湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者创面愈合及PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的分析湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者创面愈合及PI3K/Akt/eNOS通路的影响。方法分析2022年3月到2023年7月在宜宾市第二人民医院就诊的116例老年烧伤整形术后患者,按照随机数字法分为干预组(n=58)和对照组(n=58),两组患者均采用生理盐水进行创面清洗,对照组在生理盐水清创的基础上给予凡士林油纱治疗,干预组在对照组的基础上加用湿润烧伤膏治疗。采用酶联免疫吸附法检测EGF、bFGF水平,并采用免疫印迹法检测PI3K、Akt、eNOS蛋白表达水平,比较两组患者临床疗效、创面愈合(创面愈合时间、创面愈合率、肉芽生长面积),并比较两组治疗前后疼痛指数(VAS评分)、肉芽组织PI3K/Akt/eNOS通路(PI3K、Akt、eNOS)蛋白水平表达和EGF、bFGF水平。结果干预组的临床疗效、创面愈合率、肉芽生长面积均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而创面愈合时间少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者肉芽组织PI3K、Akt、eNOS蛋白、EGF、bFGF的水平均比治疗前升高,且干预组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者的VAS评分均低于治疗前,且干预组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论湿润烧伤膏对老年烧伤整形术后患者的创面愈合效果较好,且能有效缓解疼痛,提高EGF、bFGF水平,可能是与调节PI3K/Akt/eNOS通路有关。

“起痿3号”联合西地那非对糖尿病勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及AKT/eNOS通路的影响研究

目的:探讨“起痿3号”联合西地那非对糖尿病勃起功能障碍(DED)大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及AKT/eNOS通路的影响。方法:用链脲佐菌素溶液腹腔注射SD雄性大鼠,成功造模糖尿病大鼠。饲养8周后,大鼠颈部注射阿扑吗啡,制备DED大鼠模型。将24只造模成功的大鼠随机分为模型对照组(MC组)、西地那非组[5 mg/(kg·d)](S组)、“起痿3号”低剂量[10 g/(kg·d)]+西地那非组[5 mg/(kg·d)](LQ+S组)及“起痿3号”高剂量[20 g/(kg·d)]+西地那非组[5 mg/(kg·d)](HQ+S组),每组6只,另配置6只空白对照组大鼠(BC组),BC组和MC组给予等量生理盐水,余组大鼠连续给药6周。颈部注射阿扑吗啡观察5组大鼠的勃起次数,通过Western印迹检测大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及p-AKT、eNOS的蛋白表达水平。结果:与BC组比较,所有造模后的大鼠血糖均升高,体质量降低,提示造模成功。与MC组对比,S组、LQ+S组及HQ+S组大鼠模型的勃起次数显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。HQ+S组大鼠勃起次数多于S组大鼠勃起次数,差异具有统计学意义(P<0.05)。与BC组对比,MC组大鼠阴茎海绵体中的Rho-GTP激酶活性表达水平显著提高(P<0.05);HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的Rho-GTP激酶活性表达水平显著低于S组(P<0.05)。各组大鼠阴茎海绵体中的p-AKT蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。与MC组对比,BC组、HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的eNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05);HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的eNOS蛋白表达水平显著高于LQ+S组与S组(P<0.05)。结论:高剂量“起痿3号”联合西地那非能够改善DED大鼠勃起功能,其机制可能与通过抑制Rho-GTP激酶活性和增加e-NOS通路蛋白表达以释放更多NO有关。

