RNA-蛋白质印迹筛选HBsAg转录后调节因子表达克隆

RNA结合蛋白是基因表达的重要调节因子.RNA蛋白质印迹(Northwesternblot)是近年来国外建立的筛选这类因子的重要方法之一.应用这一方法从肝细胞株HepG2cDNA文库中成功筛选到乙型肝炎病毒表面抗原转录后调节片段互相作用蛋白表达克隆.结果显示:该蛋白与探针结合特异性强,经三轮筛选后,100%克隆为阳性克隆;PCR和EcoRⅠ酶切初步鉴定,编码该蛋白的cDNA长约1kb.

PIP融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其与PRE特异性的结合

目的 表达纯化PIP融合蛋白 ,探讨研究PIP与PRE特异性结合的方法。方法 构建GST PIP融合蛋白表达质粒pGENKS PIP ,表达质粒在大肠杆菌BL2 1中诱导表达GST PIP融合蛋白 ,并用亲和层析柱加以纯化。利用这一融合蛋白通过Northwesternblot、UV crosslinking方法研究PIP与PRE的特异性结合。结果 GST PIP融合蛋白表达质粒pGENKS PIP在大肠杆菌BL2 1中成功地诱导表达了可溶性GST PIP融合蛋白 ,纯化后获得了单一的GST PIP融合蛋白。Northwesternblot和UV crosslinking证实PIP与PRE特异性结合。比较两种方法 ,前者较后者特异性高 ,灵敏度低 ,而后者操作简便。结论 表达和获得纯化的PIP融合蛋白 。