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Recent advances and perspectives of nucleic acid detection for coronavirus 被引量:31
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作者 Minzhe Shen Ying Zhou +4 位作者 Jiawei Ye Abdu Ahmed Abdullah AL-maskri Yu Kang Su Zeng Sheng Cai 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS CSCD 2020年第2期97-101,共5页
The recent pneumonia outbreak caused by a novel coronavirus(SARS-CoV-2)is posing a great threat to global public health.Therefore,rapid and accurate identification of pathogenic viruses plays a vital role in selecting... The recent pneumonia outbreak caused by a novel coronavirus(SARS-CoV-2)is posing a great threat to global public health.Therefore,rapid and accurate identification of pathogenic viruses plays a vital role in selecting appropriate treatments,saving people's lives and preventing epidemics.It is important to establish a quick standard diagnostic test for the detection of the infectious disease(COVID-19)to prevent subsequent secondary spread.Polymerase chain reaction(PCR)is regarded as a gold standard test for the molecular diagnosis of viral and bacterial infections with high sensitivity and specificity.Isothermal nucleic acid amplification is considered to be a highly promising candidate method due to its fundamental advantage in quick procedure time at constant temperature without thermocycler opera-tion.A variety of improved or new approaches also have been developed.This review summarizes the currently available detection methods for coronavirus nucleic acid.It is anticipated that this will assist researchers and clinicians in developing better techniques for timely and effective detection of coro-navirus infection. 展开更多
关键词 CORONAVIRUS nucleic acid detection PCR-Based methodS Isothermal nucleic acid amplification-based methodS Microarray-based methodS
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不同核酸提取方法对HBV-DNA检测性能验证情况分析 被引量:1
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作者 周文娟 林真 徐建萍 《现代医药卫生》 2024年第4期575-580,共6页
目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、... 目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、正确度、线性范围、检出限及抗干扰能力等性能进行验证和评价。结果达安全自动核酸提取仪提取达安试剂检测、手工提取达安试剂检测和手工提取圣湘试剂检测在精密度、正确度、线性范围、检出限方面验证结果均达标;达安全自动核酸提取仪提取圣湘试剂检测在低值检测中变异系数大于5%,最低检测限验证不合格;抗干扰能力方面,全自动核酸提取仪提取的2.0 g/dL血红蛋白浓度的样本用达安和圣湘试剂检测结果均不受影响。手工提取甘油三酯浓度达3000 mg/dL的样本用达安和圣湘试剂检测的结果均不受影响。结论不同厂家的提取和检测试剂避免混用,达安和圣湘试剂对HBV-DNA定量检测的结果均符合要求。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒-DNA定量检测 全自动核酸提取仪法 手工提取法 性能验证
