Notch1和Notch2表达与宣威女性肺癌的关系及意义

目的研究Notch1和Notch2在宣威女性肺癌中表达的临床意义。方法采用免疫组化SP法检测54例宣威女性肺癌患者癌组织及远端正常肺组织中Notch1和Notch2表达,结合患者的临床病理特征及随访资料,探讨Notch1和Notch2在宣威女性肺癌患者病情评估及预后判断中的作用。结果 Notch1和Notch2蛋白主要表达于细胞质,在宣威女性肺癌中的阳性表达均显著高于远端正常肺组织(P<0.05);Notch1和Notch2蛋白在不同临床分期、分化程度及淋巴结转移与否患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Notch2蛋白在宣威女性肺癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论宣威女性肺癌组织中存在Notch1和Notch2基因异常表达升高,Notch1和Notch2蛋白的表达水平结合临床分期作为宣威女性肺癌患者预后判断的参考指标有一定的指导意义。

发酵虫草菌粉和泼尼松对急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管Notch2／hes-1信号通路活化的影响

目的探讨发酵虫草菌粉及泼尼松对急性马兜铃酸肾病(acute aristolochic acid nephropathy,AAAN)大鼠肾小管上皮细胞Notch2/hes-1信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉组(CS组)、泼尼松组及CS加泼尼松组,每组10只。以马兜铃酸A纯品100mg/(kg·d)连续灌胃3天建立AAAN模型。CS组予发酵虫草菌粉5.0g/(kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松0.5mg/(kg·d)灌胃,CS加泼尼松组予两药联合灌胃,连续3周。检测各组大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],HE染色观察肾脏病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组织化学法及Westernblot法检测大鼠肾组织Notch2、Hes-1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常组大鼠肾组织结构正常;模型组大鼠出现肾小管坏死改变;泼尼松组、CS组及CS加泼尼松组肾小管病理明显改善。与正常组比较,模型组大鼠BUN和SCr水平、肾小管间质半定量评分、凋亡细胞比例以及Notch2、Hes-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,CS组、泼尼松组及CS加泼尼松组上述指标均显著降低(P<0.01)。以CS加泼尼松组降低更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 Notch2/hes-1信号通路活化可能参与AAAN肾小管上皮细胞凋亡的发生。CS及泼尼松对AAAN有肾保护作用,但联合干预疗效更佳,其机制可能与抑制肾组织Notch2/hes-1信号通路活化有关。

Notch2、Notch4在大鼠早期肺发育过程中的动态表达

目的探讨Notch2、Notch4在SD大鼠肺发育过程中的作用。方法取孕18、202、1 d胎鼠和孕21 d早产鼠(足月为22 d)生后1、7、14、21 d肺组织标本(n=8),HE染色,进行组织形态学观察、免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测Notch2、Notch4的表达。结果孕龄18 d的胎肺见支气管树分支形成,间质中毛细血管毗邻呼吸道分布;20 d至早产生后1 d时,肺组织基本结构为终末囊泡,上皮分隔进一步发展,间质减少,毗邻上皮的毛细血管增多;7、14 d肺泡数目增多并渐成熟,气血屏障变薄;21 d肺泡壁进一步变薄,间质细胞少见。免疫组织化学结果显示,Notch2在孕182、0 d即有表达,21 d表达最强,出生后表达逐渐减弱;Notch4在孕18 d表达最明显,以后呈减弱趋势。RT-PCR检测Notch2、Notch4 mRNA变化与多肽变化规律相似。结论Notch2、Notch4参与大鼠早期肺发育过程。

鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因表达和免疫功能的影响

目的:观察鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因的表达和免疫功能的影响,探讨其在辐射致癌过程中的作用。方法:将90只近交系BALB/c小鼠随机分成对照组、照射组和照射给药组,每组30只。照射组和照射给药组小鼠采用X射线照射,建立胸腺淋巴瘤动物模型,照射后给予照射给药组小鼠喂饲含鹿角脱盘超微粉的鼠粮。6个月后,取全血和胸腺,采用RT-PCR和Western blotting法分别检测胸腺淋巴瘤组织中Notch2mRNA和蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)水平,应用SOD试剂盒检测血清中SOD活性。结果:照射组和照射给药组小鼠胸腺瘤发生率分别为53.33%(16/30)和36.67%(11/30);照射组小鼠胸腺瘤组织中Notch2mRNA和蛋白表达水平较对照组小鼠正常胸腺组织均明显升高(P<0.05),而照射给药组小鼠胸腺瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平均低于照射组(P<0.05);照射组小鼠血清中IgG、IgA和IgM水平均低于对照组(P<0.05),而照射给药组小鼠血清中IgG、IgM和血红蛋白水平及SOD活性均高于照射组(P<0.05)。结论:电离辐射激活Notch2基因和蛋白的高表达及降低小鼠免疫功能可能是辐射诱发胸腺淋巴瘤的发生机制之一;鹿角脱盘可通过抑制Notch2基因和蛋白的表达及提高小鼠免疫功能而降低辐射致癌的发生率,起到抑制肿瘤的作用。

Notch2/Hes-1信号通路活化参与调控肾缺血-再灌注诱导炎症因子的表达研究

目的观察肾缺血-再灌注(IR)大鼠肾小管Notch2/Hes-1信号通路的活化,及信号通路关键酶γ-泌肽酶抑制剂DAPT对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 45只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和γ-泌肽酶抑制剂组(DAPT组),每组15只,按先摘除右肾然后夹闭左肾蒂60 min的方法建立肾I/R模型。Sham组和I/R组手术前后灌服生理盐水2 ml/d,DAPT组手术前后灌服DAPT 500μg/(kg·d)。结果HE染色结果显示,Sham组大鼠肾小管间质未见明显病变;I/R组肾小管出现小管扩张、管腔内管型、刷状缘丢失、间质炎症细胞浸润等病变,小管损伤以I/R后24 h最重。I/R组大鼠24、48和72 h的尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)、肾小管间质半定量计分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间Sham组增高(P<0.01);而经DAPT处理后,小管结构较I/R组完整清晰,病理改变明显减轻。DAPT组BUN、Scr、肾小管间质半定量评分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间I/R组大鼠降低(P<0.01)。结论肾I/R可诱导肾小管Notch2/Hes-1信号通路活化,并参与调控炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1表达,γ-泌肽酶抑制剂DAPT可能具有一定的肾保护作用。

Notch2、Notch3、Jagged2和Hes3在当归补血汤协同肌源性干细胞移植鼠骨髓中的表达和作用

目的探讨Notch2、Notch3、Jagged2和Hes3在当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)协同肌源性干细胞(Muscle-derived stem cells,MDSCs)移植小鼠骨髓中的表达和作用。方法将雌性昆明小鼠随机分为6组:照射模型组、骨髓移植组、MDSCs移植组和当归补血汤不同剂量(1、3和5倍)预处理+MDSCs移植组。各组分别给予生理盐水和不同剂量DBD灌胃1周后,经8Gy^(137)Cs-γ射线照射,尾静脉分别移植骨髓细胞和MDSCs。用Real-time PCR分别检测3周和8周末时小鼠骨髓中Notch2、Notch3、Jagged2和Hes3 mRNA表达量。结果 3周末,骨髓移植组和MDSCs移植组Notch2mRNA上调,给药组下调,组间比较无统计学差异(P>0.05)。Notch3 mRNA均下调(P<0.05),且给药2组下调幅度最大;8周末,除MDSCs移植组外,其余各组Notch2 mRNA均下调(P<0.05),且以给药2组下调幅度最大。各干预组Notch3 mRNA均下调(P<0.05),其中骨髓移植组下调幅度最小;Jagged2和Hes3 mRNA均未见表达。结论 Jagged2配体和Hes3靶基因既不参与造血干细胞向造血前体细胞分化过程,也不参与MDSCs向造血干细胞分化、增殖过程。而Notch2受体和Notch3受体在这些过程中扮演不同的角色。在造血重建后期,5倍当归补血汤可通过上调Notch2和Notch3表达来促进淋巴细胞的发育。

