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Nogo-66受体在大鼠神经组织中的表达 被引量:7
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作者 谢琳 贺翔鸽 +4 位作者 何凤慈 马建洲 龙在云 王永堂 刘媛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期2335-2337,共3页
目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切... 目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切片中NgR蛋白均表达阳性,荧光染色位于神经元及其突起。9只大鼠坐骨神经切片中NgR蛋白均表达阴性。结论在大鼠中枢神经系统神经元中NgR广泛分布,而在周围神经坐骨神经则无NgR表达,提示NgR的阳性表达与中枢神经系统再生能力低下密切相关。 展开更多
关键词 中枢神经系统 周围神经系统 NgR蛋白 免疫荧光组织化学 激光共聚焦显微镜
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Nogo-66融合蛋白的原核表达及鉴定 被引量:3
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作者 谢琳 贺翔鸽 +2 位作者 苏踊跃 陈渝 Xin-fu ZHOU 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期256-258,共3页
目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定。方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋... 目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定。方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋白,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western免疫印迹鉴定。结果测序鉴定Nogo-66开放阅读框成功插入pET-46-EK/LIC质粒;重组质粒在大肠杆菌中成功表达大鼠Nogo-66蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量(Mr)约7000,WesternBlot结果证实表达产物融合有聚组氨酸标签。结论应用原核表达系统成功表达了Nogo-66蛋白,为下一步制备Nogo-66蛋白疫苗及疫苗功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 Nogo-66 原核表达 融合蛋白
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高苯丙氨酸对大鼠皮层神经元Nogo66受体的影响 被引量:2
3
作者 黄成姣 顾学范 +3 位作者 张拥军 叶军 李端 黄丽素 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第2期211-215,共5页
目的该文旨在了解高苯丙氨酸(Phe)对大脑皮层神经元Nogo66受体(NgR)表达的影响,以探讨NsR是否参与高Phe脑损伤的发病。方法采取体外模拟高Phe(0.9mM)环境,原代培养胎龄16~18d的sD胎鼠皮层神经元,用免疫荧光方法观察高Phe作... 目的该文旨在了解高苯丙氨酸(Phe)对大脑皮层神经元Nogo66受体(NgR)表达的影响,以探讨NsR是否参与高Phe脑损伤的发病。方法采取体外模拟高Phe(0.9mM)环境,原代培养胎龄16~18d的sD胎鼠皮层神经元,用免疫荧光方法观察高Phe作用0h,12h,24h之后神经元轴突长度和生长锥塌陷情况,并用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测高Phe作用0h,12h,24h和48hNgR mRNA和蛋白的表达情况。结果①高Phe作用12h,24h组神经元轴突长度与对照组相比明显变短(均P〈0.05),0h,12h和24h生长锥塌陷比率分别为(3.5±1.5)%,(12.5±9.7)%和(24.1±4.5)%,12h组和24h组与对照组(0h组)相比,生长锥塌陷明显增多(P〈0.01);②荧光定量PCR检测到高Phe作用12h,24h,48h神经元NgRmRNA与alpha.tubulin(仅.Tub,仅微管蛋白)的相对表达量轻度升高,但Ct值差异无显著性;③Western-blot检测发现高Phe作用12h,24h和48h的神经元NgR蛋白明显增加,12h,24h和48h组的相对比值分别为对照组的9.0,9.4,12.6倍(P〈0.05)。结论高Phe可使神经元NgR受体表达增高,其可能为高Phe导致脑损伤神经元生长锥塌陷、突起生长减慢的机制之一。 展开更多
关键词 高苯丙氨酸 神经元 NOGO 66受体 大鼠
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Nogo-66受体在神经元生长锥中的表达 被引量:3
4
作者 熊南翔 赵洪洋 张方成 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期622-624,共3页
