基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

低氧条件下共培养体系中肺动脉内皮细胞经Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的探讨低氧条件下细胞共培养体系中肺动脉内皮细胞经由Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖。方法建立Transwell共培养体系,将肺动脉内皮细胞(PAEC)和平滑肌细胞(PASMC)分别接种于下室和上室,PAEC经DAPT(Notch信号阻断剂)或(和)S iR-NA-Jagged1预处理后,与PASMC共同置入自动常压缺氧孵箱进行低氧处理。根据PAEC是否行DAPT、Jagged1小RNA干扰预处理进行实验分组:常氧时PAEC与PASMC共培养对照组(N)、低氧时PAEC与PASMC共培养组(H1)、低氧时DAPT(终浓度10μmol/L)预处理PAEC与PASMC共培养组(H2)、低氧时S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H3)、低氧时DAPT加S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H4)。用3H-TdR掺入法检测PAEC和PASMC增殖情况,RT-PCR检测PAEC中Notch1、Jagged1 mRNA表达水平。结果低氧时各组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量明显高于常氧共培养对照组(均P<0.01);与H1组比较,H2、H3、H4组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量均显著降低(P<0.05,P<0.01),表明Notch1、Jagged1单阻断和双阻断使低氧条件下PAEC和PASMC增殖细胞数明显减少。低氧时PAEC与PASMC共培养组PAEC中Notch1、Jagged1 mRNA表达水平明显高于常氧共培养组(均P<0.05);用DAPT或S iRNA-Jagged1单独、或者两者共同预处理PAEC,再在低氧条件下与PASMC共培养,DAPT使PAEC中Notch1 mRNA表达水平明显下降,S iRNA-Jagged1使Jagged1 mRNA表达水平显著降低,DAPT和S iRNA-Jagged1共同使Notch1、Jagged1 mRNA表达水平同时明显下调,与H1组比较差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。结论肺动脉内皮细胞表型的改变影响肺动脉平滑肌细胞表型的变化;经Notch1/Jagged1信号通路介导,低氧导致PAEC和PASMC异常增殖、低氧性肺动脉内皮细胞调控低氧性肺动脉平滑肌细胞的异常增殖。

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞“归巢”并改善哮喘

目的观察间充质干细胞(BMSCs)归巢调节哮喘Th1/Th2“漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、BMSCs移植组(BMSCs)、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素(IL)-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组Notch1、Jagged1蛋白表达降低,BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低(P<0.05或P<0.01)。与BMSCs组比较,BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、Notch1mRNA表达降低(P<0.05)。结论BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2“漂移”产生调节作用,Notch1/Jagged1通路可能参与其过程。

大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1/Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。

Notch1/Jagged1信号对人肝癌SMMC7721细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制

目的研究激活的Notch 1信号系统对人肝癌SMMC7721细胞增殖和侵袭力的调控,并初步探讨其可能机制。方法体外培养人肝癌SMMC 7721细胞,RT-PCR技术检测细胞中Notch信号系统的表达情况,向人SMMC 7721细胞中分别加入Notch信号通路的激活剂Jagged 1蛋白(激活剂组)、抑制剂γ-分泌酶抑制剂DAPT(抑制剂组),空白对照组加PBS缓冲液。MTT法和软琼脂集落形成试验检测各组细胞增殖的情况,Transwell小室法观察细胞侵袭的能力,RT-PCR检测各组细胞中Hes-1、Bcl-2及Snail基因的表达。结果SMMC 7721细胞中存在Notch 1/Jagged 1信号系统的表达,培养12、24、36、48 h后,激活剂组、抑制剂组与空白对照组的吸光度值比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。激活剂组、空白对照组和抑制剂组的细胞侵袭数分别为43.8±6.8、64.6±5.6和90.0±6.9(P<0.05)。激活剂组细胞中Hes-1基因的表达增强,Bcl-2及Snail基因的表达显著降低;相反,抑制剂组细胞的Hes-1基因表达降低,Bcl-2及Snail基因的表达显著增强(P<0.05)。结论 Notch 1/Jagged 1信号通路在人肝癌SMMC 7721细胞的增殖和侵袭中发挥重要的调控作用,其机制初步认为可能与下调抗凋亡基因Bcl-2以及肿瘤转移相关基因Snail的表达有关。