胃癌组织中Notch1、Notch2、COX-2的表达及其与临床病理学参数的关系

目的探讨胃癌组织中Notch1、Notch2、COX-2的表达及其与临床病理学参数的关系。方法使用qPCR及Western blotting法检测胃癌及癌旁组织中Notch1、Notch2及COX-2的表达,分析其与胃癌临床病理学参数的关系。结果胃癌组织中Notch1的表达降低,与胃癌的浸润深度、TNM分期有相关性(P<0.05);Notch2在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的浸润深度、远处转移相关(P<0.05);COX-2与Notch2表达呈正相关。结论胃癌组织中Notch信号通路可能通过影响COX-2的表达参与胃癌的浸润与转移。

miR-146a-5p通过调控Notch2表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平。将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并转染对应的mimic,RT-PCR检测miR-146a-5p和Notch2基因表达水平,Western blot检测Notch2蛋白水平,MTT检测细胞活性、Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA水平,生物信息学及荧光素酶报告实验检测miR-146a-5p和Notch2的靶向关系。结果:在动物实验中,与Control组比较,MI/R组miR-146a-5p基因表达水平降低、LVEDD、LVESD水平升高,心肌梗死面积,CK-MB、CK、LDH水平升高,心肌细胞凋亡率升高,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低;与MI/R组比较,MI/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高、LVEDD、LVESD水平降低,心肌梗死面积、CK-MB、CK、LDH水平降低,心肌细胞凋亡率降低,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。在细胞实验中,与Control组比较,OGD/R组miR-146a-5p基因表达水平降低,Notch2基因和蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R组比较,OGD/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高,Notch2基因和蛋白表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低,OGD/R+pc-Notch2组Notch2蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+mimic组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+pc-Notch2组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低。在荧光素酶报告实验中,与Notch2 wt组比较,Notch2 wt+miR-146a mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:miR-146a-5p能够在大鼠心肌缺血再灌注中减轻心肌损伤,其作用机制与抑制Notch2基因的表达有关。

Notch2和Notch3对滋养细胞株迁移与侵袭功能的影响

目的探讨Notch2和Notch3对BeWo及JAR人胎盘绒毛癌滋养细胞株迁移和侵袭能力的影响。方法通过对BeWo及JAR细胞Notch2和Notch3基因的过表达及干扰,观察两种滋养细胞株迁移、侵袭生物学功能的变化。结果在BeWo细胞中对Notch2干扰后细胞迁移能力在48 h明显减弱,而72 h的迁移能力及Notch2干扰后的细胞侵袭能力无显著变化;Notch3过表达后细胞迁移能力在48 h显著增强,而72 h则显著减弱;Notch3过表达后细胞侵袭能力在48 h、72 h均显著加强。在JAR细胞中对Notch3干扰后细胞迁移能力在48 h、72 h均明显减弱;而Notch3干扰后细胞的侵袭能力及Notch2过表达后细胞迁移能力、侵袭能力均无明显变化。结论 Notch2、Notch3影响BeWo及JAR细胞迁移、侵袭功能。

金匮肾气丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠肾组织Notch2/hes1信号通路的影响

目的:动态观察肾气丸对Notch2/hes1通路在庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中表达的影响。方法:72只大鼠随机分成空白组(生理盐水灌胃,6ml/kg;生理盐水腹腔注射,3ml/kg,1次/d,持继10d)、金匮肾气丸组(金匮肾气丸灌胃:0.6g·kg-1·d-1);Gen,120mg/kg(3ml/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)和模型组(生理盐水灌胃,6ml/kg;Gen,120mg/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)。应用光镜观察肾小管损伤情况;应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路在造模后1、14、28d肾脏的动态表达情况。结果:肾脏病理切片显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组、肾气丸组造成的肾脏损伤程度有所不同;在第28天,各组肾小管基本恢复正常。免疫印迹蛋白、RT-PCR显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组和金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05);在第28天,各组表达差异无统计学意义(P>0.05);在第1、14天,与模型组相比,金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显减少(P<0.05);在第28天,两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的重要角色之一,肾气丸可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻肾脏损伤并促进肾小管上皮细胞修复。