为探讨Nogo-66受体在神经元生长锥中的定位及机能意义,本研究采用免疫荧光染色法,激光共聚焦显微镜下观察在原代培养小脑颗粒细胞生长锥的表达及其定位特征。结果发现,Nogo-66受体密集分布在细胞质和胞膜、神经突起内,延伸至生长锥体部... 为探讨Nogo-66受体在神经元生长锥中的定位及机能意义,本研究采用免疫荧光染色法,激光共聚焦显微镜下观察在原代培养小脑颗粒细胞生长锥的表达及其定位特征。结果发现,Nogo-66受体密集分布在细胞质和胞膜、神经突起内,延伸至生长锥体部C区和P区内,P区密度更高。Nogo-66受体定位于神经元生长锥中,提示Nogo-66受体可能参与轴突延伸和寻路的活动。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 NOGO-A 生长锥 表达
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RNA干扰沉默神经干细胞Nogo-66受体基因阻断Nogo-66抑制神经突生长作用的研究 被引量:5
5
作者 王丰 朱悦 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期642-647,共6页
目的检测Nogo-66是否对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成的神经元具有神经突生长抑制作用,以及其抑制作用是否可以通过沉默Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)基因的方法进行阻断。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,经小分子干扰RNA(s... 目的检测Nogo-66是否对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成的神经元具有神经突生长抑制作用,以及其抑制作用是否可以通过沉默Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)基因的方法进行阻断。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,经小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染以沉默NgR基因表达,用免疫荧光法和Western blot检测神经干细胞在转染前后NgR基因的表达。取神经干细胞分为四组,均在含10%胎牛血清的培养基中分化。对照组不加干预因素;Nogo-P4组在分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-P4;siRNA组神经干细胞经siRNA转染使NgR基因表达沉默后开始分化;siRNA加Nogo-P4组神经干细胞经siRNA转染后在含有10%胎牛血清和Nogo-P4的培养基中分化。免疫荧光法标记分化形成的神经元,测量神经突长度,比较各组神经突长度的变化。结果悬浮培养的细胞形成典型的神经球,经免疫荧光检测Nestin表达阳性。加入10%胎牛血清分化1周后,可观察到神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白质和髓鞘碱性蛋白标记阳性的细胞。siRNA转染后24h,大部分神经干细胞NgR基因染色转为阴性,Western blot检测神经干细胞NgR基因表达显著降低,NgR基因阻断效率为90.35%±3.10%。神经干细胞分化第3天形成的神经元神经突长度在对照组为97.80±6.97μm,Nogo-P4组为80.54±6.75μm,siRNA组为92.14±7.27μm,siRNA加Nogo-P4组为94.01±8.37μm。Nogo-P4组与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组、siRNA组和siRNA加Nogo-P4组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Nogo-66对神经干细胞分化形成的神经元有神经突生长抑制作用,可以通过RNA干扰技术使神经干细胞NgR基因表达沉默,并阻断Nogo-66抑制神经突生长的作用。 展开更多
关键词 神经干细胞 Nogo-66 Nogo-66受体 RNA干扰
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Nogo-66拮抗性多肽的筛选及其对脊髓损伤大鼠轴突再生的影响 被引量:1
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作者 陈金荣 石增立 +4 位作者 杨成 刘凤 石磊 刘巍 袁文丹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期88-92,共5页
目的:筛选与Nogo-66特异性结合的多肽,并进行初步功能检测。方法:采用了核糖体展示技术,即体外人工合成引物和含36个随机序列的寡核苷酸,通过两轮PCR构建随机DNA文库,然后在体外进行偶联的转录和翻译,得到含随机12肽的核糖体文库,并利... 目的:筛选与Nogo-66特异性结合的多肽,并进行初步功能检测。方法:采用了核糖体展示技术,即体外人工合成引物和含36个随机序列的寡核苷酸,通过两轮PCR构建随机DNA文库,然后在体外进行偶联的转录和翻译,得到含随机12肽的核糖体文库,并利用含随机12肽的核糖体文库对Nogo-66进行初步筛选。用ELISA方法检测筛选到的多肽与Nogo-66的亲和力。同时制备大鼠T10节段挫伤模型,损伤后1d尾静脉注射筛选到的多肽(50g/50l),HRP逆行染色观察脊髓轴突再生情况,并通过BBB评分观察大鼠神经功能恢复。结果:经过10轮筛选,得到了可与Nogo-66结合的氨基酸序列,合成相应的多肽NAPA,同时合成对照多肽NAPB。ELISA结果显示,NAPA与Nogo-66的亲和力明显高于NAPB与Nogo-66的亲和力(P(0.05)。NAPA尾静脉注射4、6周时,实验组大鼠BBB评分明显高于对照组(P(0.05),HRP逆行示踪显示NAPA治疗组的脊髓髓鞘染色清晰,排列规则。结论:筛选得到的Nogo-66的配体多肽NAPA可以明显促进脊髓损伤动物的恢复及脊髓再生。多肽NAPA的筛选成功为脊髓损伤的修复提供新的治疗方法和药物选择。 展开更多
