真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65表达的变化以及炎症细胞浸润情况

目的探讨真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65的表达变化以及炎症细胞浸润情况。方法取清洁级树鼩25只分成3组,实验组10只,空白对照组10只,正常对照组5只,均取右眼为实验眼。将茄病镰刀菌接种到沙氏葡萄糖琼脂培养基中培养,收集真菌孢子混悬液。实验组用胰岛素针头(29G)在实验眼角膜上皮细胞层做“#”形划痕,结膜囊滴真菌孢子混悬液5μL;空白对照组实验眼结膜囊滴生理盐水5μL,其余步骤同实验组;正常对照组不做任何处理。采用Western blot检测蛋白表达,HE染色观察炎症细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测蛋白阳性表达情况。结果Western blot检测结果显示:实验组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量均明显升高,与正常对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);正常对照组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量与空白对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫组织化学染色结果显示:正常对照组及空白对照组角膜上皮细胞胞浆均未见NOD1蛋白表达,实验组NOD1蛋白表达于角膜上皮细胞胞浆,表达强度与时间呈正相关;正常对照组及空白对照组角膜基质层及角膜内皮细胞层均未见NF-κBp65蛋白表达,实验组NF-κBp65蛋白表达于角膜基质层的中性粒细胞及角膜内皮细胞,表达强度与时间呈正相关。HE染色结果显示:正常对照组角膜各层组织结构正常,未见炎症细胞浸润;实验组造模后第1天,角膜水肿,上皮细胞层缺失,基质层见大量炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主;造模后第3天,角膜高度水肿,组织形态消失,炎症细胞浸润数量明显多于第1天,同样以中性粒细胞为主。结论NOD1与NF-κBp65在树鼩镰刀菌性角膜炎角膜组织表达升高,NOD1/NF-κB信号通路在真菌性角膜炎促炎反应中发挥重要作用。

七叶皂苷钠联合软通道穿刺引流术对高血压脑出血患者IL-17、NF-κBp65表达的影响

目的探讨七叶皂苷钠联合软通道穿刺引流术对高血压脑出血患者白细胞介素-17(IL-17)、核因子-κBp65(NF-κBp65)表达的影响。方法将2021年5月至2023年4月期间周口市中心医院收治的106例高血压脑出血患者按治疗方案分为实验组(n=64)、对照组(n=42),对照组予以软通道穿刺引流术及术后常规内科治疗,实验组在对照组基础上联合七叶皂苷钠治疗,均治疗4周。比较两组的临床疗效、治疗前及治疗后4周的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、格拉斯哥昏迷(GCS)评分、日常生活活动能力(ADL)评分、脑水肿指标、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_(1)R)、血清P物质(SP)、IL-17、NF-κBp65水平。结果实验组的临床总有效率高于对照组(χ^(2)=5.342,P<0.05);治疗后,两组的NIHSS评分、脑水肿相关指标均降低,GCS评分及ADL评分均提高,且实验组改善程度优于对照组(t=10.083、7.251、3.248、2.747、6.353,P<0.05);治疗后,实验组的AT_(1)R、IL-17、NF-κBp65表达水平均低于对照组,SP表达水平高于对照组(t=6.229、10.667、17.503、5.815,P<0.05)。结论七叶皂苷钠联合软通道穿刺引流术治疗高血压脑出血患者可提高临床效果,其可能通过降低AT_(1)R、提高SP水平以及调节IL-17与NF-κBp65表达有关。

