Notch1受体在脑缺血损伤中表达变化及作用的体外研究

目的观察Notch1受体在脑缺血损伤中的表达变化及其配体Jagged1对缺血损伤的影响,探讨Notch信号通路可能参与脑缺血损伤的机制。方法建立PC12诱导的神经元样细胞氧糖剥夺(OGD)体外脑缺血模型,应用Real-time PCR及Western-blot技术,检测OGD 3h、6h、9h、12h、16h、24h Notch1表达变化;MTT法检测外源性配体Jagged1对细胞缺血损伤的影响。结果与对照组相比,OGD后不同时间Notch1 mRNA及蛋白的表达量均有显著升高,3h时达最高峰,其后随OGD时间的延长逐渐下降,OGD 24h达最低点(P<0.05)。分别与对照组比较,外源性Jagged1干预可使正常及缺血神经元存活率均下降(P<0.05)。结论 Notch信号转导通路可能通过内源性的Notch1受体表达上调参与脑缺血性损伤过程。

加味凉血消风散调控寻常型银屑病(血热证)治疗前后外周血白细胞Notch通路中Notch1、Hes-1表达的初探

目的:探讨寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1表达情况,以及"加味凉血消风散"对其治疗前后Notch1受体及s下游靶基因Hes-1表达的影响。方法:分离30例寻常型银屑病(血热证)患者治疗前、后外周血白细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR定量检测Notch1受体及下游靶基因Hes-1的表达,治疗前并与健康人相比较。结果:健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Notch1的表达(P<0.05),两者有统计学意义;健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Hes-1的表达(P<0.05),两者有统计学意义,寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1高表达。经配对t检验Notch1在治疗前后(P<0.01),有统计学意义;采用非参数Wilcoxon符号配对设计资料的秩和检验,治疗前后Hes-1扩增值(P<0.05),有统计学意义,表明"加减凉血消风散"可下调Notch1基因、Hes-1基因的表达。结论:我们推测加味凉血消风散可能通过减少银屑病患者外周血中性白细胞的活化来发挥其抗炎作用。但中性白细胞是否将通过细胞间Notch信号通路调控影响着角质形成细胞的角化,加味凉血消风散是否能阻断其分化信息的传递有待我们进一步研究。

Notch1和HER2在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨Notch1和人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)在胃癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化检测317例胃癌组织芯片中Notch1的表达,采用免疫组化和FISH分别检测HER2蛋白过表达和基因扩增情况。结果:64例(20.2%)胃癌组织呈HER2蛋白过表达,58例(18.3%)呈HER2基因扩增,HER2蛋白过表达与基因扩增一致率为89.1%。HER2在不同肿瘤部位、组织学类型之间表达存在显著性差异(P<0.01);在不同分化程度、临床TNM分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。197例(62.1%)胃癌组织表达Notch1,Notch1表达在不同肿瘤分化程度、临床分期之间存在显著性差异(P<0.05)。关联分析显示Notch1表达与HER2蛋白过表达和基因扩增均存在显著负相关(分别r=-0.191,P<0.01;r=-0.169,P<0.01)。结论:胃癌中存在Notch1显著高表达,Notch1高表达促进胃癌的生长和浸润,患者往往具有高临床分期。HER2过表达与Notch1高表达之间存在显著负相关关系,提示Notch1可以作为胃癌新的候选治疗靶分子。