关键词 Nogo-66 核糖体展示技术 亲和筛选 轴突再生
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Nogo-66受体RNA干扰质粒的构建及其干扰效率鉴定 被引量:2
7
作者 范有明 蔡明春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1285-1288,共4页
目的构建及筛选高效率针对Nogo-66受体(Nogo-66receptor,NgR)进行RNA干扰(RNAi)的质粒。方法RT-PCR克隆NgR,插入表达质粒中,构建NgR-GFP融合蛋白表达质粒。根据NgR序列,设计4对针对NgRmRNA进行RNAi的寡核苷酸。退火后,插入短发夹RNA(sho... 目的构建及筛选高效率针对Nogo-66受体(Nogo-66receptor,NgR)进行RNA干扰(RNAi)的质粒。方法RT-PCR克隆NgR,插入表达质粒中,构建NgR-GFP融合蛋白表达质粒。根据NgR序列,设计4对针对NgRmRNA进行RNAi的寡核苷酸。退火后,插入短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达质粒中,构建shRNA表达质粒。将NgR-GFP融合蛋白表达质粒与shRNA表达质粒共转染AAV-293细胞。通过对GFP表达量的观察及Westernblotting定量检测NgR-GFP融合蛋白表达量,鉴定shRNA表达质粒对NgR的干扰效率。结果针对NgR进行RNAi的4个序列中,有1个序列的干扰效率大于90%以上。结论成功构建了1个针对NgR的高效RNAi表达质粒。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 RNA干扰 质粒
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Nogo-66抑制神经元神经突生长的研究 被引量:1
8
作者 王丰 朱悦 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期2196-2198,共3页
目的观察在神经干细胞分化过程中Nogo-66对神经元神经突生长是否存在抑制作用。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,在神经干细胞分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-p4,NSE抗体免疫荧光标记神经元,使用Image-ProPlus5.0软件测量神... 目的观察在神经干细胞分化过程中Nogo-66对神经元神经突生长是否存在抑制作用。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,在神经干细胞分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-p4,NSE抗体免疫荧光标记神经元,使用Image-ProPlus5.0软件测量神经突长度。结果对照组神经干细胞分化第3天神经元神经突长度为(97.80±6.97)μm/cell,加入Nogo-p4的实验组神经元神经突长度为(80.54±6.75)μm/cell。实验组和对照组神经元神经突长度差异有显著性,P<0.01。实验组神经元神经突长度较对照组缩短约17%。结论Nogo-66对神经干细胞分化过程中形成的神经元具有神经突生长抑制作用。 展开更多
关键词 Nogo-66 神经干细胞
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Nogo-66受体在脂质筏中的定位
9
作者 熊南翔 赵洪洋 +2 位作者 张方成 赵甲山 朱贤立 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期37-39,F0004,共4页
目的探讨Nogo-66受体(NgR)在神经元胞膜脂质筏中的定位。方法利用免疫荧光双标法检测NgR和脂质筏特异标志物穴蛋白(Caveolin)在培养的小脑颗粒神经元上的表达,并用Western blot法检测以去垢剂法提取的脂质筏中NgR的表达。结果免疫荧光... 目的探讨Nogo-66受体(NgR)在神经元胞膜脂质筏中的定位。方法利用免疫荧光双标法检测NgR和脂质筏特异标志物穴蛋白(Caveolin)在培养的小脑颗粒神经元上的表达,并用Western blot法检测以去垢剂法提取的脂质筏中NgR的表达。结果免疫荧光双标显示NgR和Caveolin有共同的表达部位,Western blot分析发现脂质筏中NgR的表达为阳性。结论在小脑颗粒神经元胞膜脂质筏中有NgR的表达,提示脂质筏有可能促进NgR的信号转导。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 脂质筏 轴突再生 NOGO-A蛋白
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GST-Nogo-66融合蛋白的表达及纯化
10
作者 范有明 黄缄 +3 位作者 刘福玉 蔡明春 高钍琪 黄庆愿 《华南国防医学杂志》 CAS 2010年第2期112-115,共4页