姜黄素后处理对缺血再灌注肾损伤大鼠Notch2/Hes-1通路的影响

目的探讨姜黄素后处理大鼠肢体缺血再灌注肾损伤对Notch2/Hes-1通路的影响。方法选取成年雄性SD大鼠80只,体重280~320 g,6~8月龄,采用随机数字表法,将其分成4组(各20例):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、姜黄素后处理组(I/R+Cur组)及抑制剂组(I/R+DAPT组)。采用夹闭双下肢股动脉4 h再灌注4 h复制肢体缺血再灌注肾损伤模型。在大鼠肢体缺血后4 h,I/R+Cur组经腹腔注射姜黄素200 mg/kg;I/R+DAPT组经腹腔注射DAPT 0.5μmol。于再灌注4 h时经颈动脉取血,待检血浆肌酐、尿素氮、丙二醛等指标。随后处死大鼠,采用HE染色检测肾组织病理变化,并对肾小管间质进行半定量评分;应用Western blotting和RT-PCR分别测定Notch2受体蛋白和靶分子Hes-1 mRNA的表达;通过ELISA测定肾组织TNF-α及IL-1β的表达。结果与Sham组比较,I/R组可见肾小管出现小管明显扩张,管腔内可见管型,刷状缘消失、肾间质炎症细胞浸润等病变,肾小管间质半定量评分升高(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);与I/R组比较,I/R+Cur组肾间质炎症细胞浸润减少,视野内未见肾小管扩张,偶可见少量管型等病理改变,肾小管间质半定量评分下降(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);I/R+DAPT组各指标与I/R+Cur组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素后处理可减轻大鼠肢体缺血再灌注时肾损伤,其作用机制可能与下调Notch2/Hes-1信号通路有关。

γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力及Notch2/hes1信号通路表达的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响。方法 72只成熟大鼠随机分成三组,每组24只;对照组给予生理盐水3ml.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,庆大霉素组给予Gen 120mg.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,DAPT组给予DAPT 5mg.kg-1.d-1腹腔注射,连用5天后停用2天,再用3天,同时腹腔注射Gen 120mg.kg-1.d-1,连继10天。各组注射前及注射后1、14、28天进行ABR检测后处死动物,应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的表达。结果对照组注射前后ABR反应阈无明显变化,与注射前相比,DAPT组和庆大霉素组注射后1、14、28天ABR阈值均明显升高,但随时间的延长阈值有所下降(P<0.05),其中,第28天DAPT组ABR反应阈较庆大霉素组下降明显(P<0.05);与对照组相比,DAPT组和庆大霉素组Notch2/hes1的表达均明显增高(P<0.05);与庆大霉素组相比,DAPT组的Notch2/hes1表达明显降低(P<0.05)。结论在庆大霉素致耳损伤及修复过程中,DAPT可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻耳蜗毛细胞损伤并促进耳蜗毛细胞修复,进而促进听功能恢复。

跨膜受体蛋白Notch2在肺腺癌组织中的表达变化及意义

目的探讨跨膜受体蛋白Notch2在肺腺癌发生、发展中的作用。方法收集肺腺癌及其配对癌旁正常肺组织石蜡标本各130例份,采用免疫组化法检测Notch2阳性表达率,分析其与患者临床病理特征的关系;比较Notch2阳性与阴性表达者3年及5年生存率。结果肺腺癌及其配对癌旁正常肺组织石蜡标本Notch2阳性表达率分别为54.6%(71/130)、36.2%(47/130),二者比较P<0.05。肺腺癌组织Notch2阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况有关(P均<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P均>0.05)。肺腺癌Notch2阳性表达者与阴性表达者3年生存率分别为57.3%、84.7%,5年生存率分别为14.1%、40.0%;Notch2阳性表达者3年及5年生存率均低于Notch2阴性表达者(P均<0.05)。结论肺腺癌组织Notch2表达升高;Notch2表达升高可能参与了肺腺癌的发生、发展,并提示患者预后不良。

