痰湿型PCOS大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及Nox1/p-Akt/Glut4信号通路变化的研究

目的:观察痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)线粒体功能及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NADPH oxidase1,Nox1)/磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter protein 4,Glut4)信号通路的作用,探讨“痰湿不孕”的科学内涵。方法:选取动情周期规律的SD大鼠22只,运用高脂+来曲唑灌胃法复制痰湿型PCOS大鼠并随机分为对照组10只和模型组12只。造模结束后选取动情周期延长的大鼠为模型组10只提取卵巢GCs,透射电镜观察GCs中线粒体的形态学变化,比色法检测GCs中腺嘌呤核苷三磷酸(adenine triphosphate,ATP)含量,化学发光法检测GCs中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot法检测GCs中Nox1、p-Akt和Glut4蛋白表达水平。结果:模型组线粒体数量降低出现肿胀、嵴减少、空泡化改变,与对照组比较模型组GCs中ATP含量降低,ROS水平升高(P<0.01)。Nox1蛋白表达增高,p-Akt和Glut4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GCs线粒体功能下降和Nox1/p-Akt/Glut4信号通路异常是痰湿型PCOS卵泡发育异常与闭锁的可能机制。

A549细胞炎症氧化应激模型Nox1启动子差异结合蛋白的筛选

目的在炎症氧化应激细胞模型中筛选参与Nox1启动子活化的相关调控蛋白。方法 TNF-α刺激A549细胞建立炎症氧化应激细胞模型,运用DNApull-down技术筛选出Nox1启动子区结合蛋白,再用二维凝胶电泳技术分离pull-down后的结合蛋白,然后在2D凝胶上选取与对照组表达差异大于1.5倍的蛋白质点进行切胶,最后经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,筛选出Nox1启动子区差异结合蛋白。结果 2D凝胶上共筛选出1.5倍以上差异蛋白点7个,均为表达上调蛋白,鉴定出GLE1、DDX19A,KRT1、KRT1O四种蛋白质。结论 GLE1、DDX19A,KRT1、KRT10参与了TNF-α诱导的A549细胞Nox1活化的基因调控,为研究炎症氧化应激细胞模型的Nox1启动子区调控蛋白的生物学功能奠定了实验基础。

沉默NOX1表达对A549细胞增殖的影响

目的:探讨NOX1对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法:通过瞬时转染技术转染特异性的NOX1小干扰RNA(siRNA),按转染情况分为Mock组、NC组、FAM-NC-NOX1 siRNA组,转染12 h后采用Western blot检测NOX1蛋白的表达,通过荧光探针DCFH-DA检测细胞ROS水平,流式细胞仪检测细胞增殖活性和凋亡率。结果:siRNA转染12 h以上,转染率稳定在80%以上,NOX1蛋白的表达量与Mock组相比下降(P<0.05);与Mock组相比,FAM-NC-NOX1 siRNA组细胞在24、36、48 h的增殖活性均下降,ROS水平也下降(P<0.05)。结论:NOX1siRNA转染A549细胞能有效抑制细胞的增殖。

沉默NF-κB/p65对TNF-α诱导的肺泡Ⅱ型上皮NOX1基因表达的影响

目的构建急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮A549细胞炎症模型,通过沉默NF-κB基因,观察NOX1基因表达水平及氧化应激指标变化,探讨NOX1基因与NF-κB/p65的相关性。方法运用RNA干扰技术沉默NF-κB/p65基因,以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),采用RT-PCR及Western blot检测NOX1基因表达水平,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平,比色法检测细胞的总抗氧化能力、总谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶活力和丙二醛的浓度。结果采用TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞可以分别在基因和蛋白水平上调NOX1基因表达;同时,增加细胞丙二醛和活性氧浓度,降低总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度放大(P<0.05)。预转染NF-κB/p65 siRNA,可下调NOX1基因的表达,减少细胞丙二醛、活性氧生成,提高总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度降低(P<0.05)。结论沉默NF-κB/p65基因,可有效下调TNF-α诱导A549细胞氧化应激程度及NOX1基因表达水平,提示NF-κB/p65可能参与调控TNF-α诱导的NOX1基因表达。