目的建立GST-Nogo-66融合蛋白的表达及纯化方法,获取高纯度Nogo-66蛋白。方法RT-PCR克隆F344大鼠大脑皮层Nogo-66基因片段,插入pGEX-6P-3表达质粒中,构建GST-Nogo-66融合蛋白表达质粒。通过GST-Nogo-66融合蛋白表达及纯化实验,确立有效... 目的建立GST-Nogo-66融合蛋白的表达及纯化方法,获取高纯度Nogo-66蛋白。方法RT-PCR克隆F344大鼠大脑皮层Nogo-66基因片段,插入pGEX-6P-3表达质粒中,构建GST-Nogo-66融合蛋白表达质粒。通过GST-Nogo-66融合蛋白表达及纯化实验,确立有效的表达及纯化GST-Nogo-66融合蛋白的方法。结果得到了较高纯度的GST-Nogo-66融合蛋白。结论成功建立了GST-Nogo-66融合蛋白的表达及纯化方法,为Nogo-66蛋白功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 GST-Nogo-66 克隆 表达 纯化
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Nogo-66蛋白质的氨基酸序列分析
11
作者 岳红云 贺翔鸽 +1 位作者 燕振国 马岩梅 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第4期660-662,共3页
目的:分析Nogo-66蛋白的氨基酸序列特征,分析其产生免疫应答的机会。方法:ProPred web interface程序,ProPred MHC-ⅡBinding Peptide prediction Server抗原表位分析软件,对Nogo-66蛋白进行分析,查找T细胞抗原表位,分析分子量及氨基酸... 目的:分析Nogo-66蛋白的氨基酸序列特征,分析其产生免疫应答的机会。方法:ProPred web interface程序,ProPred MHC-ⅡBinding Peptide prediction Server抗原表位分析软件,对Nogo-66蛋白进行分析,查找T细胞抗原表位,分析分子量及氨基酸残基特征。结果:Nogo-66蛋白有6个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位:LGHVNCTIK VQKYSNSAL LVQKYSNSA LRRLFLVDD YKGVIQAIQ FLVDDLVDS,铆钉残基明确。结论:Nogo-66蛋白的氨基酸序列决定了其可能具备免疫原性,具有刺激免疫系统产生T淋巴细胞介导的免疫反应的分子基础。 展开更多
关键词 Nogo-66蛋白 氨基酸序列 神经免疫保护
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Nogo-66受体LRR功能区的真核分泌表达
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作者 赵湘辉 金卫林 +1 位作者 李容 鞠躬 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第2期104-107,共4页
目的 :构建含有人Nogo 6 6受体LRR功能区段cDNA序列的真核分泌型表达载体 ,并在COS 7细胞中表达 .方法 :采用定向克隆的策略 ,在保证阅读框正确的前提下 ,从原核表达载体pES His/LRR上切下编码LRR的DNA片段 ,亚克隆入真核分泌型表达载体... 目的 :构建含有人Nogo 6 6受体LRR功能区段cDNA序列的真核分泌型表达载体 ,并在COS 7细胞中表达 .方法 :采用定向克隆的策略 ,在保证阅读框正确的前提下 ,从原核表达载体pES His/LRR上切下编码LRR的DNA片段 ,亚克隆入真核分泌型表达载体pSectag2B中 ,构建LRR与c Myc表位、6His标签基因相融合的真核表达质粒pSectag2B/LRR ,在Lipo fectamine 2 0 0 0介导下瞬时转染COS 7细胞 .结果 :利用针对c Myc表位和 6His标签的抗体分别作免疫荧光和Westernblot,证实胞内表达正确融合的目的蛋白 ;同时双抗体夹心ELISA也检测到转染细胞上清中存在融合蛋白 .结论 :真核表达质粒构建成功 ,转染后目的蛋白在COS 展开更多
关键词 Nogo-66受体 LRR 真核分泌表达 DNA序列
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氢氧化铝佐剂对Nogo-66免疫原性的影响
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作者 岳红云 贺翔鸽 +2 位作者 燕振国 曹虹 马岩梅 《山西医科大学学报》 CAS 2010年第1期24-26,共3页
目的通过不同浓度氢氧化铝吸附Nogo-66后对SD大鼠免疫特征的影响,探索氢氧化铝佐剂对Nogo-66免疫原性的影响。方法氢氧化铝混悬液1ml与4%Nogo-66蛋白溶液以体积比例1∶1,1∶2,1∶3配制,充分微量震荡混匀30min。微板考马斯亮蓝蛋白定量... 目的通过不同浓度氢氧化铝吸附Nogo-66后对SD大鼠免疫特征的影响,探索氢氧化铝佐剂对Nogo-66免疫原性的影响。方法氢氧化铝混悬液1ml与4%Nogo-66蛋白溶液以体积比例1∶1,1∶2,1∶3配制,充分微量震荡混匀30min。微板考马斯亮蓝蛋白定量法计算Nogo-66蛋白质的氢氧化铝吸附率。吸附氢氧化铝佐剂的Nogo-66蛋白免疫接种SD大鼠,免疫频次为1次/7d,共免疫4次。流式细胞术检测处于活跃分裂期细胞数目。结果单纯蛋白质组在所有实验组中,免疫原性最高,与其余实验组对比均具有统计学差异(P<0.05),中剂量佐剂组与小剂量佐剂组无统计学差异,二者与高剂量佐剂组对比均有显著性差异(P<0.05)。结论氢氧化铝佐剂对Nogo-66的影响表现为对免疫原性的抑制作用,其原因可能由于其刺激吞噬细胞活性,抑制抗原表位释放。 展开更多