丹皮酚抑制Notch1/Jagged1信号通路对妊娠糖尿病大鼠糖代谢紊乱的改善作用

目的探讨丹皮酚(PAE)抑制Notch受体(Notch1)/Notch配体(Jagged1)信号通路对妊娠糖尿病(GDM)大鼠糖代谢紊乱的改善作用。方法大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(GDM组)、低剂量PAE组(L-PAE组,100 mg/kg)、中剂量PAE组(M-PAE组,200 mg/kg)、高剂量PAE组(H-PAE组,400 mg/kg),高剂量PAE+Notch1信号激活剂Jagged1/FC嵌合蛋白组(H-PAE+JFC组,400 mg/kg+500 g/kg),每组12只。血糖仪测定大鼠空腹血糖(FBG)水平;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹胰岛素(FINS)水平;采用生化分析仪测定大鼠血清脂代谢指标;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、介素-6(IL-6)、瘦素(Leptin)、脂联素(APN)水平;微量法检测大鼠血清氧化应激指标;western blot法检测大鼠肝脏组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白水平。结果与NC组比较,GDM组大鼠FBG(0 d、7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1升高,FINS(0 d、7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT降低(P<0.05);与GDM组比较,L-PAE组、M-PAE组、H-PAE组大鼠FBG(7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1降低,FINS(7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT升高(P<0.05),且具有剂量依赖性;Notch1信号激活剂可减轻高剂量PAE对GDM大鼠糖代谢紊乱的改善作用(P<0.05)。结论PAE可能通过抑制Notch1/Jagged1信号通路,改善GDM大鼠糖代谢紊乱。

雷帕霉素对肾间质成纤维细胞Notch1/Jagged1信号通路及FN表达的影响

目的:研究雷帕霉素(RAP)在体外抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)激活肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨RAP抗纤维化的作用机制。方法:以TGF-β1(2ng/ml)刺激培养的NRK-49F,采用Western印迹观察20～100ng/mlRAP对Notch1/Jagged1表达的影响,同时检测纤维连接蛋白(FN)表达水平以评价细胞外基质合成的变化。结果:以2ng/mlTGF-β1诱导的NRK-49F细胞经不同浓度的RAP干预后培养24、48、72h,呈剂量依赖性和时间依赖性抑制Notch1/Jagged1、FN表达,其中RAP(40ng/ml)抑制效应最为明显(P<0.01),Notch1/Jagged1蛋白表达分别下调53.12%、48.54%、44.55%和46.14%、47.22%、52.15%(P<0.01);FN分别下降37.84%、45.68%、51.65%(P<0.01)。结论:在体外条件下,RAP可以抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞FN表达增加,下调Notch1/Jagged1表达可能是其作用机制之一,提示RAP可能用于防治肾间质纤维化。

傅山风湿外治方对CIA大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响

目的:研究傅山风湿外治方(FS-med)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响。方法:本实验建立雌性Wistar大鼠CIA模型,通过FS-med外敷治疗,ELISA检测血清中IFN-γ、IL-4和IL-6的表达,qRT-PCR和Western blot分别检测大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1的mRNA和蛋白表达水平,免疫组化检测大鼠关节组织中Notch1、Jagged1和Hes1的阳性信号并进行光密度值分析。结果:本实验成功构建CIA大鼠模型;CIA组大鼠血清中IFN-γ和IL-6的表达极显著高于Normal组和FS-med组(P<0.01),IL-4表达水平显著低于Normal组和FS-med组(P<0.05);CIA大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1的mRNA和蛋白表达水平极显著高于Normal组和FS-med组(P<0.01);在CIA大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1呈强阳性表达,极显著高于Normal组和FS-med组(P<0.01)。结论:FS-med对CIA大鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1信号通路激活,调节Th1/Th2细胞因子平衡有关。

灯盏花素通过调控LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制研究

目的 基于LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路探讨灯盏花素改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、辛伐他汀组(20 mg·kg^(-1))和灯盏花素低、中、高剂量组(6、12、24 mg·kg^(-1)),每组10只。采用先腹腔注射75%蛋黄乳液后饲喂高脂饲料的方式建立高脂血症模型,同时给药干预,1次/天,连续28d。采用ELISA法检测大鼠血清中T-CHO、TG、LDL-C、HDLC、AST、ALT、Cr、BUN水平;测定大鼠肝脏、肾脏系数;采用HE染色法观察肝肾组织病理学变化;采用免疫组化法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平;采用RT-PCR法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平mRNA水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05);肝脏、肾脏系数明显增加(P<0.05)且出现病理变化;肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显降低(P<0.05),HMGCR水平明显升高(P<0.05);肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,辛伐他汀组和灯盏花素低、中、高剂量组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝脏、肾脏系数明显减小(P<0.05)且病变程度减轻;肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显升高(P<0.05),HMGCR水平明显降低(P<0.05);肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显降低(P<0.05)。结论 灯盏花素能够改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能,其机制与激活LKB1/AMPK通路及抑制Notch/Jagged1通路和HMGCR水平有关。