P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠中表达的特点

目的:探讨不同P2X家族受体在小鼠急性T淋巴细胞白血病发展中的表达变化规律。方法:制备Notch1过表达小鼠GFP+T细胞急性淋巴细胞白血病移植模型,流式术分选CD45.2+GFP+白血病细胞,实时定量PCR检测P2X受体家族的表达变化,荧光分光光度计检测P2X7受体介导的钙离子浓度的变化。结果:对照组和白血病组小鼠骨髓细胞表达除P2X5外的其他6种P2X家族受体。Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中,P2X7的表达水平逐渐升高,P2X1和P2X3的表达水平逐渐降低,而P2X2、P2X4和P2X6表达水平没有显著变化;分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞中,P2X家族受体的表达呈现相同的规律。对照组和白血病组小鼠骨髓细胞中P2X7受体在激动剂苯甲酰-苯甲酸ATP(BzATP)的刺激下都能介导细胞内钙离子浓度升高,但白血病组小鼠骨髓细胞内钙离子处于持续高浓度状态,而对照组小鼠细胞内钙离子浓度短暂升高后逐渐下降;P2X7介导的这种钙离子反应可被其特异的拮抗剂KN62所阻断。结论:P2X受体家族中P2X1、P2X3和P2X7的表达变化与小鼠急性T淋巴细胞白血病的发展相关,提示其介导的细胞间通讯可能在白血病发展中发挥重要作用。

MDA-MB-453细胞中分离CD44^+/CD24^(-/low)和SP细胞及其Wnt和Notch通路状态分析

目的:通过分离人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER2)过表达乳腺癌细胞MDA-MB-453中的CD44+/CD24-/low和SP(side population)细胞亚群,探索其干细胞表型,同时分析其SP细胞亚群与Wnt和Notch信号传导通路中的关键蛋白(β-catenin和Notch-1)基因扩增的关系,研究其SP细胞亚群与HER2和人类表皮生长因子3(human epidermal growth factor3,HER3)基因扩增的相关性。方法:应用流式细胞技术,检测HER2过表达乳腺癌细胞MDA-MB-453和HER2阴性细胞MCF-7是否存在CD44+/CD24-/low细胞亚群和SP细胞亚群。应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法检测MDA-MB-453细胞中β-catenin和Notch-1的基因扩增情况,粗略比较在MDA-MB-453细胞及其SP细胞亚群中β-catenin,Notch-1,HER2和HER3蛋白基因扩增量的差异。结果:MDA-MB-453细胞系未检测到CD44+/CD24-/low细胞亚群,但可检测出SP细胞亚群。在MDA-MB-453细胞和MCF-7细胞均可扩增到β-catenin和Notch-1。β-catenin和Notch-1的基因扩增在MDA-MB-453细胞中低于其SP细胞亚群;然而,HER2和HER3的基因扩增在两个细胞亚群中是类似的。结论:SP细胞能够富集MDA-MB-453乳腺癌干细胞。Wnt和Notch信号通路在MDA-MB-453细胞中处于开放激活状态,这些信号传导通路可能与MDA-MB-453乳腺癌干细胞的维持和活性相关。

Notch1和表皮生长因子受体在舌鳞癌及癌前病变中的表达

目的研究舌鳞癌(TSCC)及癌前病变中Notch1的表达,探讨其与表皮生长因子受体(EGFR)之间的潜在关系。方法免疫组化检测41例人TSCC、39例舌黏膜白斑(LP)和7例正常舌黏膜标本中Notch1和EGFR的表达。结果在正常舌黏膜和LP中,Notch1阳性表达主要位于角化层,部分颗粒层和棘层细胞也有表达,基底层无表达;而EGFR阳性表达主要位于基底层,棘层少见表达,颗粒层和角化层无表达。在TSCC中,Notch1阳性表达多见于癌巢中鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞,周边细胞无表达;而EGFR阳性表达主要位于癌巢周边细胞,鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞无表达。结论Notch1在舌黏膜上皮中促进细胞分化,在TSCC中起抑癌作用;而EGFR的表达可能抑制Notch1的表达,以维持细胞增殖,并促进TSCC发生发展。

Notch信号通路对人胰腺癌细胞NF-KB活性和侵袭能力的影响

背景:Notch信号通路在多种人类恶性肿瘤的发生、发展中起关键作用。研究显示Notch与NF-κB信号通路之间的交互作用可促进胰腺癌进展。目的:明确Notch信号通路对胰腺癌侵袭性的影响及其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞株BxPC3,以Notch-1 siRNA下调其Notch-1表达,同时设置转染对照siRNA的阴性对照组和不予siRNA干扰的空白对照组。以Transwell细胞侵袭实验观察各组BxPC3细胞的侵袭能力,电泳迁移率变动分析(EMSA)检测NF-κB活性,蛋白质印迹法检测Notch-1、NF-κB P65、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。结果:经Notch-1 siRNA干扰、Notch-1表达下调的BxPC3细胞,Transwell细胞侵袭实验穿膜细胞数较空白对照组和阴性对照组显著减少(26.5±1.3对78.5±2.4和76.7±2.2,P<0.01),NF-κB活性显著降低(P<0.01),NF-κB p65、VEGF、MMP-9蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:Notch-1可通过激活NF-κB促进其下游基因VEGF、MMP-9表达,由此增强胰腺癌的侵袭性。