关键词 氢氧化铝佐剂 Nogo-66蛋白 免疫原性
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Nogo-66蛋白氨基酸肽的克隆及在原核细胞的表达
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作者 陈昌杰 章尧 《蚌埠医学院学报》 CAS 2005年第5期380-382,共3页
目的:克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核... 目的:克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核表达载体pET-42a(+),酶切及测序证实序列正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白-Nogo-66。结果:克隆了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,构建了融合蛋白的重组表达质粒,融合蛋白的表达随着时间延长增加。结论:获得了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因及其原核表达产物,对研究Nogo蛋白的生物学功能及其mAb的制备奠定基础。 展开更多
关键词 NOGO蛋白 克隆 原核细胞
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Nogo-66受体在成年大鼠脊髓白质内胶质细胞的分布 被引量:5
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作者 胡泽岚 刘莹莹 +2 位作者 金卫林 刘惠玲 鞠躬 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第16期1444-1447,共4页
目的 :研究Nogo 6 6受体 (NgR)在成年大鼠脊髓白质的分布情况 .方法 :选用正常雄性SD大鼠脊髓切片 ,进行免疫组织化学、免疫荧光双标和包埋前免疫电镜染色 ,观察NgR免疫阳性物质在脊髓白质的定位情况 .结果 :在光镜水平可观察到NgR阳性... 目的 :研究Nogo 6 6受体 (NgR)在成年大鼠脊髓白质的分布情况 .方法 :选用正常雄性SD大鼠脊髓切片 ,进行免疫组织化学、免疫荧光双标和包埋前免疫电镜染色 ,观察NgR免疫阳性物质在脊髓白质的定位情况 .结果 :在光镜水平可观察到NgR阳性的点状结构主要分布在脊髓白质胶质细胞胞体周边和突起上 ,且与细胞膜关系密切 ;在电镜水平可观察到NgR阳性的胶体金颗粒分布在星形胶质细胞之间 ,寡突胶质细胞之间以及星形胶质细胞和寡突胶质细胞之间的缝隙连接上 .结论 :本研究提供了NgR在正常成年大鼠脊髓白质胶质细胞分布并且在缝隙连接定位的形态学证据 。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 神经胶质/细胞学 缝隙接合部 显微镜检查 电子 显微镜检查 共焦
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Nogo-66受体与髓鞘相关抑制因子在LPS诱导宫内感染所致早产鼠脑白质损伤中的表达
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作者 童玲 张士发 +2 位作者 王清萍 孙美 张开京 《皖南医学院学报》 CAS 2015年第1期1-6,共6页
目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导宫内感染后Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)、髓鞘相关抑制因子(myelin associated inhibitory factors,MAIFs)——Nogo-A、MAG和OMgp mRNA及活化Rho A蛋白在早产鼠脑白质组织中的变化... 目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导宫内感染后Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)、髓鞘相关抑制因子(myelin associated inhibitory factors,MAIFs)——Nogo-A、MAG和OMgp mRNA及活化Rho A蛋白在早产鼠脑白质组织中的变化。方法:应用LPS和RU486诱导分别建立宫内感染所致早产鼠模型和单纯早产鼠模型,各组随机选取40只,雌雄不拘,即WMD组和对照组。实时荧光定量PCR检测P1(1日龄)、P3、P5和P7早产鼠脑白质MAIFs(Nogo-A、MAG、OMgp)和NgR mRNA,Western Blot检测脑组织活化Rho A蛋白,HE染色观察脑组织病理学改变。结果:与对照组相比,WMD组Nogo-A、MAG、OMgp和NgR mRNA在P1、P3、P5、P7均明显增高(P<0.05);活化Rho A蛋白水平在相应的时间点也明显增高(P<0.05),P5增高更显著,且与NgR、Nogo-A、MAG和OMgp mRNA的表达均呈正相关(r=0.802 6、0.758 4、0.656 5、0.777 8,P<0.05)。结论:LPS诱导宫内感染所致早产鼠脑WMD,可能通过上调MAIFs和共同受体NgR的表达,激活相应靶细胞内Rho A信号通路参与WMD的发病机制。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 髓鞘相关抑制因子 宫内感染 脑白质损伤