P38MAPK、Nox1及ROSmRNA在早发型重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨Nox1、P38MAPK及ROS mRNA表达与早发型重度子痫前期发病的关系,揭示早发型重度子痫前期发病基础,为临床治疗提供理论依据。方法选择早发型重度子痫前期患者32例、晚发型重度子痫前期患者30例为研究组,35例正常分娩者为对照组。胎盘娩出后立即于脐带附着处母体面,避开钙化出血梗塞区(肉眼观)剪取大小为1 cm×1 cm×1 cm的组织两块,一份用无菌生理盐水(含0.1%DEPC水)漂洗,去除血液,置于经DEPC水处理并消毒的冻存管中,于-80℃冰箱保存待行RT-PCR检测;另一份取材后即以4%多聚甲醛固定,常规脱水,浸蜡,包埋,4um切片(每例5张),载玻片经清洁处理,APES包被,进行HE染色及脂肪特染观察胎盘组织的脂肪浸润情况和形态学改变;采用RT-PCR及免疫组化方法检测胎盘组织中Nox1、P38MAPK、ROSmPNA表达水平。结果各组胎盘组织的合体滋养细胞、血管内皮细胞、蜕膜细胞中均可以检测到Nox1、P38MAPKmRNA及ROS表达。早发型重度子痫前期组Nox1mRNA表达显著高于晚发型重度子痫前期组及对照组(0.712±0.012,0.215±0.013,0.113±0.01,p<0.01);早发型重度子痫前期组ROSmRNA水平显著高于晚发型重度前期组及对照组(142.43±11.81,96.12±8.93,102.21±9.75,p<0.01);早发型重度子痫前期组P38MAPKmRNA表达水平显著高于晚发型重度前期组及对照组(0.109±0.057,0.074±0.074,0.042±0.013,p<0.01)。各组胎盘组织中Nox1表达与ROS水平呈正相关(r=0.81,p<0.05);各组胎盘组织中Nox1表达与P38MAPKmRNA呈正关(r=0.63,p<0.01)。结论早发型重度子痫前期组胎盘中Nox1mRNA高表达与其发病及发展密切相关。P38MAPK介导的P38MAPK-Nox1-ROS脂质代谢途径可能在早发型重度子痫前期发生发展中起重要作用。

NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用

目的探讨NOX1和NOX4在小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发病中的作用。方法给予C57BL小鼠高脂饮食及脂多糖建立非酒精性脂肪肝模型,同时设立正常饮食组作为对照。观察各组小鼠血清ALT、AST值,HE染色评定脂肪性肝炎程度,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测NOX1、NOX4mRNA的表达水平。结果非酒精性脂肪性肝炎模型建立成功,NASH模型组小鼠ALT、AST及肝指数明显高于高脂(HF)组(P<0.05),HF组NOX1、NOX4mRNA表达高于正常对照组(P<0.05),NASH组的NOX1、NOX4mRNA表达明显高于正常对照组和HF组(P<0.01)。结论本实验初步认为,NOX1和NOX4参与胰岛素抵抗的形成,可能是影响NASH发生和发展的重要因素。

紫花前胡素经Nox1/Akt信号通路对口腔鳞癌细胞增殖及侵袭的抑制作用

目的探讨紫花前胡素通过Nox1/Akt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法SCC-25组(A组)及紫花前胡素低、中、高剂量组(B1组、B2组、B3组)均取10 mL SCC-25细胞(密度为5×106/mL),置有10%胎牛血清的DMEM培养基中,分别加入紫花前胡素0,20.0,40.0,80.0μg/mL,置CO2培养箱(37℃、5%CO2、2%O2、93%N2)培养72 h。采用四氮唑盐(MTT)比色法、结晶紫染色、MilliCell室、流式细胞仪、逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法、酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞增殖及凋亡水平、单克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA及P-Akt mRNA表达水平,以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果B1组、B2组、B3组吸光度(OD)值、存活率水平、克隆形成数、穿膜数、Nox1 mRNA水平、P-Akt mRNA水平、MDA水平明显低于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关;B1组、B2组、B3组细胞凋亡率水平、SOD及GSH-Px水平明显高于A组(P<0.05),且与剂量呈正相关。结论紫花前胡素能抑制口腔鳞癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡,其机制与紫花前胡素抑制Nox1活性降低Akt的磷酸化水平,进而降低其氧化应激水平有关。

NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在溃疡性结肠炎中的表达分析

目的探讨NADPH氧化酶家族(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs)的主要成员NOX1、NOX2和双氧化物酶(dual oxidase,DUOX)2(人:NOX1、NOX2和DUOX2;小鼠:Nox1、Nox2和Duox2)在人炎症性肠病和小鼠肠炎模型结肠中的表达。方法人结肠标本选自于通过结肠镜活检或手术切除的炎症性肠病组织及距离病变组织边缘5 cm以上正常组织;同时选用8~10周龄的C57BL/6雌性小鼠建立结肠炎模型,采用掷硬币法将其随机分为对照组和慢性肠炎组,慢性肠炎组先自由饮用1.0%(质量分数)葡聚糖硫酸钠7 d,然后自由饮水14 d,循环3次;通过体质量变化和HE染色方法评估肠道炎性反应程度。采用实时定量PCR技术和免疫组织化学方法分别检测结肠组织中NOX1、NOX2及DUOX2 mRNA和蛋白表达情况,并分析在人炎症性肠病中三者表达情况与临床特征之间的关系。结果 NOX1、NOX2和DUOX2 mRNA在人炎症性肠病结肠组织中的表达量均显著高于自身正常对照组织,分别增高2.8、2.0和3.3倍(P均<0.01);与人不同,Nox1和Duox2 mRNA在小鼠慢性肠炎结肠组织中的表达量差异无统计学意义,Nox2 mRNA增加2.4倍(P<0.01)。Nox1蛋白在正常结肠上皮细胞刷状缘和胞质中表达;Nox2蛋白主要表达于浸润的吞噬细胞和中性粒细胞;Duox2蛋白在正常结肠黏膜组织中低表达;三者在人炎症性肠病结肠组织中表达均上调(均P<0.01);在小鼠慢性肠炎模型中,Nox2和Duox2蛋白上调(均P<0.01),而Nox1无变化。除了NOX2 mRNA在男性病人表达高于女性病人外,未发现这些氧化酶与病人临床特征之间有关联。结论NOX1、NOX2和DUOX2不但在维持机体正常生理功能过程中发挥重要作用,而且在炎症性肠病初期阶段的发病中也起一定的作用。

NADPH氧化酶Nox1和Duox2在小鼠肠炎中的表达和意义

目的:探讨NADPH氧化酶Noxl和Duox2在小鼠肠炎发病中的表达及意义.方法:将6-8周龄的C57BL/6,小鼠随机分为正常组、1.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)组和3.0%DSS组,每组10只,正常组正常饮水,1.5%和3.0%DSS组分别自由饮用含有1.5%或者3.0%DSS的饮水,共6d建立小鼠急性肠炎模型.通过疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度测定和HE染色等方法评估肠道炎症程度.利用生化方法检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及结肠组织中氧化型谷胱甘肽/还原型谷胱甘肽(oxidized glutathione/glutathione,GSSG/GSH)比率等氧化应激指标,以评估机体氧化应激程度.采用免疫组织化学方法和实时定量PCR技术分别检测小鼠结肠组织中NADPH氧化酶Nox1和Duox2蛋白及mRNA表达情况.结果:正常组小鼠无肠炎,1.5%DSS组、3.0%DSS组小鼠分别呈轻度和重度肠炎.氧化应激指标(MDA、GSSG/GSH)在1.5%DSS组升高,而3.0%DSS组进一步升高(均P<0.05).NADPH氧化酶Nox1与Duox2蛋白和mRNA在不同炎症程度时表达不同:Nox1蛋白和mRNA在正常组呈高表达,在1.5%DSS组表达下调(P<0.05),在3.0%DSS组进一步下调(P<0.05);Duox2蛋白和mRNA在1.5%DSS组表达较正常组明显上调(P<0.05),而在3.0%DSS组表达下调至正常水平.结论:Nox1主要在维持肠道正常生理功能中发挥作用,而Duox2除了维持正常生理功能外,可能还积极地参与肠炎发病过程.