卵巢上皮性癌中Raf激酶抑制蛋白、核因子κBp65蛋白的表达及相关性研究

目的:研究卵巢上皮性癌组织中Raf激酶抑制蛋白(RKIP),核因子κBp65蛋白(NF-κBp65)的表达,探讨两者在卵巢上皮性癌侵袭转移中的作用和机制,分析RKIP表达水平改变对卵巢上皮性癌侵袭能力和NF-κB信号通路活性的影响。方法:应用免疫组织化学染色方法检测76例卵巢上皮性癌组织、35例良性卵巢上皮性肿瘤组织、22例正常卵巢组织中RKIP和NF-κBp65蛋白的表达,并分析不同卵巢组织临床及病理因素之间的关系。结果:卵巢上皮性癌组织中RKIP的表达低于良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织,而NF-κBp65的表达高于良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织,差异有高度统计学意义(P<0.01);RKIP和NF-κBp65在卵巢上皮性癌中的表达均与肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05);卵巢上皮性癌组织中RKIP与NF-κBp65的表达呈负相关(r=-0.582,P<0.01)。结论:RKIP表达的减少或缺失与卵巢上皮性癌的发生、发展密切相关,可能通过上调NF-κBp65的表达促进卵巢上皮性癌的侵袭和转移,其机制可能与活化NF-κB信号通路有关。

Toll样受体4及核因子-κBp65在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的:探讨Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、核因子-κBp65(nuclear factor-kappaB,NF-κBp65)在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病损形成及发展中的作用。方法:采用SP免疫组化方法检测35例OLP及10例正常口腔黏膜中TLR4、NF-κBp65的表达情况,分析两者的相关性及其与OLP临床病理特征的关系。结果:OLP病损组织中TLR4、NF-κBp65的阳性率分别为66%(23/35)、89%(31/35),在正常黏膜组分别为30%(3/10)和40%(4/10),组间比较P<0.05。TLR4和NF-κBp65在OLP病损组织中的表达为正相关关系(P<0.05)。NF-κBp65在网纹型OLP中的表达水平明显高于在萎缩-糜烂型OLP中的表达(P<0.05)。结论:TLR4和NF-κBp65在OLP病损形成中有重要意义。

PAMD对MCAO局灶性脑缺血模型大鼠脑皮质NF-κBp65蛋白表达的影响

目的:观察PAMD(蝙蝠葛酚性碱)对局灶性脑缺血Wistar大鼠神经系统受损后的保护作用,并研究PAMD作用的机制。方法:采用线栓法阻断大鼠右侧的大脑中动脉(MCAO),复制局灶性脑缺血实验动物模型,观察PAMD对大鼠脑缺血后不同时间段相关蛋白NF-κBp65表达的影响,以此探讨PAMD对脑缺血的神经保护作用机制。结果:PAMD能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质NF-κBp65蛋白表达的情况。结论:PAMD对大鼠局灶性脑缺血受损组织具有一定的保护作用,据推断PAMD保护机制可能与PAMD影响抑制炎症反应相关蛋白NF-κBp65的表达有关。

磷酸化AKT、NF-κBp65在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

目的:检测磷酸化AKT(P-AKT)和核转录因子(NF-κBp65)在上皮性卵巢癌中的表达并探讨它们与临床病理参数及与预后的关系。方法:用免疫组化SP法检测115例卵巢标本包括68例卵巢癌、12例卵巢交界性肿瘤、24例卵巢良性肿瘤、11例正常卵巢组织中P-AKT、NF-κBp65蛋白的表达,随访卵巢癌患者的时间为7～60个月。结果: P-AKT蛋白在卵巢癌、卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织(对照组)中阳性表达率分别为52．9%(36/68)、16．7%(2/12)、12．5%(3/24)、9．1%(1/11),卵巢癌P-AKT蛋白阳性表达率显著高于卵巢正常组织(X^2=7．312,P＜0．01),卵巢良性肿瘤及卵巢交界性肿瘤与正常组织间差异无统计学意义。NF-κBp65在4组中的阳性表达率依次为75%(51/68)、41．7%(5/12)、20．8%(5/24),27．2%(3/11),卵巢癌中NF-κBp65蛋白阳性表达率显著高于卵巢正常组织,差异有统计学意义(X^2=7．886,P＜0．01),卵巢良性肿瘤及卵巢交界性肿瘤与正常组织间差异无统计学意义。P-AKT、NF-κBp65蛋白在组织分化较差(X^2=6．136,P＜0．05;X^2=7．936,P＜0．01)和FIGO分期较晚(X^2=8．500,P＜0．01;X^2=9．490,P＜0．01)的卵巢癌中均有较高表达,淋巴结转移阳性的卵巢癌中P- AKT表达水平高于无淋巴结转移者(X^2=6．061,P＜0．05)。卵巢癌组织中P-AKT与NF-κBp65表达呈正相关(phi系数=0．272,P＜0．05)。P-AKT、NF-κBp65蛋白表达与卵巢癌患者生存率呈负相关,多因素Cox回归分析显示,P-AKT、NF-κBp65蛋白不是影响卵巢癌预后的独立危险因素。结论:P-AKT、NF-κBp65蛋白在卵巢癌组织中过表达,与卵巢癌的发生发展有关。P-AKT可能通过作用于其下游分子NF-κBp65促进卵巢癌细胞的恶性转化。P-AKT、NF-κB蛋白可作为判断卵巢癌预后的参考指标。

