麦冬地芍汤对NOD小鼠颌下腺的保护作用

目的观察麦冬地芍汤对干燥综合征模型(nonobese diabetic mouse,NOD)小鼠颌下腺的保护作用。方法取雌性NOD小鼠33只,随机分为模型组、羟氯喹组、麦冬地芍汤组,另取ICR(Institute of Cancer Research)小鼠8只作为空白组。适应性喂养一周后,羟氯喹组、麦冬地芍汤组分别灌服羟氯喹溶液(0.1 g/kg,20 ml/kg)及麦冬地芍汤(10 g/kg,20 ml/kg),空白及模型组生理盐水灌胃。观察小鼠10、13、16周龄唾液流率的变化,18周龄时取颌下腺,对颌下腺进行HE染色,免疫组化法测AQP5的表达。结果与模型组相比,麦冬地芍汤组小鼠16周龄时唾液流率明显改善(P<0.01),18周龄时,麦冬地芍汤组组织学评分低于模型组(P<0.05),AQP5的表达较模型组明显上调(P<0.05)。结论麦冬地芍汤对NOD小鼠颌下腺有保护作用,其机制可能与其上调AQP5的表达相关。

Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用

目的分析Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用。方法取32只分属不同周龄的雌性NOD小鼠,观察其血糖、胰岛HE染色、免疫组织化学染色———检测胰岛素、CD8、Fas、FasL的表达。在分析NOD小鼠胰岛炎中以胰岛或相关细胞为研究单位,从而减少了混杂因素的影响。结果雌性NOD小鼠自6周龄起出现胰岛炎,其评分逐渐增加(P<0.0005),14周龄出现糖尿病。随着胰岛炎的加重:胰岛素阳性细胞减少(P<0.0005),与胰岛炎评分呈负相关(P<0.05);Fas+胰岛细胞增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);FasL+胰岛细胞出现并逐渐增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);浸润细胞表达FasL、CD8,均逐渐增加(P<0.0005)。胰岛细胞的Fas与胰岛素表达之间呈负相关、胰岛素与FasL呈负相关、Fas与FasL呈正相关,浸润细胞的CD8与FasL表达呈正相关,P值均小于0.01。结论在NOD小鼠胰岛炎中,Fas-FasL可能参与β细胞损伤及自身免疫负调节。

骨髓间充质干细胞移植可促进移植胰岛周围新生血管形成

目的探讨胰岛移植联合骨髓间充质干细胞(MSC)移植能否促进移植胰岛周围新生血管形成。方法以非肥胖糖尿病(NOD)小鼠作为受体,将NOD小鼠随机分为4组,联合移植组(6只)、单独胰岛移植组(6只)、单独MSC移植组(6只)、假性移植组(3只)。观察各组NOD小鼠移植后血糖和存活率的变化;采用5-乙炔基-2’脱氧尿苷(Ed U)及d UTP缺口末端标记(TUNEL)方法,在胰岛移植后1、2、4周检测单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的增殖与凋亡情况;采用光学显微镜(光镜)直接观察、组织化学及免疫组织化学的方法观察并定量分析,移植术后2、4、8周单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的周围新生血管密度。结果 MSC联合移植与胰岛单独移植均能明显改善移植后小鼠的血糖水平,提高NOD小鼠的存活率。MSC联合移植可促进胰岛细胞再生,减少细胞凋亡。联合移植组移植胰岛周围血管密度明显大于单独胰岛移植组。结论 MSC可以促进移植胰岛周围新生血管生成,增加移植胰岛的血供,保护移植胰岛的功能与活性。

Wnt7a/β-连环蛋白/自身免疫调节因子信号通路参与1型糖尿病的发生

目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组及16周发病组,每组20只;非空腹血糖值连续2次≥11.1 mmol/L视为发生T1D。胰腺HE染色观察胰岛炎发生情况,抗Ins、CD45免疫组织化学染色显示胰岛β细胞或浸润炎性细胞;Western blotting和Real-time PCR检测胸腺Wnt7a、β-catenin、AIRE、Ins、GAD67蛋白水平和mRNA表达;流式细胞术分析胸腺T细胞比例。结果1.随着T1D发生,胰岛组织结构破坏,大量淋巴细胞浸润,残存胰岛细胞减少;Ins^(+)胰岛β细胞周围见大量CD45^(+)细胞聚集。2.随年龄的增加,胸腺Wnt7a、β-连环蛋白(catenin)、AIRE、Ins和GAD67蛋白水平和mRNA表达降低;同周龄发病组小鼠与未发病组小鼠相比,胸腺Ins表达下降。3.与3周组相比,16周未发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例降低;16周发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例升高,CD4、CD8双阳性T细胞比例降低。结论Wnt7a/β-catenin信号通路可能通过调控AIRE表达,下调T1D相关TSAs表达,参与T1D发生发展。