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核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响
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作者 李泰 朱英才 +5 位作者 骆璐 彭强 凌洪权 廖星杰 王钦 张承双 《粮食与饲料工业》 CAS 2024年第1期70-71,共2页
实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实... 实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。 展开更多
关键词 荧光PCR法 牛羊源性成分 检测分析 核酸提取试剂盒
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一步法在泌尿生殖系统感染病原体核酸检测中的临床应用评价 被引量:1
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作者 黄国妮 颜申姬 +1 位作者 程静 谢闰萍 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第2期203-206,215,共5页
目的 探讨一步法用于泌尿生殖系统感染病原体核酸检测的可行性,为一步法实现广泛的临床应用提供实验基础。方法 采集2021年3月至2021年8月期间到深圳市宝安区人民医院就诊的200例泌尿生殖道感染患者分泌物,分别用一步法和传统煮沸法进... 目的 探讨一步法用于泌尿生殖系统感染病原体核酸检测的可行性,为一步法实现广泛的临床应用提供实验基础。方法 采集2021年3月至2021年8月期间到深圳市宝安区人民医院就诊的200例泌尿生殖道感染患者分泌物,分别用一步法和传统煮沸法进行核酸提取,比较两种提取方法的结果一致性、灵敏度、抗干扰能力和重复性。结果 一步法与煮沸法的提取阳性率一致性Kappa值为0.949,一致性较高;对选取的阳性样本两种提取方法最高可检测出1∶100 000的稀释浓度;抗干扰实验干扰偏移均在10%以内;重复性实验显示两种提取方法的CV值均在5%以内。结论 两种提取方法比较差异无统计学意义,一步法操作简单快速,降低污染风险,具有非常好的临床应用价值。 展开更多
关键词 一步法 泌尿生殖道感染 聚合酶链式反应 核酸提取
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荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的临床应用价值评估
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作者 倪萍 徐娟 +4 位作者 胡海涛 彭海林 李旺 周成林 董苏荣 《临床检验杂志》 CAS 2024年第9期641-647,共7页
目的评估荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的准确性及临床应用价值。方法纳入460例疑似或确诊为呼吸道真菌感染患者为研究对象,以荧光定量PCR熔解曲线法作为考核方法,以真菌26S rRNA基因核酸测定试剂盒联合Sanger测序法作为参考方法,... 目的评估荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的准确性及临床应用价值。方法纳入460例疑似或确诊为呼吸道真菌感染患者为研究对象,以荧光定量PCR熔解曲线法作为考核方法,以真菌26S rRNA基因核酸测定试剂盒联合Sanger测序法作为参考方法,采集各研究对象痰液样本并同步使用考核方法、参考方法检测,计算两种方法的Kappa值以评价结果的一致性。结果以参考方法为对照,考核方法检测结果总符合率为92.83%(427/460);此外,与参考方法相比,考核方法检测8种真菌(白念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌、季也蒙念珠菌、曲霉菌)的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为97.34%(183/188)、97.06%(264/272)、97.17%(447/460);100.00%(33/33)、99.77%(426/427)、99.78%(459/460);100.00%(16/16)、99.55%(442/444)、99.57%(458/460);98.11%(52/53)、99.75%(442/444)、99.57%(458/460);95.08%(58/61)、99.50%(397/399)、98.91%(455/460);100.00%(9/9)、99.56%(449/451)、99.57%(458/460);85.00%(17/20)、99.32%(437/440)、98.70%(454/460);97.59%(81/83)、97.88%(369/377)、97.83%(450/460);两种方法检测结果一致性评价的Kappa值均大于0.8。对两种方法不一致结果进行复核检测,结果发现有53.7%(22/41)的检测结果与考核方法一致,有46.3%(19/41)的检测结果与参考方法一致。结论使用荧光定量PCR熔解曲线法能同时检测8种真菌,且检测结果与参考方法高度一致,在真菌检测中具有独特优势,且有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 真菌核酸检测 念珠菌鉴定 熔解曲线法