中药复方速回初压肽通过PI3K/Akt/eNOS通路对SHR大鼠内皮功能障碍的影响

目的 探讨中药复方速回初压肽通过PI3K/Akt/eNOS信号通路对高血压大鼠的胸主动脉血管内皮的保护作用。方法 将35只15周龄的雄性SHR大鼠随机分为5组:模型组、速回初压肽低、中、高剂量组、培哚普利组,每组7只;以7只同龄的Wistar大鼠作为正常组。无创血压检测系统检测给药前和给药后各组大鼠尾动脉收缩压和舒张压;超声心动图检测各组大鼠的心脏结构的变化;HE染色观察各组大鼠的胸主动脉病理变化;ELISA检测各组大鼠血清中的AngⅡ、ET-1和NO;Western Blot检测各组大鼠胸主动脉的PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达。结果 给药8周后,速回初压肽低、中、高剂量组,培哚普利组大鼠收缩压和舒张压均低于模型组(P<0.05)。超声心动图结果显示,与模型组相比,速回初压肽中、高剂量组,培哚普利组的收缩末期左心室内径(LVIDs)、舒张末期左心室内径(LVIDd)、舒张末期左心室前壁的厚度(LVAWd)和舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)均显著降低(P<0.05)。HE结果显示,与模型组相比,速回初压肽中、高剂量组和培哚普利组大鼠的肿胀的内皮细胞得到改善,血管内皮趋于平滑。ELISA结果表明,与模型组比,速回初压肽中、高剂量组和培哚普利组血清中的NO含量显著升高(P<0.05),Ang II、ET-1含量均显著降低(P<0.05)。Western Blot结果表明,与模型组相比,速回初压肽中、高剂量组和培哚普利组的大鼠胸主动脉中的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS的蛋白表达水平显著上升。结论 中药复方速回初压肽可能通过影响PI3K/Akt/eNOS信号通路促进NO的释放,降低Ang II、ET-1的水平,改善SHR大鼠的内皮功能障碍,对SHR大鼠的血压具有显著的干预作用。

枸杞多糖通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路对去卵巢大鼠心肌产生抗氧化作用

目的:观察枸杞多糖对去卵巢大鼠心肌PI3K/Akt/e NOS信号通路的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组,ELISA法比较各组血清雌激素、LDH及CK水平,检测心肌H_2S含量及氧化应激损伤相关指标,HE染色观察各组心肌的形态变化,Western blot法检测各组大鼠心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果:与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清雌二醇水平降低,心肌H_2S含量和GSH-Px活性下降,心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达均有所降低,心肌ROS活性和MDA含量升高(P<0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增大,血清LDH和CK活性均增多;与去卵巢组比较,枸杞多糖高剂量组大鼠血清雌二醇含量增加(P<0.05),心肌H_2S含量、GSH-Px活性、e NOS蛋白及Akt磷酸化水平均提高,心肌ROS活性和MDA含量下降(P<0.05),血清LDH和CK活性均降低,并且改善大鼠心肌形态的变化。结论:枸杞多糖可以通过调控PI3K/Akt/e NOS通路改善去卵巢大鼠心脏变化防治绝经后心血管病变。

PI3K/Akt/eNOS信号通路在葛根素抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路在葛根素(puerarin)抑制氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法:实时荧光定量PCR检测TF的mRNA表达,Western blot检测TF和Akt的蛋白表达,硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果:与对照组相比,ox-LDL孵育内皮细胞后,内皮细胞TF的mRNA和蛋白表达升高,Akt蛋白磷酸化水平降低,细胞内NO产生减少;而葛根素预孵育内皮细胞1 h后,再用ox-LDL孵育,内皮细胞TF mRNA和蛋白表达下降,Akt蛋白磷酸化升高,细胞内NO产生增多;PI3K抑制剂LY294002和葛根素共同预孵育内皮细胞1 h后,再用ox-LDL孵育,内皮细胞TF的mRNA和蛋白表达升高,Akt蛋白磷酸化降低,细胞内NO产生减少;eNOS抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)和葛根素共同预孵育内皮细胞,也明显阻断葛根素对ox-LDL诱导的内皮细胞TF mRNA和蛋白表达、细胞Akt蛋白磷酸化和细胞内NO产生的作用。结论:葛根素可通过上调PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞TF mRNA和蛋白表达。

益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号途径作用机制研究

目的:观察益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路的影响,探讨其治疗慢传输型便秘的作用机制。方法:共纳入60只SPF级8周龄wister大鼠,将50只大鼠运用“复方地芬诺酯灌胃法”造成慢传输型便秘模型后,随机分成模型组、莫沙必利组、益气健脾通便方低、中、高剂量组,每组各10只,其余10只大鼠设成正常对照组。各组大鼠连续给药4周,以大鼠一般情况、首粒黑便排出时间、粪便含水率、结肠组织一氧化氮(NO)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量、磷酸化蛋白激酶B(P—Akt)阳性细胞面积及蛋白水平表达为观察指标。结果:益气健脾通便方各组均能明显提高大鼠粪便含水率(P<0.05),缩短首粒黑便排出时间(P<0.05),减少结肠组织NO及eNOS含量(P<0.05),提高结肠组织P—Akt阳性细胞面积及蛋白表达量(P<0.05),从而改善模型大鼠便秘症状,以中、高剂量疗效最为显著。结论:益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与其调控PI3K/Akt/eNOS信号途径有关。