卡铂治疗视网膜母细胞瘤的效果及对患者VEGF和NF-κBP65表达的影响

目的探讨视网膜母细胞瘤(RB)患者应用卡铂治疗的效果及对患者血管内皮生长因子(VEGF)和细胞核因子NF-κBP65表达的影响。方法选取我院收治的RB患者68例(68只眼),随机分为两组,对照组应用贝伐单抗治疗,研究组联合应用卡铂治疗,对比两组患者的治疗效果及VEGF和NF-κBP65的表达。结果治疗前两组患者的瘤体最大径以及瘤体厚度无明显差异(P>0.05),治疗后研究组显著低于对照组(P<0.05);研究组患者球结膜充血、恶心呕吐、腹泻以及白细胞数量下降等不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05);治疗前两组患者的视力无明显差异(P>0.05),治疗后研究组显著高于对照组(P<0.05);治疗前两组患者VEGF和NF-κBP65的表达无明显差异(P>0.05),治疗后研究组显著低于对照组(P<0.05)。结论 RB患者应用卡铂治疗有利于改善视力,降低不良反应发生率,抑制VEGF和NF-κBP65表达。

土茯苓萆薢方联合美洛昔康片对急性痛风性关节炎患者IL-1β及NF-κBp65表达的影响

目的:观察土茯苓萆薢方联合美洛昔康片对急性痛风性关节炎患者白细胞介素-1β(IL-1β)和核转录因子-κBp65(NF-κBp65)表达的影响。方法:选取80例急性痛风性关节炎患者作为研究对象,随机分为观察组和对照组各40例。对照组给予美洛昔康片治疗,观察组在对照组用药基础上加用土茯苓萆薢方治疗,观察2组临床疗效及治疗前后IL-1β和NF-κBp65的表达情况。结果:总有效率观察组为97.50%,高于对照组的85.00%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组IL-1β和NF-κBp65值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组IL-1β和NF-κBp65值均较治疗前降低(P<0.05),观察组的IL-1β和NF-κBp65值均低于对照组(P<0.05)。结论:土茯苓萆薢方联合美洛昔康片治疗急性痛风性关节炎疗效显著,能显著抑制IL-1β、NK-κBp65表达。

银杏叶提取物对大鼠实验性结肠炎肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察银杏叶提取物对三硝基苯磺酸灌肠诱导大鼠实验性结肠炎肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响及其作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组、三硝基苯磺酸模型组、阳性药物对照组、EGB组4组。用三硝基苯磺酸灌肠诱导大鼠实验性结肠炎,评估结肠组织大体形态和组织学评分;生化法检测大鼠肠组织谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及一氧化氮(NO)含量;免疫组化检测肠组织TNF-α,核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠组织诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达。结果EGB组大体形态和组织学评分较模型组明显下降,GSH-Px活性明显增高,NO含量明显减少,结肠黏膜TNF-α,NF-KBp65和iNOS表达明显降低。结论EGB可能通过抑制TNF-α的表达和NF-κBp65及iNOS的激活从而抑制炎症级联来保护TNBS诱导的实验性结肠炎。