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Nogo-66受体分子在体外培养的星形胶质细胞中的表达
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作者 孙芳 金卫林 +1 位作者 龙梅 鞠躬 《神经科学通报》 CSCD 2005年第4期273-277,共5页
目的检测Nogo-66受体(NgR)在体外培养的大鼠星形胶质细胞中的表达。方法利用RT-PCR、West-ern Blot和间接免疫荧光染色技术,检测原代培养并纯化的星形胶质细胞中NgRm RNA和蛋白分子的表达。结果利用RT-PCR技术,从星形胶质细胞总RNA中扩... 目的检测Nogo-66受体(NgR)在体外培养的大鼠星形胶质细胞中的表达。方法利用RT-PCR、West-ern Blot和间接免疫荧光染色技术,检测原代培养并纯化的星形胶质细胞中NgRm RNA和蛋白分子的表达。结果利用RT-PCR技术,从星形胶质细胞总RNA中扩增出特异的NgR条带;利用Western Blot技术,从星形胶质细胞抽提物中检测到64kD特异性的NgR反应条带;间接免疫荧光染色和Confocal显微镜进一步显示,星形胶质细胞中的NgR免疫反应物主要位于细胞内。同时,来源于大鼠的C6胶质瘤细胞也证明表达NgR蛋白。结论体外培养的星形胶质细胞中表达NgR分子,这为证明NgR在体内胶质细胞中的表达提供了更直接的证据。 展开更多
关键词 Nogo-66受体 星形胶质细胞 体外 表达
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Transplantation of Nogo-66 receptor gene-silenced cells in a poly(D,L-lactic-co-glycolic acid) scaffold for the treatment of spinal cord injury 被引量:8
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作者 Dong Wang Yuhong Fan Jianjun Zhang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第8期677-685,共9页
Inhibition of neurite growth, which is in large part mediated by the Nogo-66 receptor, affects neural regeneration following bone marrow mesenchymal stem cell transplantation. The tissue engineering scaffold poly(D,L... Inhibition of neurite growth, which is in large part mediated by the Nogo-66 receptor, affects neural regeneration following bone marrow mesenchymal stem cell transplantation. The tissue engineering scaffold poly(D,L-lactide-co-glycolic acid) has good histocompatibility and can promote the growth of regenerating nerve fibers. The present study used small interfering RNA to silence Nogo-66 receptor gene expression in bone marrow mesenchymal stem cells and Schwann cells, which were subsequently transplanted with poly(D,L-lactide-co-glycolic acid) into the spinal cord lesion regions in rats. Simultaneously, rats treated with scaffold only were taken as the control group. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemistry revealed that at 4 weeks after transplantation, rats had good motor function of the hind limb after treatment with Nogo-66 receptor gene-silenced ceils prus the poly(O,L-lactide-co-glycolic acid) scaffold compared with rats treated with scaffold only, and the number of bone marrow mesenchymal stem cells and neuron-like cells was also increased. At 8 weeks after transplantation, horseradish peroxidase tracing and transmission electron microscopy showed a large number of unmyelinated