NOX1基因荧光素酶报告基因系统的建立

目的:对炎症细胞因子TNF-α及IFN-γ刺激下,人NOX1基因的表达调控进行初步分析。方法:将NOX1基因5′-端上游序列连接到无启动子的PGL3-BASIC质粒,构建了PGL3-BASIC/NOX1报告质粒。PGL3-BASIC/NOX1质粒转染A549细胞,用TNF-α、IFN-γ刺激12h,双荧光素酶报告基因系统检测基因表达情况。结果:克隆的NOX1片段具有较强的启动子活性,在TNF-α和IFN-γ共同刺激下,转染报告基因的A549细胞萤光素酶活性与对照相比有明显的增高(约4.3倍)。分析显示NOX1基因5′-端上游序列片段含有NF-κB结合位点,提示细胞因子刺激的荧光素酶表达增强可能与NF-κB位点激活相关。结论:NOX1基因表达水平明显受到炎症细胞因子的调控,提示该基因可能参与机体免疫防御(特别是上皮细胞免疫防御),值得进行深入研究。

NOX1 siRNA对TNF-α诱导的A549细胞凋亡的影响

目的:探讨NOX1对TNF-α诱导的A549细胞凋亡的影响。方法:将A549细胞分为3组,空白组、TNF-α组和TNF-α+NOX1 siRNA组。TNF-α+NOX1 siRNA组细胞采用瞬时转染技术转染特异性NOX1 siRNA,转染12 h后用含TNF-α(10μg/L)的培养基继续培养;空白组和TNF-α组细胞分别用培养基和含TNF-α的培养基培养。48h后,采用Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡率,DCFH荧光标记法检测细胞中ROS的表达量,Western blot法检测NOX1及p-JNK蛋白的表达水平。结果:与空白组相比,TNF-α组细胞凋亡率和ROS表达量升高(P<0.05),NOX1和p-JNK蛋白表达水平升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+NOX1 siRNA组细胞凋亡率和ROS表达量降低(P<0.05),细胞中NOX1和p-JNK蛋白表达水平也降低(P<0.05)。结论:NOX1可能通过增加ROS的表达,进而激活JNK/MAPK信号通路,引起A549细胞的凋亡。

重组Nox1在NIH3T3细胞中的表达及其对活性氧的影响

目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响。方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3-Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT-PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和细胞活力。结果RT-PCR显示转染后的NIH3T3细胞可以有效地转录Nox1mRNA,细胞中的活性氧水平明显升高,同时对As2O3细胞毒作用更加敏感。结论含有Nox1cDNA的重组质粒pcDNA3-Nox1转染细胞后可有效表达Nox1,使活性氧水平升高,并因此增加细胞对药物细胞毒的敏感性。