Notch1信号途径参与低氧诱导的Jurkat细胞侵袭转移的作用机制研究

目的研究Notch1信号途径在低氧诱导的Jurkat细胞侵袭转移过程中的作用。方法分别在低氧和常氧环境下体外培养Jurkat细胞,观察细胞侵袭转移能力的变化,同时检测Notch1信号途径,基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达变化。采用RNA干扰的方法阻断Notch1信号途径后,观察Jurkat细胞侵袭转移能力的改变以及MMP-2和MMP-9的变化情况。结果低氧能够促进Jurkat细胞的侵袭转移能力,同时在低氧环境下,Notch1信号途径能够被激活以及MMP-2和MMP-9的表达增加。阻断Notch1信号途径后,Jurkat细胞侵袭转移能力下降,而MMP-2和MMP-9的表达也下调。结论在低氧条件下,Jurkat细胞侵袭转移能力增加,其机制可能通过激活Notch1信号途径促使MMP-2和MMP-9的表达增加来实现的。

miR-298调控Notch1对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-298对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响及其可能的机制。方法通过q PCR检测不同骨肉瘤细胞株中miR-298及Notch1的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-298的靶基因,并使用荧光光素酶报告基因及免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;将miR-298 mimics转染至骨肉瘤143B细胞中构建miR-298过表达模型,同时将Notch1 siRNA转染至骨肉瘤143B细胞中构建Notch1低表达模型,通过甲基噻唑基四唑(MTT)实验检测细胞的增殖能力、划痕实验检测细胞的迁移能力、Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 miR-298在骨肉瘤细胞株呈低表达水平,而Notch1在骨肉瘤细胞中呈过表达状态,增强miR-298的表达,骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著减弱(P <0. 05)。双荧光素酶报告基因结果显示增强miR-298的表达后,Notch1的表达及活性相应下调,Notch1蛋白表达水平降低(P <0. 05)。抑制Notch1的表达,骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著减弱(P <0. 05)。结论 miR-298可负向调控Notch1的表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

Notch1受体在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨Notch1受体与乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化技术检测106例乳腺癌组织中Notch1受体、ER、PR、CerbB-2受体表达情况,分析其与临床病理特征及预后的相关性。结果乳腺癌组织中Notch1受体表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05);Notch1受体表达与CerbB-2具有相关性(P<0.05),与ER、PR无显著相关性(P>0.05);Notch1受体高表达组5年生存率低于低表达组(P<0.05)。结论乳腺癌组织中Notch1受体表达明显高于癌旁正常组织;Notch1受体表达与CerbB-2具有相关性,推测Notch1受体可能与CerbB-2存在交互作用;Notch1受体高表达与预后不良有关。