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干斑法保存血浆中HBV、HCV、HIV病毒核酸及其保存效期研究
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作者 张菁 邵春燕 +3 位作者 任苓苓 高玲玲 王明慧 骆群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1869-1874,共6页
目的:建立一种以干斑法为基础制作的血液采集卡保存血浆中病毒核酸的方法,通过建立阿伦尼乌斯方程,预测该种保存方法保存核酸的效期,并论证该种保存方法在血站留存血液样本进行核酸复测的可行性。方法:分别将HBV、HCV、HIV核酸阳性的血... 目的:建立一种以干斑法为基础制作的血液采集卡保存血浆中病毒核酸的方法,通过建立阿伦尼乌斯方程,预测该种保存方法保存核酸的效期,并论证该种保存方法在血站留存血液样本进行核酸复测的可行性。方法:分别将HBV、HCV、HIV核酸阳性的血浆样本制备成保存卡,以干浆斑的形式进行保存;将制备的保存卡分别放置于37、45、50和55℃条件下进行加速保存实验,不定期取出各个温度条件下的保存卡片,进行核酸提取操作,纯化出待测核酸样本,进行后续PCR测试,并记录CT值;根据阿伦尼乌斯方程建立起失效时间与储存温度之间的模型,进而推测出血液采集卡在规定保存温度条件下保存核酸的有效期。结果:HBV、HCV、HIV 3种核酸阳性的血浆样本,在使用干斑法保存时,其保存效期与温度的回归方程分别为:y=-11546x+31.74、y=-12949x+36.88、y=-12204x+34.48,线性回归的相关系数r均>0.98。预测HBV、HCV和HIV 3种病毒核酸使用干斑法保存时,在4℃的保存温度下,其保存效期分别为20792、19289和14285 d;在20℃的保存温度下,保存效期分别为2135、1502和1289 d。结论:血液样本中常见的3种病毒核酸,使用干斑法保存时,在加速破坏实验中符合一级反应模式,核酸降解速度与保存的绝对温度之间的关系符合阿伦尼乌斯方程。经过该方程的推算,使用干斑法保存血浆核酸样本,在不高于20℃的保存条件下,核酸稳定性效期最低可达3.5年,基本可满足血站血液样本留样保存年限的要求。 展开更多
关键词 干斑法 阿伦尼乌斯方程 血液采集卡 核酸 稳定性
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奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估
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作者 胡秀花 王子华 +5 位作者 黄鹏成 刘园园 毛君杰 王桂琴 马翀 王少林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期61-69,共9页
为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧... 为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 细菌分离培养 16S rRNA基因扩增子测序 药物敏感性试验
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细胞外囊泡分析方法
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作者 杨立敏 李景虹 《生物医学工程研究》 2024年第1期1-8,I0001,共9页
细胞外囊泡携带核酸、蛋白质和脂质等生物分子,在细胞间通讯中发挥着重要作用,与多种疾病的发生与发展密切相关。细胞外囊泡广泛分布于大多数体液中,是液体活检的有效生物标志物之一,可用于非侵入性疾病早期诊断和疗效监测。因此,细胞... 细胞外囊泡携带核酸、蛋白质和脂质等生物分子,在细胞间通讯中发挥着重要作用,与多种疾病的发生与发展密切相关。细胞外囊泡广泛分布于大多数体液中,是液体活检的有效生物标志物之一,可用于非侵入性疾病早期诊断和疗效监测。因此,细胞外囊泡及其携带生物分子(蛋白质、核酸)的分析与研究受到了广泛关注。研究者们基于抗体或核酸适配体特异性识别细胞外囊泡表面蛋白质,提出了多种策略用于细胞外囊泡及其表面蛋白质的高灵敏、高特异性检测。采用直接递送或膜融合方式将传感探针输送至细胞外囊泡内部,可实现细胞外囊泡内部核酸的原位、准确检测。本文综述了细胞外囊泡及其携带生物分子检测方法的最新进展,并展望了该领域未来的发展方向。 展开更多
关键词 细胞外囊泡 蛋白质 核酸 生物传感方法 抗体 核酸适配体
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星点设计-效应面法优化阳离子纳米乳递送系统的处方工艺研究