胸腺素β4通过提高Akt磷酸化促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质eNOS和CD31表达

目的探讨胸腺素β4(Tβ4)对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质血管再生影响及其机制。方法用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(IR组)、Tβ4组(IRT组)、Tβ4+LY294002组(IRTL组)、0.9%氯化钠注射液组(IRN组),缺血2 h后把IR、IRN和IRT组分为3和7 d两亚组。Western blot检测Akt磷酸化水平和eNOS蛋白表达;免疫组化检测Tβ4和CD31蛋白表达;荧光定量PCR检测eNOS、SDF-1及CXCR4 mRNA表达;Longa法检测神经功能。结果与IRN组相比,IRT 3 d Tβ4蛋白表达显著增多(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d Akt磷酸化水平和eNOS蛋白显著增高(P<0.05),但IRTL组与其比较p-Akt和eNOS蛋白表达显著减少(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d eNOS、SDF-1和CXCR4 mRNA表达显著升高(P<0.05);与IRN组比较,IRT 3和7 d组微血管密度显著增高(P<0.05),大鼠神经功能缺损在第7天改善最明显(P<0.05)。结论 Tβ4可能通过提高局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质Akt磷酸化水平、eNOS基因和蛋白的表达,促进大鼠大脑皮质缺血半暗带血管再生和神经功能恢复。

基于PI3K/AKT/eNOS信号通路探讨健脾利湿化瘀方抑制前列腺癌血管生成的实验研究

[目的]在健脾利湿化瘀方临床疗效和前期实验的基础上,继续探讨健脾利湿化瘀方及其拆方在抑制人前列腺癌PC-3细胞荷瘤小鼠血管生成方面的作用,及其对PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响。[方法]选取6~8周雄性裸鼠36只建立人前列腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、西药组、全方组、君药组、臣药组和佐药组。实验各组干预14 d后处死取血称瘤质量,计算抑瘤率;使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS);免疫组化法观察各组瘤组织中VEGF、ANG1的表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织中磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、eNOS蛋白表达水平。[结果]各给药组瘤体积、瘤质量均低于空白对照组(P<0.01),西药组、全方组、君药组、臣药组、佐药组的抑瘤率分别为53.95%、41.05%、19.21%、27.37%、31.32%,拆方组间比较,佐药组抑瘤效果较好,但无统计学差异(P>0.05);ELISA检测显示:各组VEGF、eNOS含量均低于空白对照组,其中西药组、全方组显著降低(P<0.05或P<0.01);Western Blot结果显示:各组PI3K、eNOS的蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),AKT蛋白表达无显著变化(P>0.05),p-AKT呈降低趋势(P<0.05),其中西药组、全方组、佐药组呈显著下降(P<0.01)。[结论]尽管与西药对比抑瘤作用较弱,但中药健脾利湿化瘀方对前列腺癌在血管生成方面具有确切的抑制作用,尤其是具有化瘀消癥散结作用的佐药组,可能与姜黄、王不留行中某些有效成分能够下调PI3K、eNOS蛋白,影响AKT磷酸化,阻断PI3K/AKT/eNOS信号通路相关。

湿润暴露疗法/湿润烧伤膏调控PI3K/Akt/eNOS信号通路促进创面修复的机制研究

目的探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)调控PI3K/Akt/eNOS信号通路转录水平影响血管生成促进体表慢性难愈合创面修复的作用机制。方法145只雄性SD大鼠按随机法分成空白组21只、对照组31只、慢性创面组93只,慢性创面组制备完成后按随机法分成模型组、贝复新组和MEBT/MEBO组,每组31只。Real-Time PCR技术检测干预治疗后第3、7和14天创面组织PI3K、Akt、eNOS、VEGFR2的mRNA转录水平。结果(1)MEBT/MEBO组大鼠创面愈合时间及创面愈合率明显优于模型组(P<0.05);(2)与模型组相比,造模后第7天,MEBT/MEBO组大鼠创面组织PI3K、Akt、eNOS、VEGFR2转录水平均高表达(P<0.05或P<0.01)。结论MEBT/MEBO能较理想地促体表慢性难愈合创面的伤口愈合,可能是通过活化PI3K/AKt/eNOS信号通路、刺激创面血管生成的作用机制,进而实现加快创面的愈合速率。

