,对健康风险进行初步评估。结果所测得4种元素在各自范围内线性关系均良好(r≥0.997),回收率为87.3%~93.1%(RSD≤3.1%)。60批样品中Cu﹑Cd﹑Pb均未超标,Hg超标率为48.3%。结论该方法灵敏准确,考察了牛黄解毒片中重金属及有害元素残留情况,科学评估了重金属对人体的健康风险,为中药牛黄解毒片的安全性评价提供研究思路。

不同厂家牛黄解毒片中24种无机元素ICP-MS检测与质量评价

目的:建立牛黄解毒片中无机元素指纹图谱,结合化学计量学探究不同厂家产品中无机元素差异,评价他们质量的均一性。方法:对全国21个生产企业的牛黄解毒片,采用微波消解后-ICP-MS法测定样品中K、Mn、Zn等24种无机元素的含量,绘制无机元素质量分数分布图,通过主成分分析法对质量均一性进行评价。结果:24种元素ICP-MS测定在各自范围内线性关系均良好(r≥0.9996),回收率在86.9%~112.2%之间(RSD≤1.6%)。建立了牛黄解毒片无机元素指纹图谱,从指纹图谱相似度及PCA结果看,牛黄解毒片中无机元素的质量均一性较好,主要特征元素为K、Mn、Zn、B、Ni、Al、V、Cr、Ba、Sn。结论:本研究建立的无机元素指纹图谱可为牛黄解毒片质量评价提供研究基础。

基于GC-MS代谢组学的牛黄解毒片配伍减毒机制研究

目的采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术探讨牛黄解毒片复方配伍的减毒作用及机制。方法将24只小鼠随机分为空白组、雄黄组(1.0 g·kg^(-1))和牛黄解毒片组(7.8 g·kg^(-1)),每组8只,连续口服给药14 d,采集各组小鼠的肝脏和肾脏,观察病理形态学变化;测定肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肾脏中肌酐(Cr)、尿酸(UA)的含量;GC-MS代谢组学分析肝脏和肾脏中内源性代谢物的差异。结果与雄黄组比较,牛黄解毒片组小鼠肝脏中ALT、AST和肾脏中Cr、UA含量发生显著变化(P<0.05),肝脏和肾脏病理损伤减轻;筛选出柠檬酸、抗坏血酸、天冬酰胺、左旋多巴、苯丙氨酸等17种与减毒相关的生物标志物,涉及谷氨酰胺和谷氨酸代谢、精氨酸的生物合成、色氨酸代谢、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢等通路。结论牛黄解毒片复方配伍降低了雄黄的肝肾毒性,减毒作用可能与回调氨基酸代谢有关。

牛黄解毒片中大黄五种成分的HPLC测定

建立了HPLC法测定牛黄解毒片中大黄5种成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。采用C18色谱柱,流动相为甲醇-水-磷酸(720∶280∶1),检测波长为254nm。5种成分分别在0.09～3.6、1.2～48、0.6～24、0.7～28和0.36～14.4μg/ml范围内呈良好的线性关系。加样回收率分别为98.0%、100.9%、98.1%、98.6%和98.7%。

微波消解ICP-AES法测定牛黄解毒片中的微量元素

采用HNO3-H2O2消解体系对牛黄解毒片样品进行微波消解制样,利用ICP-AES法同时测定了牛黄解毒片中As,Ca,Mg,Al,Mn,Sr,Ba,Se,Ni,Cd,Cu,Zn,Mo和Pb等14种微量元素的含量,对样品的前处理条件进行了探讨,通过添加标准回收实验,验证了分析数据的可靠性。结果表明,该方法快速、简便、数据准确可靠,结果令人满意,适合常规分析。