核因子-κB对ApoE^(-/-)小鼠肾动脉粥样硬化斑块破裂肾损害的实验研究

目的探讨核转录因子-κB(NF-κBp65)在ApoE-/-小鼠肾动脉粥样硬化斑块破裂肾损害发生中的作用及其对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达和单核巨噬细胞浸润的影响。方法采用ApoE-/-小鼠制作动脉粥样硬化性肾动脉狭窄动物模型。选择肾动脉粥样硬化斑块造成肾动脉狭窄程度小于50%的ApoE-/-小鼠,按斑块分为:破裂组和未破裂组;选择同条件喂养的C57BL/6J野生型小鼠为对照组。取各组肾动脉及肾脏:采用免疫印迹(Western blot)法检测NF-κBp65及ICAM-1表达;采用免疫组化法检测单核巨噬细胞(F4/80)表达。结果(1)无论在血液、肾动脉及肾脏组织中,NF-κBp65在破裂组明显高于未破裂组(P<0.05),而未破裂组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(2)ICAM-1、F4/80的表达变化与NF-κBp65的趋势相同。结论肾动脉粥样硬化斑块发生破裂,首先是动脉炎症引起,继而波及到下游的肾脏发生炎症性损害。NF-κB的活化在其中占有重要地位。

当归补血汤对ox—LDL激活RAW264.7细胞核转录因子.KBp65蛋白表达的影响

目的通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理。方法新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清组,分别灌胃生理盐水和当归补血汤药液制备血清。将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24 h,分为空白对照组、ox-LDL组、抑制剂组、含药血清组,除空白对照组外其余各组均加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞。孵育4 h,收集细胞。免疫组化法检测NF-κBp65的表达,免疫印迹法检测RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白活化量。结果ox- LDL组细胞浆和核内可见大量棕黄色阳性颗粒,含药血清组棕黄色阳性颗粒较少;ox-国LDL组蛋白条带灰度比值为1.288 3±0.013 9,含药血清组为0.918 9±0.015 3,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论当归补血汤可下调经ox-LDL刺激后RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白表达及活化,因此阻断NF-κB信号转导通路可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机理之一。

梓醇对脑缺血急性期及亚急性期的神经保护作用及作用机制

目的：探讨梓醇对永久性脑缺血模型急性期脑组织梗死体积、含水量及亚急性期炎性反应的影响。方法：采用化学刺激法建立局灶性脑缺血（MCAT）模型，检测急性期（24 h）神经行为学症状、脑梗死面积和脑含水量；线栓法制作永久性大鼠脑缺血（pMCAO）模型，酶联免疫吸附法（ELISA）测定缺血侧脑组织白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）和核转录因子Bp65（NF-κBp65）的含量。结果：大鼠MCAT后24 h，梓醇15-60 mg＆#183;kg-1剂量组可以显著改善模型动物神经症状损伤（P〈0.01或P〈0.001），梓醇15 mg＆#183;kg-1组可显著降低模型动物梗塞区面积（P〈0.05），30 mg＆#183;kg-1组和60 mg＆#183;kg-1组可显著降低脑水肿（P〈0.05）；大鼠pMCAO术后7天开始，梓醇30 mg＆#183;kg-1组或60 mg＆#183;kg-1组开始改善模型动物神经症状损伤；术后14天，与假手术组比较，缺血侧脑组织IL-10和核转录因子NF-κBp65的含量变化与模型组已经不明显，IL-6水平显著降低（P〈0.05），梓醇15 mg＆#183;kg-1灌胃14天可以降低模型动物缺血侧脑组织NF-κBp65含量（P〈0.05）。结论：梓醇能改善局灶性脑缺血模型动物急性期及亚急性期神经症状损伤，缩小梗死灶，减轻脑部水肿，其作用可能与抑制脑缺血引起的炎症损伤无关。