一贯煎对干燥综合征模型大鼠及颌下腺PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的:探讨一贯煎对干燥综合征模型大鼠及颌下腺PI3K/Akt/eNOS通路的影响。方法:制备干燥综合征大鼠模型,随机分为模型组、硫酸羟氯喹(40 mg/kg)组及一贯煎低(7.1 g/kg)、中(14.2 g/kg)、高(28.4 g/kg)剂量组,每组12只,另取12只设为正常对照组。检测各组大鼠唾液流率、饮水量;以血液黏度测试仪测定各组大鼠血液流变学指标;HE染色检测各组大鼠颌下腺组织病理形态变化;以酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测各组大鼠血清IL-6、IL-17、IgG、NO水平;免疫印迹实验检测各组大鼠颌下腺组织中PI3K/Akt/eNOS通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠唾液流率、大鼠血清NO水平及大鼠颌下腺组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS水平显著降低(P<0.05),饮水量、组织病理评分、全血高切及低切黏度、血浆黏度、大鼠血清IL-6、IL-17、IgG水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,一贯煎各剂量组及硫酸羟氯喹组大鼠唾液流率、大鼠血清NO水平及大鼠颌下腺组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS水平显著升高,饮水量、组织病理学评分、全血高切及低切黏度、血浆黏度及血清IL-6、IL-17、IgG水平显著降低(P<0.05)。一贯煎高剂量组与硫酸羟氯喹组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:一贯煎可缓解干燥综合征模型大鼠颌下腺损伤,修复腺体分泌功能,改善其临床症状,可能是通过激活PI3K/Akt/eNOS通路实现的。

运动通过增强大鼠Caveolin-3/eNOS信号转导缓解胰岛素抵抗形成的机制

目的:探讨Caveolin-3/e NOS信号转导在游泳运动改善高脂饮食大鼠胰岛素抵抗(IR)中的作用,为胰岛素抵抗及其并发症的防治提供理论依据。方法:以SD大鼠为实验对象,随机分为3组:正常对照组(C组)、高脂饮食组(H组)、高脂饮食运动组(HE组)。通过8周高脂饲料喂养建立IR大鼠动物模型,同时对大鼠实施无负重游泳运动干预。用正糖钳技术结合胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)评价动物模型的建立;通过观察运动对高脂饮食IR大鼠骨骼肌e NOS和GLUT4含量,Caveolin3(Cav-3)m RNA的表达水平,p Akt Ser473和Akt蛋白表达的变化,探讨运动干预IR的机制。结果:(1)8周高脂饮食喂养后,H组大鼠葡萄糖输注速率(GIR)显著下降(P<0.01),ISI水平显著下降(P<0.01),HOMA-IR水平显著增加(P<0.01),提示胰岛素抵抗大鼠建模成功。(2)8周游泳干预后,与H组相比,HE组大鼠GIR显著增加(P<0.01),血清INS含量和HOMA-IR水平均显著降低(P<0.01),ISI水平显著增加(P<0.05或P<0.01);骨骼肌Cav-3 m RNA表达水平,p Akt Ser473和Akt蛋白表达水平均显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:8周游泳运动可通过上调骨骼肌Cav-3的表达水平,激活e NOS/Akt通路,从而增加GLUT4移位,缓解高脂饮食大鼠IR的形成。