当归补血汤协同肌源性干细胞移植促造血重建的研究:Notch2、Jagged2和Hes5在鼠脾脏中的表达及作用

目的了解Notch2、Jagged2和Hes5在当归补血汤(Danggui Buxue Decoction,DBD)协同肌源性干细胞(Muscle-derived stem cells,MDSCs)移植鼠脾脏中的表达及其临床意义。方法根据随机数字表将150只雌性昆明小鼠分成6组,于照射前1周分别给予6组不同剂量当归补血汤或生理盐水灌胃。在经8Gy 137Cs-γ射线照射后的小鼠尾静脉中移植骨髓细胞或肌源性干细胞。并于3周和8周末时采用实时定量PCR方法检测小鼠脾脏中Notch2、Jagged2和Hes5mRNA表达。结果移植3周末,与照射组相比,各给药组Notch2、Jagged2mRNA及给药3组Hes5mRNA表达上调,给药1组和给药2组的Hes5mRNA表达下调,且组间具有统计学差异(Notch2,F=4.777,P=0.012;Jagged2,F=11.650,P=0.000;Hes5,F=23.229,P=0.000)。移植8周末,与照射组相比,各给药组Notch2、Jagged2mRNA表达上调,Hes5mRNA表达下调,且仅Jagged2mRNA组间存在统计学差异(Notch2,F=2.979,P=0.056;Jagged2,F=18.796,P=0.000;Hes5,F=2.202,P=0.122)。结论在骨髓移植早期和晚期,以及MDSCs移植早期,Notch2和Jagged2均未参与B淋巴细胞的分化发育。Hes5在骨髓移植早期参与了脾脏中B淋巴细胞的发育调控。3倍剂量当归补血汤可在MDSCs移植早期通过调控Notch2及Jagged2来促进B淋巴细胞发育。

Notch2在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Notch2在喉癌组织及体外培养的喉鳞癌细胞Hep-2中的表达及与喉癌患者临床病理资料之间的关系。方法应用量子点超敏免疫荧光染色法检测95例喉癌组织标本中Notch2蛋白的表达,同时选取31例声带息肉标本作为对照组,结合患者临床病理资料进行分析;制作细胞爬片并进行量子点(QDs)免疫荧光染色检测Notch2蛋白在喉鳞癌细胞Hep-2中的表达。结果 95例喉癌组织中Notch2阳性表达率为92.6%(88/95),其阳性率与声带息肉中的阳性率(32.3%)相比差异均有统计学意义(P<0.01),其表达主要定位于细胞核。Notch2在喉癌组织中的表达与临床分期显著相关(P<0.05):临床分期越高,表达率越高。Notch2在喉癌组织细胞核中表达阳性与T分级、临床分期、病理分级和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。喉癌细胞Hep-2中Notch2表达阳性,其表达主要定位于细胞质和胞膜中。结论 Notch2在喉癌的发生发展中起着重要作用,其可能成为治疗喉癌的分子靶点。

EGCG对LoVo和SW480结肠癌细胞株的作用及对Notch1与Notch2基因表达的影响

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用,研究其对Notch1与Notch2的基因表达的影响.方法:体外培养LoVo细胞和SW480细胞,采用不同浓度的EGCG(10、20、35mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞细胞凋亡和细胞周期的影响.实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的LoVo细胞和SW480细胞的Notch1与Notch2基因的表达情况.结果:MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖均具有抑制作用,且呈浓度依赖性,不具有时间依赖性.流式细胞仪检测EGCG能增强LoVo细胞和SW480细胞的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,抑制其细胞增殖.实时荧光定量PCR检测EGCG能下调两株细胞Notch2的基因表达,而SW480细胞的Notch1基因表达有下调的趋势,LoVo细胞的Notch1基因表达有上调的趋势,但差异均无显著意义.结论:EGCG对体外培养的LoVo细胞和SW480细胞的增殖有明显抑制作用,且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期,其作用机制可能与下调Notch2的基因表达及激活Notch信号转导途径有关,但是EGCG对Notch1基因表达的影响尚需要做进一步探讨.