P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠腹腔巨噬细胞中的表达

本研究旨在探讨Notch1诱导的小鼠急性T淋巴细胞白血病模型中,腹腔巨噬细胞P2X家族受体的表达变化规律及其与巨噬细胞活化状态的相关性。建立小鼠急性T淋巴细胞白血病模型后,根据F4/80和CD206两个表面标记,用流式细胞术分别分选腹腔巨噬细胞以及CD206+的M2样和CD206-的M1样腹腔巨噬细胞;用实时定量PCR法研究各亚群细胞中P2X家族受体的表达变化规律。结果表明:腹腔巨噬细胞、M2样和M1样腹腔巨噬细胞均表达除P2X5受体外的其他P2X家族受体,且表达强度中等。各受体的表达随白血病发展变化而有所不同,其中腹腔巨噬细胞中P2X1和P2X7受体的表达逐渐提高,P2X2和P2X3受体表达在白血病晚期显著降低,P2X4受体表达仅在中期有所降低,P2X6受体表达无显著变化。在白血病发展中期M2样和M1样腹腔巨噬细胞间P2X家族受体表达亦存在差异,其中M2样巨噬细胞P2X1受体的表达水平显著低于M1样巨噬细胞,而M2样巨噬细胞P2X7受体表达水平显著高于M1样巨噬细胞,提示P2X家族受体表达与腹腔巨噬细胞活化状态相关。结论:白血病小鼠腹腔巨噬细胞P2X家族受体表达与白血病进程和巨噬细胞活化状态相关。本研究为深入探究巨噬细胞在白血病发展中的作用机制奠定基础。

Notchl信号在乙型肝炎病毒X基因介导的肾小管上皮细胞免疫活性异常中的作用

目的探讨乙型肝炎病毒x基因（HBx）转染人近端肾小管上皮细胞系HK一2细胞后对其表达Notchl信号的影响，并观察Notchl信号在HBx介导的肾小管上皮细胞免疫活性中的作用。方法用分子克隆的方法构建pcDNA3．1／myc．HBx质粒及pcDNA3．1／myc—Notchl质粒，转染HK-2细胞，并应用短发卡RNA（shRNA）沉默Notchl基因表达。将细胞分为7组：①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒＋Notchl空载质粒组；⑤转染HBx质粒＋Notchl质粒组；⑥转染HBx质粒＋NotchlshRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒＋NotchlshRNA沉默质粒组。实时定量PCR和蛋白印迹法检测细胞中Notchl受体的变化，流式细胞术检测细胞表面人主要组织相容性复合物（MHC）一II、CD40表达的变化，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中白细胞介素（IL）-4、干扰素（IFN）一1水平。结果HK-2细胞经转染HBx基因后，可高表达HBx，NotchlshRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70％，基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notchl水平高于正常培养组及转染HBx空载质粒组相比，且Notchl过表达组细胞表面MHC。II、CD40表达均明显高于Notchl空载质粒组（9．69％±0．52％比4．90％±0．32％，21．56％±0．71％比15．74％-4-0．20％，均P〈0．05），其上清液中IL_4水平亦高于Notchl空载质粒组（50．2±0．6比28．1±1．2，P〈0．05），而IFN一1水平较低（11．9-4-1．7比18．8±0．8，P〈0．05）。Notchl基因沉默后上述指标结果呈相反变化。结论HBx基因转染HK-2细胞后可引起Notchl表达上调；Notchl又可促进细胞表面免疫分子的表达，并调控细胞因子分泌，最终导致细胞损伤及免疫微环境的紊乱。

Notchl受体在乙型肝炎病毒X基因介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用

目的探讨乙型肝炎病毒x基因（HBx）转染人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞株后对其表达Notchl受体的影响，并观察Notchl受体在HBx介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用。方法用分子克隆的方法构建pcDNA3．1／myc—HBx质粒及pcDNA3．1／myc—Notchl质粒，转染HK-2细胞建立转染株，并应用短发夹RNA（shRNA）干扰技术沉默Notchl基因表达。将细胞分为7组：①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒＋Notchl空载质粒组；⑤转染HBx质粒＋Notchl质粒组；⑥转染HBx质粒＋NotchlshRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒＋NotchlshRNA沉默质粒组。实时定量PCR和Western印迹法验证HBx转染成功，检测细胞中Notchl受体的变化，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测各组细胞的生长抑制率，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果HK-2细胞经转染HBx基因后可高表达HBx，NotchlshRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70％，基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notchl水平明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，且该组细胞凋亡率亦明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，差异均有统计学意义（14．94％4-0．32％比13．86％±0．18％、13．67％±0．54％，均P〈0．05）。转染HBx质粒＋Notchl质粒组细胞凋亡率明显低于HBx质粒＋Notchl空载质粒组，差异有统计学意义（10．10％±0．26％比14．79％±0．02％，P〈0．05），其细胞增殖抑制率亦低于HBx质粒＋Notchl空载质粒组。而转染HBx质粒＋NotchlshRNA沉默质粒组细胞凋亡率及细胞增殖抑制率均高于HBx质粒＋NotchlshRNA空载质粒组（均P〈0．05）。结论构建pcDNA3．1／myc—HBx质粒并转染肾小管上皮细胞可成功制备乙型肝炎病毒细胞感染模型，由此导致的肾小管上皮细胞生长抑制及凋亡增加可能与Notchl受体异常活化有关。