缬沙坦通过PI3K/Akt/eNOS通路保护2型糖尿病大鼠主动脉内皮细胞免受氧化损伤的研究

目的观察缬沙坦对2型糖尿病模型大鼠主动脉内皮细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其分子机制。方法采用小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病动物模型。将30只SD大鼠分为3组:正常对照组、糖尿病模型组和缬沙坦治疗组,缬沙坦治疗组灌胃给予缬沙坦24 mg/(kg·d),糖尿病模型组则给予等体积生理盐水,连续治疗8周。HE染色检测胸主动脉形态变化,采用DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)的生成,采用黄嘌呤氧化酶法检测主动脉组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性,Western blot检测主动脉组织Akt、p-Akt、e NOS和p-e NOS的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,糖尿病模型组ROS含量显著上升,SOD活性显著下降(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,缬沙坦治疗组ROS水平明显降低,SOD活性明显升高,pAkt和p-e NOS的表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),而对Akt和e NOS的表达量无影响(P>0.05)。结论缬沙坦能够保护糖尿病大鼠主动脉内皮细胞免受氧化损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt/e NOS通路有关。

红景天苷通过激活AMPK/PI3K/Akt/eNOS途径减轻ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探究红景天苷对ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及所涉及的相关分子机制。方法将ApoE(-/-)小鼠分为正常饮食组(ND组),高脂肪饮食组(HFD组),AMPK激活剂组(AC组),低(L-SAL组)、高(H-SAL组)剂量红景天苷组。应用苏丹Ⅳ染色、HE染色和Masson染色行ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变分析;应用主动脉内皮依赖性舒张功能实验检测Apo E(-/-)小鼠主动脉血管内皮舒张功能;应用免疫组织化学分析主动脉p-AMPK、p-PI3K、p-Akt、p-e NOS蛋白表达情况;应用蛋白免疫印迹分析ApoE(-/-)小鼠AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化水平。结果与ND组小鼠相比,HFD组病变区面积、斑块面积均显著增加,而胶原含量显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组病变区面积、斑块面积均显著降低(P<0.05),胶原含量显著增加(P<0.05),且H-SAL组与L-SAL组差异有统计学意义(P<0.05)。与ND组相比,HFD组内皮依赖性舒张功能显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组内皮依赖性舒张功能均显著增加(P<0.05)。与ND组相比,HFD组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)MOD值均显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,AC组、L-SAL组和H-SAL组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)MOD值均显著增加(P<0.05)。与ND组相比,HFD组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)蛋白表达显著降低(P<0.05)。与HFD组相比,L-SAL组和H-SAL组p-AMPKα(Thr172)、p-PI3K、p-Akt、p-eNOS(Ser1177)蛋白表达显著增加(P<0.05)。H-SAL组与AC组各项指标相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷能够通过激活AMPK/PI3K/Akt/e NOS信号级联,改善与e NOS活化相关的血管内皮功能,从而减轻Apo E(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变。

柚皮苷调控PI3K/Akt/eNOS通路控制2型糖尿病大鼠脑血管内皮氧化损伤的作用探讨

目的探讨柚皮苷对2型糖尿病大鼠脑血管内皮氧化损伤的治疗效果,以及柚皮苷对3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮(eNOS)信号通路的调控作用。方法 2019年3月15日至2020年5月20日,将SD大鼠(南京医科大学实验动物中心)按随机字母表法分为4组,对照组大鼠给予标准饲料,其他组给予高糖高脂饲料。通过腹腔注射60 mg/kg的链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病模型,柚皮苷组大鼠灌胃100 mg/kg的柚皮苷溶液,柚皮苷+LY294002组大鼠在灌胃100mg/kg的柚皮苷溶液的基础上腹腔注射100 mg/kg的PI3K抑制剂LY294002。治疗8周后,分别检测各组大鼠空腹血糖、一氧化氮(NO)、血脂代谢指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、脑组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。苏木精-伊红(HE)染色评价脑组织病理改变。蛋白质印迹法(Western blotting)检测脑组织中PI3K/Akt/eNOS通路的活化情况。结果柚皮苷组的空腹血糖(13.46±1.09)mmol/L、TC(1.65±0.13)mmol/L、TG(2.89±0.23)mmol/L、LDL-C(1.59±0.13)mmol/L、MDA(55.17±4.24)U/mgprot水平均低于模型组[空腹血糖(25.32±2.04)mmol/L、TC(2.81±0.23)mmol/L、TG(4.36±0.35)mmol/L、LDL-C(2.97±0.24)mmol/L、MDA(9.37±0.72)nmol/mgprot],而HDL-C(1.08±0.08)mmol/L、血清NO(28.76±2.21)μmol/L、SOD(55.17±4.24)U/mgprot水平均高于模型组[HDL-C(0.65±0.05)mmol/L、血清NO(19.11±1.47)μmol/L、SOD(41.22±3.17)U/mgprot](P<0.05)。柚皮苷组的PI3K蛋白表达水平(0.81±0.06)及Akt(0.91±0.07)和eNOS(0.97±0.07)的磷酸化水平均高于模型组[PI3K蛋白表达水平(0.31±0.02)、(0.21±0.02)和eNOS(0.18±0.01)](P<0.05)。此外,LY294002处理可显著减弱柚皮苷对上述指标的影响(P<0.05)。结论柚皮苷对2型糖尿病大鼠的脑保护作用主要由PI3K/AKT/eNOS信号通路介导。