Notch1/Jagged1在高尿酸血症导致早期慢性肾损伤中的作用

目的探讨Notch1/Jagged1在高尿酸血症导致大鼠早期慢性肾损伤中的作用。方法雄性SD大鼠21只随机分为正常组(n=7)、模型组(n=7)和DAPT干预组(n=7),采用氧嗪酸和尿酸联合制作高尿酸血症模型,Notch信号通路特异性抑制剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT)进行特异性干预,定期监测生化指标直至造模6周。比较各组间血尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,HE染色观察各组大鼠肾脏损伤情况,同时采用免疫组化染色比较各组间Notch1、Jagged1表达情况。结果造模6周后,模型组UA、BUN、Scr、Notch1、Jagged1显著升高(P<0.01)。与模型组相比,DAPT干预组BUN、Scr、Notch1、Jagged1明显降低(P<0.05)。结论在高尿血酸血症动物模型中发现Notch1、Jagged1表达升高,DAPT干预后可改善肾功能,延缓慢性肾损伤进展。Notch1/Jagged1在高尿酸血症所致早期慢性肾损伤中起着重要作用。

桔梗总皂苷对小鼠气道平滑肌细胞增殖、迁移及Notch1/Jagged1通路的影响

目的探讨桔梗总皂苷对小鼠气道平滑肌细胞(airwaysmoothmusclecells, ASMCs)增殖、迁移及Notch1/Jagged1信号通路相关蛋白表达水平的影响。方法 分离、培养小鼠原代ASMCs,按照对照组、重组小鼠血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)组,10、20、40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷组和IL-17+40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷组,随机分组给药。Notch1过表达慢病毒感染ASMCs,按照对照组、PDGF组、PDGF+40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷组、PDGF+40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷+pEGF-C1(Notch1过表达阴性对照质粒)组和PDGF+40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷+pEGFC1/Notch1 (Notch1过表达质粒)组分组给药。CCK8、划痕试验分别检测ASMCs的增殖和迁移能力,免疫荧光检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达水平,ELISA检测ASMCs上清液中炎症相关因子水平,Western blotting检测ASMCs中Notch1/Jagged1通路相关蛋白表达水平。结果 不同剂量的桔梗总皂苷均能不同程度地抑制PDGF诱导的细胞增殖、迁移,抑制ASMCs中PCNA荧光表达增强,显著抑制上清液中IL-6、IL-8水平及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平的上调(P<0.05或P<0.01);与40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷组比较,IL-17+40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷组细胞活力、迁移率及上清液中IL-6、IL-8水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),PCNA荧光表达强度显著增强(P<0.01),Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01)。与40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷+pEGF-C1组比较,40μg·mL^(-1)桔梗总皂苷+pEGF-C1/Notch1组ASMCs的细胞活力、迁移率及上清液中IL-6、IL-8水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平显著性上调(P<0.01)。结论 桔梗总皂苷对ASMCs的增殖和迁移有抑制作用,其作用机制可能与下调Notch1/Jagged1信号通路相关蛋白表达水平有关。

Notch1/Jagged1信号通路在慢性心力衰竭免疫炎症相关发病机制中的研究进展

心力衰竭是由各种原因造成心肌受损,心脏功能降低而不能满足机体代谢需要的临床综合征。炎症细胞因子在心力衰竭的发生、发展过程中发挥重要作用,Notch1/Jagged1信号通路与炎症细胞因子、炎症反应和免疫反应有关。该文主要讨论了Notch1/Jagged1信号通路通过调节免疫炎症参与慢性心力衰竭的发生及发展情况。