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤NF—κBp65和TLR4表达变化探讨

目的探讨核转录因子KBp65（nuclear factor—kappa Bp65，NF-κBp65）和Toll样受体4（Toll—like receptor4，TLR4）在新生大鼠脑组织中的表达及其变化规律及相关性，研究两者在新生儿缺氧缺血性脑损伤发病机制中的作用。方法出生7d新生大鼠随机数字表法分对照组和缺氧缺血组，制备新生儿缺氧缺血性脑损伤模型，并于缺氧缺血术后6h、12h、24h、72h及7d取其脑组织制备光镜石蜡标本，观察脑组织的病理变化。采用免疫组织化学方法分析NF—κBp65和TLR4的表达。结果新生大鼠缺氧缺血性脑损伤过程中，NF—κBp65和TLR4在神经元、小胶质细胞均有表达，以大脑皮质和海马部位表达变化明显；于缺氧缺血后6hNF—κB065（0．2193±0.0247，Q2157±0.0304）和TLR4（0.3271±0.0333，0.3039±0.0379）表达增加，24hNF—κBp65（0．3564±0．0235，0．3365±0．0232）和TLR4（0．4342±0．0428，0．4193±0．0413）表达达到峰值，72hNF—κBp65（0．2892±0．0320，0．2609±0．0212）和TLR4（0．3005±0．0209。0．2820±0．0226）和7dNF—κBp65（0．2479±0．0340，0．2421±0.0254）和TLR4（0．2744±0.0288，0.2571±0.0275）表达下降。结论NF—κBp65与TLR4表达呈正相关，提示可能在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中有相同机制。

荔枝核总黄酮对两种肝纤维化大鼠模型的作用比较

目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对四氯化碳(CCl 4)诱导肝纤维化大鼠和胆管结扎(BDL)肝纤维化大鼠的作用及其机制。方法大鼠40只,随机分正常对照组、CCl 4模型对照组、CCl 4+TFL组、BDL模型对照组、BDL+TFL组,每组8只。采用40%CCl 4诱导建立肝纤维化大鼠模型,双重胆管结扎法复制BDL模型。CCl 4+TFL组和BDL+TFL组灌胃给予TFL(300 mg·kg^-1·d^-1),正常对照组、CCl 4组和BDL组灌胃0.9%氯化钠溶液(300 mg·kg^-1·d^-1)。检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BiL)。Sirius red染色测算胶原面积;免疫组织化学法检测抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CollagenⅠ在肝脏组织中的表达;Western blotting法检测α-SMA、核因子-κB(NF-κB)p65、环氧化酶2(COX-2)蛋白的表达。结果TFL降低CCl 4模型AST的作用强于BDL模型(P<0.05),而降低T-BiL、脾指数、肝脏α-SMA蛋白表达等的作用弱于BDL模型(P<0.05),均可明显降低两种模型大鼠ALT、ALP、肝纤维化的胶原面积、NF-κBp65与COX-2蛋白在肝脏中的表达(均P<0.05)。结论TFL对CCl 4和BDL两种模型的肝纤维化大鼠均有较好的改善肝纤维化作用,机制可能与调节炎症因子NF-κBp65、COX-2等的表达有关。

Notch1信号激活核因子κB(NF-κB)参与小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症介质释放

目的观察Notch1信号在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症介质表达中的作用并探讨其作用机制。方法给予100 ng/m L LPS处理小鼠RAW264.7细胞8 h,反转录PCR观察RAW264.7细胞Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes1)mRNA表达;LPS处理前给予Notch1信号抑制剂10μmol/L(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)预处理1 h,ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)含量,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环加氧酶2(COX-2)mRNA水平,Western blot法检测iNOS、COX-2、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化的核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白水平。结果 LPS刺激RAW264.7细胞后明显提高细胞Notch1和Hes1 mRNA水平,DAPT明显抑制LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和PGE2的表达。DAPT阻断Notch1信号后明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的iNOS和COX-2 mRNA和蛋白水平,DAPT能够抑制LPS诱导的IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位。结论 Notch1通过激活NF-κB参与LPS诱导巨噬细胞炎症介质释放。

红金消结胶囊联合米非司酮治疗子宫肌瘤的疗效及对血清Ang-2、EGF、NF-κBp65水平的影响

目的:探讨红金消结胶囊联合米非司酮治疗子宫肌瘤的疗效及对血清血管生成素-2(Ang-2)、表皮生长因子(EGF)、核因子-κBp65(NF-κBp65)水平的影响。方法:选择我院2017年5月至2018年5月接诊的103例子宫肌瘤患者,通过随机数表法将其分为观察组53例和对照组50例。对照组给予米非司酮治疗,观察组在对照组基础上联合红金消结胶囊治疗,两组患者在月经期间停药,均连续治疗3个月。比较两组的临床疗效、治疗前后血清Ang-2、EGF、NF-κBp65、卵泡雌激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平、子宫体积与瘤体情况的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率为94.34%,显著高于对照组78%,P<0.05),血清Ang-2、EGF、NF-κBp65、FSH、LH、E2水平均显著低于对照组(P<0.05),子宫体积和子宫肌瘤体积均小于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红金消结胶囊联合米非司酮治疗子宫肌瘤的临床疗效显著优于单用米非司酮治疗,其可更显著改善患者性激素水平,缩小子宫和子宫肌瘤的体积,这可能与降低血清Ang-2、EGF、NF-κBp65水平有关。