PI3K/Akt/eNOS信号通路与胚胎植入和妊娠维持

子宫内膜容受性是影响人类辅助生殖技术的重要因素。PI3K/Akt/eNOS信号通路通过动员内皮祖细胞、产生一氧化氮等方式促进血管生成。血管生成为胚胎滋养细胞侵入螺旋小动脉、扩张螺旋动脉、形成毛细血管网提供基础,实现血管重铸,对提高子宫内膜容受性,增加胚胎植入部位血流,以及胚胎植入后妊娠的维持,都起着非常重要的作用。本文对PI3K/Akt/eNOS信号通路对胚胎植入和妊娠维持的作用进行综述,以期为改善子宫内膜容受性、提高ART成功率的临床及相关研究提供新的思路。

ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性影响

目的探讨ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性的影响及机制。方法选取对数生长期人卵巢癌细胞株HO8910细胞分为5组:空白对照组(不转染任何序列)、阴性对照组(转染空载体质粒)、siErbB2组(转染siRNA序列)、wortmannin组(转染PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制剂wortmannin)、siErbB2+IGF-1组(转染siRNA序列+PI3K/Akt/eNOS信号通路激动剂IGF-1)。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测ErbB2、Akt、PI3K、eNOS、Caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平,同时检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的变化。结果与空白对照组比较,siErbB2组和wortmannin组卵巢癌细胞中Akt、PI3K、eNOS和Bcl-2的mRNA和蛋白表达量显著下降,而Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达量则显著增加(F=3.58~8.69,P均<0.05),细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降(F=8.84~15.67,P均<0.05),细胞凋亡率上升(F=9.46,P<0.05);siErbB2组ErbB2表达明显下降(P<0.05)。与siErbB2组相比,siErbB2+IGF-1组ErbB2、Akt、PI3K、eNO S和Bcl-2的mRNA和蛋白表达量显著下降(P均<0.05),Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达量显著增加(P均<0.05),细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力均明显下降(P均<0.05),细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论ErbB2基因沉默可抑制PI3K/Akt/eNOS信号通路,从而抑制卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡。而PI3K/Akt/eNOS信号通路激活可逆转ErbB2基因沉默作用,促进卵巢癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。

外源性硫化氢通过PI3K/Akt/eNOS通路改善过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞衰老

【目的】本研究拟探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)通路对硫化氢(H2S)改善内皮细胞衰老的作用。【方法】建立60μmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老模型;衰老模型的评估及不同浓度硫氢化钠(NaHS)预处理对衰老的作用均通过检测纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率来研究评估。同时通过Western blot法检测各组内皮细胞中蛋白激酶B(Akt)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,通过硝酸盐还原酶法检测一氧化氮(NO)含量。【结果】与对照组相比,HUVEC经60μmol/L H_(2)O_(2)预处理后,能显著提高细胞SA-β-gal阳性率和PAI-1的表达。而NaHS的预处理可以显著减少PAI-1的表达和细胞SA-β-gal阳性率,但可增加p-Akt蛋白、eNOS蛋白的表达及增加NO含量。【结论】NaHS可以改善H2O2诱导的内皮细胞衰老,其机制与PI3K/Akt/eNOS通路有关。