CYP2J2通过激活Notch1途径改善慢性间歇性低氧后心血管损伤的实验研究

目的:探讨细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)对慢性间歇性低氧(CIH)模型大鼠心血管损伤的影响及机制。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、CYP2J2组、CIH组、CIH+CYP2J2组、CIH+CYP2J2+DAPT组,每组10只。CIH组、CIH+CYP2J2组及CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠均构建CIH模型;造模成功后,CYP2J2组、CIH+CYP2J2组、CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠一次性尾静脉注射携带CYP2J2基因的重组腺病毒;CIH+CYP2J2+DAPT组再通过腹腔注射DAPT。2周后,采用高分辨率小动物超声影像系统测定各组大鼠左室缩短分数(FS)、射血分数(EF)、左室收缩末期容积(LVESV)和左室舒张末期容积(LVEDV);自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)与心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆内皮素-1(ET-1)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉及心肌组织形态学变化;末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡情况;生化指标检测试剂盒测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定心肌组织Notch受体1(Notch1)信号途径相关蛋白表达水平。结果:与CIH组比较,CIH+CYP2J2组大鼠FS和NO水平升高,LVESV、LVEDV及CK-MB、cTnI、ET-1水平均降低,主动脉结构基本清晰,细胞肿大、脱落及血管壁增厚等现象均有所改善,心肌纤维断裂、心肌细胞肿大等现象减轻,心肌组织TUNEL阳性细胞比例减少,SOD活性升高,MDA含量下降,Notch1和Hes1蛋白相对表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CIH+CYP2J2组比较,CIH+CYP2J2+DAPT组大鼠FS和NO水平降低,LVESV、LVEDV及CK-MB、cTnI、ET-1水平均升高,主动脉组织及心肌组织病理损伤现象显著,心肌组织TUNEL阳性细胞比例增加,SOD活性下降,MDA含量升高,Notch1和Hes1蛋白相对表达量下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CYP2J2可改善CIH大鼠心血管损伤,减少心肌细胞凋亡,并抑制氧化应激水平,该机制可能与激活Notch1途径有关。

加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Notch1/jagged-1信号通路的影响

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Notch1、jagged1蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠90只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、中药组3组。假手术组和模型组给予生理盐水(2 ml/只/d)灌胃,中药组给予加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d)。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织Notch1、jagged1蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,模型组大鼠小管间质半定量评分、Notch1、jagged1蛋白表达均显著增高,差异有统计学意义;与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤显著降低小管间质半定量评分、Notch1、jagged1蛋白表达。结论:加味六味地黄汤可能通过阻断Notch1/jagged1信号通路的活化,发挥抗肾间质纤维化作用。

miRNA-139-5p靶向Notch1/Jagged1调控胃癌干细胞增殖转移及益气补肾方的干预作用

目的:明确miRNA-139-5p对Notch1/Jagged1信号通路的靶向调控关系,探讨益气补肾方抗胃癌干细胞增殖转移的作用机制。方法:通过免疫磁珠分选及鉴定CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC;双荧光素酶报告基因检测miRNA-139-5p与Notch1的结合作用;qRT-PCR检测不同细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达;Western Blot检测不同细胞株中Notch1、Jagged1蛋白表达;qRT-PCR检测益气补肾方含药血清干预后,胃癌细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达以及Notch1、Jagged1蛋白表达。结果:免疫磁珠能较好地分选出CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC细胞株。转染克隆有Notch13’-UTR野生型载体质粒实验中,miRNA-139-5p组荧光素酶活性明显受到抑制,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌细胞中miRNA-139-5p的表达量显著减少,Notch1、Jagged1的mRNA与蛋白表达量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。益气补肾含药血清干预后,胃癌细胞中miRNA-139-5p表达水平显著升高,Notch1、Jagged1 mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:Notch1基因是miRNA-139-5p直接作用的靶基因,益气补肾方可能是通过调控miRNA-139-5p/Notch1/Jagged1信号通路而发挥抗胃癌增殖转移的作用。

MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。

淫羊藿苷通过Notch1/Jagged1信号通路抑制人前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨淫羊藿主要有效成分淫羊藿苷(icariin,ICA)对人前列腺癌细胞(prostate cancer cells,PC-3细胞)的侵袭、迁移和增殖的影响及作用机制。方法:运用不同浓度的ICA对PC-3细胞进行24,36,48 h的预处理后,采用MTT法筛选合适的受试浓度;采用流式细胞术检测ICA对PC-3细胞周期的影响;采用划痕实验和Transwell实验分别检测ICA对PC-3细胞的迁移能力和侵袭能力的影响;采用RT-PCR和Western blot分别检测ICA对PC-3细胞Notch1、Jagged1、Hes1、Hey1 mRNA及蛋白表达的调控作用。结果:不同浓度的ICA处理PC-3细胞24,36,48 h后,对PC-3细胞的增殖有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;流式细胞术检测结果表明ICA主要将PC-3阻滞在G0/G1期;划痕实验和Transwell实验结果显示ICA对PC-3细胞的迁移和侵袭能力有明显抑制作用;1×10^(-4)mol·L^(-1)的ICA作用于PC-3细胞48 h后,对Notch1、Jagged1、Hes1、Hey1 mRNA表达有明显抑制作用(P<0.05),对Notch1、Jagged1蛋白及Hes1、Hey1蛋白表达均有抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论:淫羊藿主要有效成分ICA可以抑制PC-3细胞的迁移、侵袭和增殖,其机制可能与下调Notch1/Jagged1通路的相关因子有关。

Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的:检测Notch1,Jagged1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达并分析它们与临床病理参数间的关系。结果:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中表达的阳性强度分别为81.5%(53/65),83.1%(54/65)和93.8%(61/65),均明显高于正常支气管上皮组织的阳性强度(P<0.05);NSCLC中Notch1和VEGF蛋白表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05);Jagged1蛋白表达与患者病理类型和淋巴结转移有关。Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达三者两两间均呈显著正相关。结论:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白可能在肺癌发生发展中起重要作用;其高表达有可能作为预测NSCLC侵袭、转移的重要指标。

胃癌组织中Notch1、Jagged1及NF-κB的表达及临床意义

目的:研究Notch1、Jagged1和NF-κB在胃癌组织中的表达状况,探讨其与临床病理特征及幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的关系。方法:采用组织芯片技术和免疫组化法检测60例胃癌、60例癌旁及20例正常胃黏膜组织中Notch1、Jagged1和NF-κB的表达,用Warthin-Starry银染法检测各组织中Hp的感染状况。结果:Notch1和Jagged1在胃癌组织中的阳性表达率(40.0%、70.0%)显著低于其癌旁(81.7%、96.7%)和正常组织(85.0%、100.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。NF-κB在胃癌组织中的阳性表达率(66.7%)显著高于其癌旁(36.7%)和正常组织(0.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Hp在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的阳性感染率分别为76.7%、93.3%和10.0%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Jagged1表达及Hp感染均与胃癌的临床病理特征无关(P>0.05),NF-κB表达与胃癌的分化程度和TNM分期有关(P<0.05)。Notch1在胃癌组织中的表达与Jagged1呈正相关(r=0.460,P<0.05),与NF-κB呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。Notch1、Jagged1及NF-κB在胃癌组织中的表达均与Hp感染无关(r=-0.032,r=0.155,r=0.028,均P>0.05)。结论:胃癌中存在Notch1、Jagged1和NF-κB的异常表达,但均与Hp感染无关,Notch1与Jagged1低表达可能诱导NF-κB高表达,进而导致胃癌的发生。

Notch1 Jagged1和COX-2蛋白在胃癌中的表达及相关性研究

目的:研究Notch1、Jagged1和COX-2在胃癌组织中的表达情况,分析其与临床病理特征及Hp感染的关系。方法:应用免疫组织化学S-P法,采用组织芯片技术,检测60例胃癌组织、60例癌旁组织及20例正常胃黏膜组织中Notch1、Jagged1和COX-2蛋白的表达;采用Warthin-starry染色法检测各组织中Hp感染状况。结果:Notch1与Jagged1在胃癌组中阳性表达率(40.0%,70.0%)低于癌旁组(81.7%,96.7%)和正常组(85.0%,100.0%),差异有统计学意义(P<0.05)COX-2在胃癌组中的阳性表达率(60.0%)高于癌旁组(35.0%)和正常组(0),差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1和Jagged1与胃癌的临床病理特征均无关(P>0.05)。COX-2的表达与胃癌的分化程度、浸润深度(P=0.013,P=0.013)有关。Notch1与Jagged1在胃癌组中的表达呈正相关(r=0.460,P<0.005);Notch1与COX-2表达呈负相关(r=-0.314,P>0.05);Jagged1与COX-2表达无相关性(r=-0.175,P>0.05)。Hp在胃癌组中阳性感染率低于癌旁组(76.6%,91.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Jagged1和COX-2在胃癌组中Hp感染阳性与Hp感染阴性的阳性表达率相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。胃癌组织中Notch1、Jagged1和COX-2的表达与Hp感染率无关(P>0.05)。结论:胃癌中存在Notch信号通路的异常,Notch1和Jagged1的低表达可能导致COX-2的高表达,最终导致胃癌的发生发展;Hp感染可能在早期胃癌的发生中起重要作用。