雄黄及含雄黄复方对发热模型大鼠应激蛋白、炎症介质和补体的影响

目的:研究雄黄和含雄黄复方牛黄解毒片对发热模型大鼠应激蛋白(热休克蛋白HSP70、血红素氧合酶HO-1)、炎症介质(IL-1β、IL-6、TNF-α和NO)和补体(C3、C4)的影响,探讨雄黄在复方中"解毒"作用的机理。方法:SD大鼠随机分为4组(15只/组):正常对照组、发热模型组、雄黄组(90 mg/kg)、牛黄解毒片组(1.404 g/kg);各组再设3个亚组(5只/组),分别于药后1、2、4 h取血。采用ELISA法测定血清中HSP70含量、血清炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平;双波长分光光度法测定血清中HO-1活力;比色法测定血清中一氧化氮合酶(NOS)及其同工酶(诱导型一氧化氮合酶iNOS)的活力;免疫比浊法测定血清补体C3、C4水平。结果:雄黄和牛黄解毒片均能显著提高血清HSP70水平;显著增强血清HO-1的活力,且在给药后不同时间的HO-1活力升幅的变化趋势与血清中总砷浓度的变化趋势一致;雄黄和牛黄解毒片均能显著降低血清IL-1β水平,给药后4 h基本回复到正常水平;药后2 h,牛黄解毒片可显著降低血清NOS和iNOS的活力;对血清C3、C4水平均无明显影响。结论:一定剂量的雄黄和牛黄解毒片可诱导、激活发热大鼠体内某些应激蛋白(HSP70、HO-1);并且能抑制病理状态下过度释放的炎症介质(IL-1β),复方的抑制作用大于雄黄。提升机体的应激水平和抑制炎症介质可能是雄黄发挥"解毒"作用的途径。

牛黄解毒片中不同单味组分对雄黄可溶性砷含量影响的比较研究

目的研究牛黄解毒片中各单味组分对雄黄可溶性砷含量的影响。方法采用雄黄与牛黄解毒片中的7种单味药按牛黄解毒片处方比例分别组方分为9组供试品并经人工胃液处理后,用分光光度法分别测定可溶性砷的含量。结果与雄黄组相比,雄黄与处方中各组分单独组方后测得的可溶性砷含量均有不同程度降低。其中大黄+雄黄组和甘草+雄黄组使可溶性砷含量减少为84.9%和81.1%,而冰片+雄黄组等影响不显著。结论牛黄解毒片中的大黄、甘草等与雄黄配伍能较显著地抑制雄黄中可溶性砷的溶出,为进一步探讨雄黄复方中影响可溶性砷盐的主要物质提供参考依据。

去雄黄牛黄解毒片抗菌及解热作用研究

去雄黄牛黄解毒片体外抑菌试验对金葡菌和甲型链球菌最敏感 ,其MIC分别为 7 8和 15 6mg/ml ;体内抗菌试验ig1 7和 0 8g/kg ,对乙型链球菌感染的小鼠有明显的保护作用 ,可使死亡率明显减少。本品尚有明显的解热作用 ,能明显对抗霍乱菌苗和二硝基酚引起的家兔和大鼠体温升高 ,上述作用与等剂量的牛黄解毒片相当。

HPLC法同时测定牛黄解毒片中黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素的含量

目的：建立牛黄解毒片多成分（黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素）含量测定方法,完善牛黄解毒片质量控制标准。方法：以Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm,5μm）为色谱柱,检测波长：260nm,进样量：10μL,柱温：30℃,流速：1.0m L/min,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸为流动相B,进行梯度洗脱。结果：含量测定中黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄素的线性范围依次是5.06~202.4μg/m L、1.836~30.6μg/m L、0.196~7.84μg/m L、0.992~19.84μg/m L;相关系数R2依次是0.999 7、0.999 1、0.999 8、0.999 8;平均回收率分别是99.17%（RSD=0.72%）、97.46%（RSD=0.85%）、97.91%（RSD=1.97%）、98.23%（RSD=0.82%）（n=6）。结论：该方法准确度高,可以用于牛黄解毒片的质量评价。

去雄黄牛黄解毒片抗流感病毒作用的研究

去雄黄牛黄解毒片ig 0 5、1 0和 2 0 g/kg连续 5天 ,高剂量组能显著降低流感病毒鼠肺适应株 (PR/8)对小鼠的致死率 ,延长其染毒后的平均存活时间 ;且高、中剂量组能明显抑制PR/8所致小鼠肺炎 ,降低其肺指数。本品的作用与等剂量的牛黄解毒片相当。