当归挥发油对自发性高血压大鼠血管内皮相关信号通路PI3K/Akt/eNOS的影响

目的研究当归挥发油对自发性高血压大鼠血压、胸主动脉血管内皮组织中PI3K、AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS蛋白表达水平的影响,并探讨其相关机制。方法将自发性高血压大鼠随机分为模型组、缬沙坦组、当归挥发油低、中、高剂量组,每组6只;6只同周龄SPF级Wistar大鼠做为正常对照组。缬沙坦组以每日缬沙坦8mg/Kg灌胃,当归低、中、高剂量组每天分别给予当归挥发油0.1ml、0.2ml、0.4ml,与1%、3%、9%的当归挥发油乳剂2.0ml/(kg·d)剂量相当,模型组和正常对照组大鼠分别给予等量蒸馏水灌胃,连续给药4周。采用无创血压检测系统测定给药前及给药后1周、2周、3周、4周各组大鼠的尾动脉收缩压;给药4周后麻醉大鼠,在4℃下分离胸主动脉;通过Western Blot法检测当归挥发油对大鼠胸主动脉血管内皮PI3K、AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS蛋白表达量的变化。结果给药4周后,当归挥发油低剂量组、当归挥发油中剂量组、当归挥发油高剂量组、缬沙坦组大鼠收缩压均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot实验结果显示,与模型组比较,当归挥发油低剂量组大鼠AKT、eNOS蛋白表达水平明显上调(P<0.05),PI3K、p-AKT、p-eNOS蛋白表达水平无明显改变(P>0.05);当归挥发油中剂量组大鼠AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS蛋白表达水平明显上调(P<0.05),PI3K蛋白表达水平无明显改变(P>0.05);当归挥发油高剂量组大鼠PI3K、AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论当归挥发油具有一定的降压作用,其可能是通过调节PI3K/Akt/eNOS信号通路实现降压的。

基于PI3K/Akt/eNOS通路探讨黄芪甲苷对糖尿病心肌病大鼠心功能的保护机制

目的探索黄芪甲苷(AS-Ⅳ)改善糖尿病心肌病(DC)大鼠心功能的作用和机制。方法选取5周龄SD雄性大鼠24只,随机分为空白组、模型组和黄芪甲苷组,每组8只。采用链脲佐菌素(剂量为35mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病心肌病模型,空白组腹腔注射等量生理盐水,造模成功后高脂饮食喂养。黄芪甲苷组予40mg/kg黄芪甲苷混悬液灌胃,空白组、模型组给予等体积生理盐水灌胃。给药过程中监测各组大鼠血糖、体重变化。12周后,测定各组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)、射血分数(LVEF)和血清肌酸激酶(CK)水平。HE和Masson染色观察心肌组织病理结构变化。qPCR及Western blot法检测PI3K/Akt/eNOS相关基因和蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组大鼠心脏LVFS和LVEF值显著降低(P<0.01),血清CK水平升高(P<0.05);HE和Masson染色分别可见心肌细胞破坏、排列松散,大量炎性细胞浸润,间质纤维化增加;同时心肌组织中PI3K、Akt、eNOS mRNA表达下调(P<0.05),PI3K、Akt的磷酸化水平及eNOS蛋白的表达降低(P<0.05)。与模型组对比,黄芪甲苷组大鼠心脏LVFS和LVEF值显著提高(P<0.01),血清CK水平下降(P<0.05);心肌细胞排列相对规则,炎性细胞浸润减少,间质纤维组织增生程度减轻,心肌组织中PI3K、Akt、eNOS mRNA表达上调(P<0.05),PI3K、Akt的磷酸化水平和eNOS蛋白的表达升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷可能通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路改善DC大鼠心功能。

消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/eNOS分子信号通路的影响

目的:观察消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/e NOS分子信号通路的影响。方法:体外培养并鉴定大鼠骨髓EPCs,制备消渴通痹颗粒含药血清,对EPCs进行不同高糖血清或PI3K抑制剂Wortmannin及e NOS抑制剂L-NAME的干预,检测EPCs的增殖及小管形成能力,Western-blot检测Akt、p-Akt及e NOS、p-e NOS蛋白表达。结果:与对照组比较,消渴通痹颗粒含药血清能促进EPCs的增殖及小管形成,不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清预处理后在一定程度上阻止了AKT,p-AKT,e NOS,p-e NOS水平的下降(P<0. 05)。结论:消渴通痹颗粒可能通过上调PI3K/Akt/e NOS分子信号通路相关蛋白的表达水平,促进高糖环境下EPCs增值和小管形成。