高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶对波形蛋白表达的调控作用

目的:探讨高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)对波形蛋白(Vimentin)表达的调控作用,阐明糖尿病并发肾脏炎症纤维化的形成机制。方法:取患严重自发性糖尿病的C57/BL6小鼠肾脏,以野生型C57/L86小鼠作为对照组,行病理切片和组织荧光染色,应用免疫共聚焦方法检测肾小球系膜细胞中内源性Nampt和Vimentin表达及定位;肾小球膜HBZY-1细胞随机分为4组,即0.56mmol·L^(-1)低浓度葡萄糖(LG)对照组、200mmol·L^(-1)高浓度葡萄糖(HG)处理组、HG+FK866组和HG+NMN组;高浓度葡萄糖干预5d后,分别施加FK866(10μmol·L^(-1))和NMN(1 mmol·L^(-1))作用24h后,通过免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内源性Nampt、Vimentin、核因子κB p65(NF-κBp65)和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶1(Sirt1)表达水平;应用RT-PCR和免疫印迹等方法检测细胞Nampt和Vimentin表达水平。结果:与野生型C57/BL6小鼠组比较,严重糖尿病组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Vimentin表达水平随内源性Nampt表达水平升高而增加(P<0.01);与0.56mmol·L^(-1)低浓度葡萄糖对照组比较,高浓度葡萄糖冲击细胞Nampt、NF-κBp65和Vimentin表达水平明显升高(P<0.01),Sirt1表达水平明显降低(P<0.01)。HG+FK866和HG+NMN组肾小球系膜细胞中Nampt、Vimentin和NF-κBp65表达水平均较对照组明显降低(P<0.01)。结论:高浓度葡萄糖冲击条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性Nampt能够通过NF-κBp65和Sirt1信号通路促进Vimentin表达。

人乳头状瘤病毒18型E6蛋白的信号转导初探

目的探讨人乳头状瘤病毒18型E6蛋白（HPV18E6）与信号转导和转录激活因子1（STAT1）、蛋白激酶R（PKR）／真核细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、核因子-κBp65（NF—κBp65）、丝裂酶原激活的蛋白激酶（MAPK）／c—Jun氨基末端激酶（JNκ）信号转导的关系以及可能的分子机制。方法构建靶向HPV18E6癌基因及无关序列（NC序列）的短发夹结构RNA（shRNA）干扰序列的慢病毒载体（HPV18E6-RNAi-LV，NC-GFP—LV），转染宫颈癌HeLa细胞，在沉默HPV18E6癌基因表达的基础上，以RT-PCR、Westernblot法分别在核酸、蛋白水平（包括磷酸化型）检测各组HPV18E6、STAT1、PKR、eIF2α、NF—κBp65、MAPK、JNK的表达，以transwell侵袭试验及MTr法检测各组HeLa细胞侵袭能力及对卡铂敏感性的差异。结果HPV18E6癌基因的表达水平能影响NF-κBp65、PκR基因的核酸及蛋白表达水平，并影响磷酸化蛋白p-STAT1、P—PκR、P-eIF2α的磷酸化水平；HPV18E6-RNAi-LV转染组细胞侵袭抑制率及对卡铂的敏感程度明显高于其他组（P〈0．05或P〈0．01）。结论HPV18E6通过降低PκR表达，并使p-STAT1、p-PκR、P-eIF2α去磷酸化的方式抑制PκR／eIF2α信号传导通路激活，维持HeLa细胞增殖活性及侵袭能力，也可抑制凋亡。HPV18E6与MAPK／JNK信号转导关系尚不明确。