and myelinated nerve fibers, as well as intact regenerating axonal myelin sheath following spinal cord hemisection injury. These experimental findings indicate that transplantation of Nogo-66 receptor gene-silenced bone marrow mesenchymal stem cells and Schwann cells plus a poly(D,L-lactide-co-glycolic acid) scaffold can significantly enhance axonal regeneration of spinal cord neurons and improve motor function of the extremities in rats following spinal cord injury. 展开更多
关键词 neural regeneration spinal cord injury bone marrow mesenchymal stem cells Schwann cells poly(D L-lactide-co-glycolic acid) Nogo-66 receptor gene rats gene silencing grants-supportedpaper photographs-containing paper neuroregeneration
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左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织Nogo-66、NgR、NFP表达观察 被引量:3
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作者 张洋 王显鹤 《山东医药》 CAS 2019年第30期37-39,共3页
目的 观察左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP)表达情况.方法 选用SPF级新生11 d的KM小鼠80只,随机分为观察组和对照组各40只,采用右侧颈总动脉... 目的 观察左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP)表达情况.方法 选用SPF级新生11 d的KM小鼠80只,随机分为观察组和对照组各40只,采用右侧颈总动脉结扎—浸入低氧环境的方式制备HIBI模型,制模后第1天观察组小鼠灌胃给予左旋丁基苯酞及采用高压氧舱治疗,对照组不作特殊处理,比较两组制模后1、3、5、7、10天脑组织勿动蛋白-66(Nogo-66)、勿动蛋白-66受体(NgR)、神经丝蛋白(NFP).结果 与对照组比较,观察组制模后1、3、5、7、10天Nogo-66、NgR、NFP表达升高(P均<0.05);与对照组比较,观察组1、3、5、7、10天NFP表达升高(P<0.05).结论 左旋丁基苯酞灌胃联合高压氧治疗1、3、5、7、10天后缺氧缺血性脑损伤小鼠脑组织Nogo-66、NgR表达下降,NFP表达升高. 展开更多
关键词 左旋丁基苯酞 高压氧舱 缺氧缺血性脑损伤 勿动蛋白-66 勿动蛋白-66受体 神经丝蛋白
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编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定 被引量:4
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作者 张沁丽 秦新月 +1 位作者 殷成 彭彦 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第1期55-58,共4页
目的:构建Nogo受体(NgR)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行缺血性脑损伤的基因治疗研究奠定基础.方法:将前期构建的大鼠Nogo受体mRNA的shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚... 目的:构建Nogo受体(NgR)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行缺血性脑损伤的基因治疗研究奠定基础.方法:将前期构建的大鼠Nogo受体mRNA的shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含NgR基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌.将pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、PCR产物测序及病毒滴度测定.结果:结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后的PCR及DNA测序结果证明Adeno-U6-shRNA包被成功.结论:成功构建了大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体Adeno-U6-shRNA,将为应用基因沉默技术研究NgR在缺血性脑损伤后神经再生中的作用奠定基础. 展开更多
关键词 NOGO受体 RNA干扰 腺病毒
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