雄黄及含雄黄复方对炎症介质IL-1β、IL-6、TNF-α和NO的影响

目的:研究雄黄和含雄黄复方对病理状态下(感染性脑损伤模型、发热模型)炎症介质IL-1β、IL-6、TNF-α和NO的影响,探讨雄黄的"解毒"作用机理。方法:用百日咳菌造成感染性大鼠脑损伤模型,用酵母菌造成大鼠发热模型,取血用ELISA法测定血清中的炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平,比色法测定脑组织、血清中一氧化氮合酶(NOS)及其同工酶(诱导型一氧化氮合酶iNOS)的活力。结果:雄黄和安宫牛黄散均可显著降低脑损伤大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平,其中IL-1β回复到正常水平,IL-6和TNF-α的降幅随雄黄剂量的增大而增大;雄黄和安宫牛黄散均可显著抑制脑组织中NOS和iNOS的活力,复方的抑制作用大于雄黄。雄黄和牛黄解毒片可显著降低发热大鼠血清IL-1β水平,药后4h基本回复到正常水平;药后2h牛黄解毒片可显著降低血清NOS和iNOS的活力。结论:抑制病理状态下过度释放的炎症介质(IL-1β、IL-6、TNF-α和NO)可能是雄黄在复方中发挥"解毒"功效的途径之一。

含雄黄中药复方牛黄解毒片毒性的研究进展

牛黄解毒片是著名的清热解毒药物,被2015年版《中国药典》一部收载,临床上使用广泛。因为方中包含有毒中药雄黄,其安全性广受关注。本文从安全性研究,牛黄解毒片配伍对雄黄毒性、可溶性砷以及砷形态的影响等方面对含雄黄中药复方牛黄解毒片毒性的研究进展加以总结,为其深入研究及临床合理应用提供参考。

系统指纹定量法评价牛黄解毒片毛细管电泳指纹图谱

目的建立牛黄解毒片(Niuhuang Jiedu tablets,NHJDT)高效毛细管电泳法(HPCE)指纹图谱,按系统指纹定量法评价其质量。方法采用高效毛细管电泳法,以甘草苷为参照物峰,确定19个共有指纹峰,建立了NHJDT-HPCE指纹图谱。以宏定性相似度Sm和宏定量相似度Pm为参量对15批NHJDTs进行聚类分析,确定用其中10批生成对照指纹图谱(RFP),以此RFP为标准用系统指纹定量法鉴别评价15批NHJDTs质量。结果鉴别出9批质量合格,1批均化系数相对偏差偏高,4批含量明显偏低,1批含量明显偏高。结论将系统指纹定量法评价HPCE指纹图谱的结果与HPLC结果相比较,结果基本一致,证明系统指纹定量法评价中药质量具有真实、可靠与准确的特点。

HPLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量

高效液相色谱法测定牛黄解毒片中人工牛黄含量。采用Kromasil C18柱,以甲醇-三氯甲烷-0.1%磷酸溶液（81∶13∶6）为流动相;检测波长：450nm;流速：1mL·min^-1。胆红素在0.00525～0.0525μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9998。平均回收率为101.44%,RSD=1.7%。本方法操作简单,重复性好,结果准确,可以控制本制剂质量。

雄黄及含雄黄复方对应激蛋白HSP70和HO-1的影响

目的:研究雄黄和含雄黄复方对病理状态下应激蛋白(热休克蛋白70、血红素氧合酶-1)的影响,探讨雄黄的"解毒"作用机理。方法:制备大鼠感染性脑损伤模型,雄黄(75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg)组、安宫牛黄散(1.5g/kg)组灌胃后3h取血和脑组织;另制备大鼠发热模型,灌胃雄黄(90mg/kg)、牛黄解毒片(1.404g/kg),分别于药后1h、2h、4h组取血。用ELISA法测定脑组织、血清中的热休克蛋白70(HSP70)含量,用双波长分光光度法测定脑组织、血清中的血红素氧合酶-1(HO-1)活力。结果:高剂量雄黄和安宫牛黄散使感染性脑损伤大鼠脑组织中的HSP70含量比模型组显著增加(17.9%、30.5%)。雄黄给药后1h和2h使发热大鼠血清HSP70水平比模型组显著上升(36.1%和18.0%),牛黄解毒片给药后1h、2h和4h使发热大鼠血清HSP70水平显著上升(54.6%、19.8%和21.2%)。雄黄对脑损伤大鼠脑组织和血清中的HO-1活力影响不显著;安宫牛黄散使脑损伤大鼠脑组织和血清中的HO-1活力增加(24.3%和12.1%)。雄黄在药后1h、2h和4h分别使发热大鼠血清HO-1活力比模型组增加25.4%、46.6%和41.0%;牛黄解毒片在药后1h、2h和4h使发热大鼠血清HO-1活力比模型组增加1.07倍、1.53倍和94.8%。结论:一定剂量的雄黄和含雄黄复方可诱导、激活病理状态下大鼠体内的应激蛋白HSP70、HO-1,两种含雄黄复方提升应激蛋白水平的幅度大于雄黄单独给药。雄黄提升病理状态下机体的应激水平可能是其发挥"解毒"作用的途径之一。