复方苦参注射液对奥沙利铂耐药直肠癌裸鼠移植瘤的影响及与NOX1通路的关系

目的:观察复方苦参注射液(Compound Kushen Injection,CKI)对奥沙利铂耐药SW1463直肠癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并进一步探讨其作用机制与NOX1信号通路的关系。方法:诱导SW1463直肠癌细胞对奥沙利铂耐药后,建立SW1463耐药裸鼠移植瘤模型,将40只荷瘤鼠随机分为对照组、CKI低剂量组[1.0 mL/(kg·d)]、CKI中剂量组[2.0 mL/(kg·d)]和CKI高剂量组[4.0 mL/(kg·d)],记录荷瘤体积,持续干预28 d后处死动物取材,ELISA法检测移植瘤中活性氧(ROS)含量水平,qPCR法检测移植瘤中NADPH氧化酶(NOX)1和NOXO1的mRNA转录水平,ELISA法检测移植瘤中NOX1和NOXO1蛋白表达水平。结果:不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤的生长,降低移植瘤质量分数(P<0.05 vs.对照组),并呈一定程度的剂量依赖性,其中CKI高剂量组抑瘤作用最佳(P<0.05 vs.CKI低、中剂量组);不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤中ROS生成(P<0.05 vs.对照组),其中CKI高剂量组ROS水平最低(P<0.05 vs.CKI低、中剂量组);不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤中NOX1和NOXO1的mRNA相对转录水平和蛋白表达水平(P<0.05 vs.对照组),其中CKI高剂量组抑制作用最强(P<0.05 vs.CKI低、中剂量组)。结论:复方苦参注射液能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能是通过NOX1信号通路调控ROS水平从而发挥抗奥沙利铂耐药直肠癌作用的。

Nox1/4抑制剂减轻脂多糖致人脐静脉融合细胞的损伤

目的研究Nox1/4抑制剂对脂多糖致人脐静脉融合细胞EA.hy926损伤的保护作用及相关机制。方法将EA.hy926细胞分为对照组、LPS(脂多糖)组、Nox1/4抑制剂(GKT137831)+LPS组。CCK8法检测细胞活力;试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)与一氧化氮(NO)的含量;免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的水平;ELISA检测细胞IL-1β、IL-6的分泌情况;Western blot检测细胞内内质网应激标志性蛋白表达水平。结果 LPS组较对照组比较,NO的释放量、ROS生成量以及炎性因子IL-1β和IL-6释放量明显增加(P<0.05);使用Nox1/4抑制剂干预后,ROS产生以及NO、IL-1β和IL-6的释放量明显降低(P<0.05)。与对照组相比,LPS组细胞内GRP78、p-PERK、ATF6和IREα蛋白表达上调,提示内质网应激被激活;Nox1/4抑制剂干预后,内质网应激标志性蛋白表达下降。结论 Nox1/4抑制剂减轻了LPS诱导的EA.hy926细胞内质网应激损伤。其作用机制可能是通过减少细胞内Nox1/4来源的ROS的生成,抑制内质网应激,进而减轻炎性反应,改善内皮功能。

连理汤调控溃疡性结肠炎NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达临床研究

[目的]观察治疗前、后溃疡性结肠炎患者NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达变化,探讨连理汤干预溃疡性结肠炎的机制研究。[方法]60例符合诊断标准、纳入标准、排除标准的溃疡性结肠炎患者,按就诊顺序随机分为2组,对照组30例,予美沙拉嗪治疗12周,治疗组30例,予连理汤治疗12周,记录患者治疗前后主要症状变化,应用实时荧光定量PCR技术检测治疗前、后NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达变化。[结果]全部病例完成临床观察,治疗组总有效率为83.33%。对照组总有效率为86.67%,2组治疗后患者主要症状较治疗前明显改善,2组患者治疗前NADPH氧化酶Nox1和Duox2mRNA表达呈上升趋势;治疗后NADPH氧化酶Nox1和Duox2mRNA表达呈下降趋势,2组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05),2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]连理汤可能通过阻断NADPH氧化酶Nox1和Duox2的表达,抑制炎症因子激活,发挥治疗溃疡性结肠炎的效用。