Notchl基因对裸鼠皮肤鳞状细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Notchl基因在人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法于裸鼠腋下接种0．2ml1×10^8／ml的SCL-1细胞悬液，建立人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型，将其分为三组：未处理组（接种PBS悬浮的未转染细胞），空载体转染组（接种空载体转染的细胞）和Notchl转染组（接种Notchl转染的细胞）。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况，采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）研究肿瘤组织中的细胞凋亡，利用RT—PCR和Western印迹研究肿瘤组织中Notchl、bcl-2和baxmRNA和蛋白的表达。结果Notchl转染组中肿瘤的生长明显受到抑制，其肿瘤的重量为（0．574±0．219）g，显著低于未处理组（2．642±0．404）g和空载体转染组（2．606±0．512）g（F=26．642，P值均〈0．01）。TUNEL结果表明，Notchl转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为87±9，明显高于未处理组（8±2）和空载体转染组（10±3）中细胞凋亡的数目（P〈0．05）；此外，RT—PCR和Western印迹结果表明Notchl转染组中裸鼠肿瘤组织Notchl和baxmRNA和蛋白表达均显著上升，而bcl-2的表达显著下调，三组间比较差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。结论Notchl基因能抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1裸鼠皮下移植瘤的生长，诱导SCL一1细胞凋亡，后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。

靶向沉默Notchl基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的探讨沉默Notchl基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响。方法将靶向Notchl的siRNA真核表达载体psiRNANotchl-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87，噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notchl后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况。RT—PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notchl基因mRNA和蛋白表达的变化。结果转染后72h．T24和BIU-87细胞G0／G1期细胞比例明显增加，分别为（80．13±2．69）％和（69．44±2．41）％，与T24对照组（23．89±1．32）％和BIU-87对照组（24．63±1．68）％比较差异有统计学意义（P值均〈0．05）。转染后72h，T24和BIU-87细胞凋亡率分别为（13．75±1．23）％和（8．72±1．01）％，与T24对照组（1．28±0．14）％和BIU87对照组（1．01±0．27）％比较差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。转染后24h细胞生长明显受到抑制，该抑制作用持续到转染后96h。转染后72h，T24和BIU87细胞中Notchl基因mRNA和蛋白表达明显下调（P〈0．05）。结论Notchl在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用，沉默Notchl基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖。

乳腺癌和癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA及蛋白的表达

目的检测Notch1基因mRNA及Notch1蛋白在人乳腺癌和癌旁乳腺组织中的表达，分析其临床病理学意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测60例乳腺浸润性导管癌和60例癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA，应用免疫组织化学sP法检测60例乳腺浸润性导管癌、30例导管原位癌及60例癌旁乳腺组织Notch1蛋白的表达，分析Notch1表达水平与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果NotchI基因mRNA在人乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中均有表达。Notch1蛋白在癌旁乳腺组织和导管原位癌中的阳性率分别为55％（33／60）、70％（21／30），二者差异无统计学意义（P〉0．05），在乳腺浸润性导管癌中的阳性率为90％（54／60），明显高于癌旁乳腺组织和导管原位癌的阳性率（P〈0．05）。乳腺浸润性导管癌Notch1蛋白的高表达与肿瘤的淋巴结转移（P=0．006）、病理学分级（P=0．001）和TNM分期（P：0．022）均呈显著正相关。结论乳腺浸润性导管癌存在Notch1蛋白的高表达。Notch1蛋白高表达与乳腺癌的恶变演进有关。Notch1基因的表达可能影响乳腺癌的发生、发展。