不同厂家牛黄解毒片质量的灰色模式识别研究

在灰色关联分析的基础上,构建了一个评价中药质量的模式识别模型,并将其用于不同厂家牛黄解毒片质量的评价。综合评价结果与实际情况基本相符。与统计模式识别模型比较,灰色模式识别具有计算简便、适应范围广的特点。

牛黄解毒片的显微鉴别及薄层鉴别

〔目的〕对牛黄解毒片进行显微鉴别,并使用薄层色谱对其中的6种有效成分进行二次展开。〔方法〕先在显微镜下观测大黄特有的簇晶,确定鉴别对象有大黄。然后,以正己烷、乙酸乙酯、甲酸(30∶10∶0.36)为鉴别大黄5种成分(芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚)的一次展开剂,以乙酸乙酯、丁酮、甲酸、水(10∶7∶1∶1)为分离出黄芩苷的二次展开剂。〔结果〕通过显微鉴别可以清晰地看到大黄簇晶,且通过二次展开可以在薄层板上清晰地看到分离的6种成分与相应的标准品在相同的位置。〔结论〕结果表明,此方法简便、分离斑点清晰、重现性好、专属性强,可为重新制定牛黄解毒片的鉴别标准提供依据。

原子荧光光度法测定牛黄解毒片中可溶性砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)

用原子荧光光度法测定牛黄解毒片中可溶性砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)。对牛黄解毒片中可溶性砷的基体效应进行了考查,探讨了HCl酸度、还原剂NaBH4浓度对As(Ⅲ)和As(Ⅴ)的测定影响,确定了在酸性介质HCl质量分数为10％-15％,还原剂NaBH4质量分数为2.0％-2.5％时,用校准曲线法分别测定As(Ⅲ)和As(Ⅴ)与As(Ⅲ)的总量,用差减法测定As(Ⅴ)含量。对同一厂家生产的牛黄解毒片进行6次分析,As(Ⅲ)和As(Ⅴ)的相对标准偏差分别为0.80％和2.90％,As(Ⅲ)和As(Ⅴ)的加标回收率分别96.7％-103.5％和109.0％-116.8％。

牛黄解毒片的溶出度测定

目的建立牛黄解毒片中黄芩苷的溶出度测定方法,为质量控制提供方法和参数.方法以1%乙醇溶液作为溶出介质,按桨法操作,用HPLC法测定.绘制牛黄解毒片的累积溶出度曲线,并运用电子表格Excel软件处理药物溶出度数据,提取参数(Td,m)并对参数进行相关性检验.结果平均回收率为102.5%,RSD=1.60%(n=9);在1～10 μg·ml-1范围内,浓度与峰面积呈良好的线性(r=0.9994);转速对样品影响较小,受溶剂影响较大.对不同厂家不同批次的牛黄解毒片进行了溶出度测定,溶出参数有极显著性差异(P＜0.01).结论所用方法灵敏、准确、快速,适用于牛黄解毒片的质量控制.

浅析牛黄解毒片中砷含量及对其安全性的影响

牛黄解毒片是临床用清热解毒药,但牛黄解毒片在使用中常出现一些不良反应,国外对该品种的安全性评价也较为片面。本文对造成牛黄解毒片不良反应的常见原因及砷含量对其安全性的影响进行总结,针对牛黄解毒片目前存在的问题提出一些建议与思考,以期为牛黄解毒片及其他含砷中药复方制剂合理化标准的制定提供参考,推进中药国际化进程。