活血灵方对大鼠下肢深静脉血栓形成及Notch2/Hes-1表达的影响

目的:探讨活血灵方对大鼠下肢深静脉血栓形成(Deepvenousthrombosis,DVT)及Notch2/Hes-1通路的影响。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和活血灵方低剂量组(6.3 g/kg)、中剂量组(12.6 g/kg)、高剂量组(25.2 g/kg),每组10只。对照组仅进行缝合伤口,其余各组均通过结扎下肢静脉的方法构建下肢DVT模型;建模成功后按照各组给药剂量进行灌胃处理,持续灌胃14 d,模型组及对照组灌胃等量蒸馏水;以苏木精-伊红染法检测大鼠血栓形成处静脉组织病理学变化;全自动血凝仪测定大鼠凝血相关指标;全自动血液流变学仪测定大鼠血液流变相关指标;以酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血栓形成处静脉组织中炎症、氧化应激相关指标表达;蛋白免疫印迹法检测血栓形成处静脉组织中Notch2/Hes-1通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠活动量减少、双足肿胀、下肢皮肤青紫,股静脉血管中有紫黑色物质存在,血管壁呈现炎性浸润,D-二聚体水平(D-dimer)、血浆黏度、纤维蛋白、红细胞压积显著升高(P<0.05),凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)显著降低(P<0.05),血管中炎症因子、丙二醛(MDA)、Notch2、Hes-1蛋白表达水平显著增多(P<0.05),谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,活血灵方各剂量组大鼠血栓形成情况、APTT、TT、血浆黏度、炎性反应、氧化应激反应等均得到一定的缓解(P<0.05),Notch2、Hes-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:活血灵方缓解大鼠下肢DVT的作用可能是通过抑制Notch2/Hes-1通路实现。

家系不宁腿综合征/Willis-Ekbom病患者NOTCH2NLC基因研究

目的探讨家系不宁腿综合征/Willis-Ekbom病患者NOTCH2NLC基因是否存在GGC异常重复扩增。方法收集2016年1月至2020年10月作者医院诊治的家系不宁腿综合征/Willis-Ekbom病患者35例,对先证者提取DNA,进行重复引物聚合酶链反应PCR(RP-PCR)和富含GC的毛细管电泳的PCR(GC-PCR),以确定NOTCH2NLC基因中GGC重复序列的大小。结果35例家系不宁腿综合征/Willis-Ekbom病患者均未检测到GGC重复序列异常扩增。结论NOTCH2NLC基因GGC异常重复扩增可能不参与不宁腿综合征/Willis-Ekbom病的发病机制。

Notch2、Notch4在新生早产大鼠高氧肺损伤中的表达

目的探讨Notch2、Notch4在早产大鼠高氧肺损伤发生发展中的作用。方法将生后1d内早产SD大鼠随机分为高体积分数氧暴露组和空气组。于生后1、7、14、21d留取肺组织标本,免疫组织化学法检测Notch2、Notch4的表达,RT-PCR检测Notch2、Notch4 mRNA的表达。结果在肺发育不同时期,Notch2、Notch4表达具有各自不同的规律,吸氧体积分数为85%氧暴露不同程度改变了它们的表达。结论在吸氧体积分数为85%的氧气长期暴露,Notch2、Notch4异常表达,可能是早产大鼠肺损伤的发生机制之一。

Notch2/hes1信号途径在庆大霉素诱导大鼠肾损伤模型及修复过程中的表达

目的动态观察Notch2/hes1信号途径在庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的表达。方法 48只大鼠随机分成空白组和庆大霉素组。光镜下观察肾小管损伤情况;免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号途径在造模后第1、14、28天表达情况。结果肾脏病理切片显示模型组在第1天肾小管受到严重损伤;第14天肾小管损伤明显减轻;第28天肾小管基本恢复正常;空白组肾小管没有明显化;免疫印迹蛋白、RT-PCR显示与空白组相比,在第1、14天模型组Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05);第28天无明显差异(P>0.05);与模型组第1天比较,第14天和28天表达下调(P<0.05)。结论 Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的重要原因之一。