S100A6、Notch1在多发性骨髓瘤患者中的表达及其临床意义

目的探讨S100A6、Notch1在多发性骨髓瘤（MM）患者中的表达及其临床意义。 方法以28例MM患者为研究对象，以20例白细胞、血小板略低但骨髓检查未见异常者为对照，采用real time PCR法检测骨髓单个核细胞S100A6、Notch1的表达；采用免疫组化染色法检测S100A6、Notch1蛋白在MM患者骨髓和髓外浸润组织活检病理切片中的表达；采用real time PCR法和Western blot法检测siRNA沉默骨髓瘤U266细胞S100A6基因后对Notch1 mRNA和蛋白水平的影响。并结合临床进行相关分析。 结果①S100A6、Notch1 mRNA表达水平：初发MM患者组分别为2.19±1.25、2.98±0.64，均高于对照组（0.71±0.20、0.58±0.39）和稳定期患者组（0.85±0.26、0.72±0.40）（P值均〈0.05）；伴髓外转移组（8例）分别为3.36±1.23、5.71±3.96，均高于无髓外转移组（20例）（1.40±0.25、1.16±1.00）。②S100A6与Notch1 mRNA表达呈正相关（r=0.505，P=0.007）。③MM患者骨髓和髓外浸润组织活检病理切片均可见浆细胞S100A6、Notch1阳性表达。④siRNA转染U266细胞48 h后S100A6基因表达沉默，Notch1 mRNA及蛋白水平明显下降。 结论S100A6、Notch1表达与MM疾病发生、进展、髓外转移相关，二者具有显著相关性，可作为MM诊断及预后的指标。

肿瘤坏死因子α抑制剂通过激活Notch1信号通路减轻创伤小鼠心肌再灌注损伤

目的 研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）抑制剂对创伤后心肌缺血再灌注（ML/R）损伤的影响,探讨跨膜蛋白受体Notch1在其中的作用.方法 健康雄性c57小鼠,10～ 12周龄.建立创伤合并MI/R小鼠模型后分为5组,即溶剂对照组、依那西普组、乱码RNA对照组、Notch1 siRNA组和依那西普＋ Notch1 siRNA组,每组8只小鼠.采用Noble-Collip鼓建立创伤小鼠模型.创伤5d后,通过心肌点注射特异性siRNA（20 μg）建立Notch1降低小鼠模型.创伤7d后,建立MI/R小鼠模型,即麻醉小鼠后经左胸前第4、5肋间暴露心脏,结扎冠状动脉左前降支,缺血30 min后,解开结扎线实现再灌注.需要依那西普干预的小鼠均是在再灌注前10 min腹腔注射依那西普8 mg/kg.ELISA法检测血浆中TNF-α和肌钙蛋白I（cTnI）含量以及心肌组织中硝基酪氨酸水平.再灌注24 h后,利用小动物超声系统测定小鼠左心室射血分数（LVEF）.伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）双染缺血再灌注心肌组织,计算梗死心肌面积比值.采用caspase-3试剂盒测定心肌caspase-3活性.蛋白印迹法测定心肌TNF-α蛋白和Notch1胞内片段（Notch1 ICD）含量.化学发光法测定心肌超氧阴离子含量.结果 （1）依那西普组和溶剂对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果：依那西普组小鼠cTnI的含量明显低于溶剂对照组（P＜0.01）,LVEF明显高于溶剂对照组（P＜0.01）,心肌梗死面积明显低于溶剂对照组（P＜0.01）.依那西普组小鼠心肌组织中caspase-3活性明显低于溶剂对照组（P＜0.01）.（2）依那西普组和溶剂对照组小鼠心肌中TNF-α蛋白和Notch1 ICD含量及血浆TNF-α浓度的检测结果：依那西普组小鼠心肌中TNF-α蛋白含量明显低于溶剂对照组（P＜0.01）,且血浆中TNF-α浓度亦明显低于溶剂对照组（P＜0.01）.而依那西普组小鼠心肌中Notch1 ICD含量则明显高于溶剂对照组（P＜0.05）.（3） Notch1 siRNA组和乱码RNA对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果：Notch1 siRNA组小鼠cTNI的含量明显高于乱码RNA对照组（P＜0.05）,LVEF明显低于乱码RNA对照组（P＜0.05）,心肌梗死面积明显大于乱码RNA对照组（P＜0.05）.Notch1 siRNA组小鼠心肌caspase-3活性明显高于乱码RNA对照组（P＜0.05）.（4）溶剂对照组、依那西普组、依那西普＋ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸含量的检测结果：依那西普组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量均明显低于溶剂对照组（P均＜0.01）.而依那西普＋ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量则均明显高于依那西普组（P均＜0.05）.结论 TNF-α抑制剂可减轻小鼠创伤后MI/R损伤,其机制可能与激活Notch1信号通路而抑制心肌氧化/硝化反应有关.