完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究

目的 研究Ｂａｘ 蛋白和热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ 在完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）预防ＮＯＤ 鼠胰岛炎和糖尿病中作用及意义。方法 给４ 周龄雌性ＮＯＤ 鼠后脚板注射５０ μｌ ＣＦＡ 和生理盐水（ＮＳ组） ，于３０ 周龄或糖尿病发生时处死，胰腺组织置１０ ％ 中性福尔马林固定后常规制成石蜡切片，ＨＥ染色后行光镜下胰岛炎评分，ＡＢＣ免疫组化染色Ｂａｘ 蛋白和ＨＳＰ７０ 并光镜下计数。结果 ＣＦＡ 组鼠胰岛内炎计数和胰岛炎评分均数均明显低于ＮＳ组鼠（Ｐ＜ ０．０１）；ＣＦＡ 组鼠无１ 只发生糖尿病，ＮＳ组鼠中有３ 只（６０％ ）发生糖尿病；ＣＦＡ 组鼠胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白阳性率明显低于ＮＳ组鼠，而ＨＳＰ７０ 阳性率明显高于ＮＳ组鼠，均有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１） ； 胰岛炎分值与Ｂａｘ 蛋白阳性率呈正相关（ｒ＝０．６１３） ，与ＨＳＰ７０ 阳性率呈负相关（ｒ＝ － ０．９１３）。结论 ＣＦＡ 能减轻ＮＯＤ 鼠胰岛炎发生程度和预防糖尿病发生，ＣＦＡ能抑制胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白表达和诱导胰岛细胞ＨＳＰ７０ 表达。

IL－2对NOD鼠糖尿病的影响

ＮＯＤ鼠是人类胰岛素依赖型糖尿病的动物模型，其发病与自身免疫有关。环磷酰胺（ＣＰ）可以加速这一过程，使ＮＯＤ鼠糖尿病的发病率提高或提前。一些研究表明：ＮＯＤ鼠的淋巴细胞在淋巴细胞混合反应中（ＭＬＲ），在有或无刺激物的存在下，白细胞介素２（ＩＬ－２）的产量均明显低于正常鼠的淋巴细胞。该实验对注射了一次大剂量的ＣＰ（３００ｍｇ／ｋｇ体重）后的ＮＯＤ鼠试用了ＩＬ－２治疗。结果显示：对于年幼的ＮＯＤ鼠ＩＬ－２治疗１４无可以明显减轻注射ＣＰ后的胰岛破坏加速。病理检查显示三组胰岛炎严重程度积分分别为２９；８１；８８。ＩＬ－２处理组明显低于ＣｏｎＡ处理组与对照组。这个研究还显示，对于１２周龄的ＮＯＤ鼠，经１４天的ＩＬ－２治疗，可以完全预防ＣＰ诱导的糖尿病的发生。糖尿病发病率在ＩＬ－２组为０／１２；对照组为７／１２。但对已发病的ＮＯＤ鼠自发性糖尿病ＩＬ－２不能使其缓解。

NOD鼠胸腺及外周淋巴细胞亚群变化与年龄关系

ＮＯＤ鼠可自发地患糖尿病，该鼠的发病与自身免疫性淋巴细胞对胰岛的浸润，从而引起胰岛β细胞的不断破坏有关。这种破坏可能是由Ｔ淋巴细胞所引起的。雌性ＮＯＤ鼠胸腺及外周淋巴细胞随年龄的增加胸腺细胞数量减少而脾细胞数量增加。用ＣＤ４／ＣＤ８双抗双标检测显示，雌性ＮＯＤ糖尿病鼠胸腺双阴性与单阳性细胞的比例增加而双阳性细胞的比例减少。外周ＣＤ４比ＣＤ８阳性细胞的比值在胰岛炎期增高，在糖尿病期下降。