猪NOX1基因启动子区转录因子的筛选与鉴定

为了寻找调控猪NADPH氧化酶1(NOX1)基因转录的转录因子,本研究采用3′端固定,5′端逐渐截短的方法,扩增了NOX1基因的启动子区序列,并将它们分别连入双荧光素酶报告基因载体,转染PK15细胞后,检测双荧光素酶的相对活性。根据活性高低判定转录因子可能结合的位置,利用重叠PCR技术定点缺失转录因子的结合序列,再次连入报告载体后,根据荧光素酶活性的变化判定是否为NOX1基因真正的转录调控因子。结果发现,NOX1基因启动子区的-1618~-1 bp区间存在转录调控因子的结合位点,对该区间开展2轮截短试验后,初步判定-1149~-1091 bp和-208~-115 bp区间存在正调控元件,-1091~-1052 bp区间存在负调控元件。针对上述3个区间,同时结合在线软件的预测结果,定向缺失了-1104~-1092 bp,-1051~-1043 bp,-1043~-1033 bp和-126~-116 bp小片段后,确定-1104~-1092 bp和-126~-116 bp区间存在正调控该基因转录的元件结合位点,分别为ZNF384、ELF-1和TBR1。本研究克隆了猪NOX1基因的启动子序列,对可能结合到该区间的转录因子进行了筛选与分析,为后续分析NOX1的转录调控机制,探讨其生物学功能奠定了基础。

Nox1基因启动子表达载体的构建

目的克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)上游启动子序列,为研究Nox1基因的转录调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1415bp(-1415～0)、1276bp(-1415～-140)、997bp(-1415～-419)、839bp(-1415～-577)、470bp(-1415～-946)大小的Nox1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性。结果在A549细胞中,各Nox1启动子片段均有活性;-140～-419bp和-577～-946bp区域可能存在Nox1启动子核心区域。结论成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Nox1启动子序列,为进一步研究Nox1基因的转录调控机制奠定了基础。

AngⅡ通过ATF-1通路诱导NOX1高表达

目的:探讨激活转录因子(ATF1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中NOX1基因表达增加的作用。方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,用荧光实时定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)检测NOX1基因表达的量,Western Blot检测ATF-1蛋白在AngⅡ的刺激是否引起NOX1基因的高表达并用RNA干扰(RNAi)技术转染VSMCs使ATF-1基因沉默来观察NOX1的表达。结果:AngⅡ能够诱导NOX1基因的表达增加以及增强ATF-1的磷酸化及活性,ATF1基因沉默反过来可抑制AngⅡ诱导的NOX1基因表达的增加。结论:在大鼠的VSMCs中,ATF-1是介导NOX1基因表达的一个必须的转录因子。

线粒体介导血管紧张素Ⅱ诱导NOX1基因表达的增加

目的:探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)NOX1基因表达增加中线粒体所起的作用。方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,用线粒体呼吸链的抑制剂阻断线粒体的作用,用荧光实时定量PCR检测NOX1基因表达的量。结果:AngⅡ能够诱导NOX1基因的表达增加,线粒体呼吸链的抑制剂能够抑制上述这一作用。结论:在大鼠的VSMCs中,AngⅡ诱导NOX1的增加通过线粒体呼吸的作用。

NOX1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1) mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达情况及其与临床病理参数、预后的相关性。方法:选取126例结肠癌患者作为研究对象,留取癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR法检测NOX1 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测NOX1蛋白表达情况;Ualcan数据库检索NOX1 mRNA及蛋白在结肠癌中的表达情况;分析结肠癌患者NOX1 mRNA及蛋白表达水平与预后的关系;分析影响结肠癌预后的因素。结果:Ualcan数据库中,TCGA数据集显示结肠癌组织NOX1 mRNA水平明显高于正常结肠组织(P<0.05),CPTAC数据集显示结肠癌组织NOX1蛋白水平与正常结肠组织比较差异无统计学意义。结肠癌患者癌组织NOX1 mRNA水平及蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌患者癌组织NOX1 mRNA及蛋白表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期、分化程度有关(P<0.05)。NOX1 mRNA高表达结肠癌患者5年生存率明显低于NOX1 mRNA低表达患者(χ^(2)=13.098,P<0.05);NOX1蛋白阳性表达结肠癌患者5年生存率明显低于NOX1蛋白阴性表达患者(χ^(2)=6.369,P<0.05)。NOX1蛋白、淋巴结转移是影响结肠癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论:NOX1 mRNA及蛋白在结肠癌中表达升高,且与淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征及预后密切相关。