组蛋白脱乙酰化酶抑制剂对Notch1受体及jagged1与jagged2配体表达的影响

目的探讨丙戊酸钠(VPA)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞Notch受体及配体表达的影响。方法培养RPMI8226细胞后,分为4组,对照组(空白)和小中大3个浓度(VPA 2,4,8 mmol·L-1)实验组。用不同浓度VPA处理RPMI8226细胞24,48,72 h,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖抑制作用。用反转录聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹方法检测细胞Notch1、jagged1及jagged2 mRNA和Notch1、jagged1及jagged2蛋白在VPA作用后48 h的表达。结果 VPA对RPMI8226细胞的增殖抑制作用具有明显的浓度-时间依赖效应。不同浓度VPA作用RPMI8226细胞48 h,与对照组相比,Notch1、jagged1、jagged2 mRNA和Notch1、jagged1、jagged2蛋白表达均明显降低(P<0.05),且随着VPA浓度的不断增高,各基因和蛋白的表达量逐渐降低,3个浓度VPA组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 VPA能够下调RPMI8226细胞Notch1受体、jagged1及jagged2配体的表达水平,这可能是VPA治疗多发性骨髓瘤的作用机制之一。

Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤作用的研究

目的探讨Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤作用的分子机制。方法采用Noteh1胞内结构域（NIICD）慢病毒表达载体（Lv—N1ICD）及N1ICD慢病毒干扰载体（Lv—N1ICD—shRNA）分别感染H9e2心肌细胞，建立体外心肌缺血再灌注（H／R）、缺血预适应（IPC）及缺血后适应（IPost）模型，从而分为对照组、缺氧／复氧（H／R）组、缺氧／复氧＋N1ICD感染（H／R＋N1ICD）组、缺血预适应（IPC）组、缺血预适应＋NIICD干扰（IPC＋N1ICD—shltNA）组、缺血后适应（IPost）组、缺血后适应＋N1ICD干扰（IPost＋N1ICD-shRNA）组。采用凋亡检测试剂盒、活性氧（ROS）检测试剂盒分别检测细胞凋亡、细胞内ROS；采用免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β／糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β／GSK-3B）的表达。结果心肌细胞凋亡率在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD—shRNA组分别为（5．34±1．70）％、（47．03±4．10）％、（33．89±12．25）％、（35．85±3．17）％、（51．12±8．22）％、（37．35±3．82）％、（47．90±3．08）％，差异有统计学意义（F=18．47，P〈0．05）。心肌细胞ROS在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD—shRNA组分别为624．66±79．52、1221．87±63．66、913．12±115．82、935．85±201．62、1204．03±113．82、967．15±106．11、1296．59±222．38，差异有统计学意义（F：8．77，P〈0．05）；心肌细胞p-GSK-3β／GSK-3β比值在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD-shRNA组分别为0．58±0．12、0．62±0．20、1．24±0．09、1．16±0．12、0．72±0．15、1．16±0．12、0．75±0．12，差异有统计学意义（F=11．21，P〈0．05）。结论Notchl作为内源性心肌保护因子，通过促进GSK-3磷酸化，抑制心肌细胞凋亡，减轻心肌细胞ROS形成，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。