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作者 张丽丹 唐永瑜 +4 位作者 汪巳卜 陈英 吴兴杰 沈祥春 陶玲 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第4期529-538,共10页
目的采用单因素试验和星点设计-效应面法优化阳离子纳米乳(CNE)的处方工艺,并对其药剂学性能进行评价。方法以平均粒径(D_(50))、粒径范围、离心稳定性常数(Ke)和电位为评价指标,单因素试验筛选CNE的油相种类、乳化剂种类及用量、甘油... 目的采用单因素试验和星点设计-效应面法优化阳离子纳米乳(CNE)的处方工艺,并对其药剂学性能进行评价。方法以平均粒径(D_(50))、粒径范围、离心稳定性常数(Ke)和电位为评价指标,单因素试验筛选CNE的油相种类、乳化剂种类及用量、甘油及十八胺用量、剪切时间,高压均质压力及时间,星点设计效应面法考察均质压力和时间对CNE的影响,用二项式及多元线性回归模型拟合建立指标与因素之间的关系,效应面法获取最佳处方。结果CNE最佳处方组成为中链脂肪酸甘油三酯(MCT)0.5 g,大豆卵磷脂1 g,十八胺53.90 mg,甘油0.8 g,其余为水相;最佳处方所得CNE外观基本圆整,澄清透明,D_(50)为(135.08±5.69)nm,Zeta电位为(43.57±2.51)mV,离心、稀释、时间稳定性均良好。结论优化得到的CNE为淡蓝色均一乳状液、稳定性良好粒径合适,可为核酸药物递送系统的开发提供参考。 展开更多
关键词 阳离子纳米乳 十八胺 核酸药物 心血管疾病 单因素试验 星点设计-效应面法
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不同的核酸提取方法在布鲁氏菌检测中的应用评价
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作者 常秀琴 郝梦 +2 位作者 徐珂 海晓梅 白小成 《宁夏医学杂志》 CAS 2024年第7期614-617,共4页
目的比较不同核酸提取方法对布鲁氏菌检出率的影响,为布鲁氏菌核酸快速提取检测提供技术参考。方法分别使用磁珠法、直接裂解法和高温裂解法对感染布鲁氏菌患者的20例全血样本、10例关节腔及浆膜腔积液样本进行核酸提取,然后进行实时荧... 目的比较不同核酸提取方法对布鲁氏菌检出率的影响,为布鲁氏菌核酸快速提取检测提供技术参考。方法分别使用磁珠法、直接裂解法和高温裂解法对感染布鲁氏菌患者的20例全血样本、10例关节腔及浆膜腔积液样本进行核酸提取,然后进行实时荧光RT-PCR检测,采用SPSS 22.0对结果进行统计分析,评价该核酸快速提取试剂的DNA提取效率。结果磁珠法阳性检出率为100%,Ct值中位数为29.17(21.19~31.33),批内变异系数(CV)最高为1.33%。直接裂解法阳性检出率为63.33%,Ct值中位数为33.29(28.69~34.54),批内CV最高为1.28%。高温裂解法阳性检出率为100%,Ct值中位数为30.26(26.63~33.85),批内CV最高为1.21%。高温裂解法和磁珠法检出率比较差异无统计学意义(P>0.05),直接裂解法检出率显著低于磁珠法和高温裂解法(P<0.05)。结论核酸快速提取试剂在高温裂解条件下可保证核酸提取效率和重复性稳定,具有操作简单、检测时间短、降低实验室生物安全风险等优势,可以应用于布鲁氏菌的核酸检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 核酸快速提取 磁珠法 实时荧光RT-PCR
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基于微通道多向阀自动化快速提取DNA的研究
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作者 高英俊 付立申 +1 位作者 徐晓龙 吴文明 《五邑大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第3期7-12,共6页
核酸的高效分离与纯化对于下游分子诊断具有至关重要的影响.本研究基于磁珠法提取原理设计出快速、自动化核酸提取系统,利用步进电机和注射泵组成的移液装置通过微通道连接多向电磁阀完成核酸裂解、洗涤、洗脱、纯化,通过大鼠主动脉内... 核酸的高效分离与纯化对于下游分子诊断具有至关重要的影响.本研究基于磁珠法提取原理设计出快速、自动化核酸提取系统,利用步进电机和注射泵组成的移液装置通过微通道连接多向电磁阀完成核酸裂解、洗涤、洗脱、纯化,通过大鼠主动脉内皮细胞进行核酸提取和扩增,对核酸加热裂解时间进行优化.结果表明,当裂解时间大于4 min时,核酸纯化效果最好,磁珠回收率可达96.5%,紫外吸收光比值大于1.8,同时整个自动化提取仅需8 min.通过微通道多向阀与核酸提取技术纯化后的核酸可直接用于扩增实验,且与手动提取相比聚合酶链式反应的Ct值起跳更早,有利于后续集成核酸检测一体化系统. 展开更多
关键词 样品预处理 核酸提取 微通道 磁珠法
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罗定地区呼吸道病原体核酸检测在小儿呼吸道疾病诊断中的价值
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作者 莫家金 林小玲 《中国医药科学》 2024年第18期81-84,共4页
目的探讨广东罗定地区近年小儿呼吸道急性感染病原体的流行特征,为小儿呼吸道感染的防治和抗生素的合理应用提供指导数据。方法选取2021年7月至2023年6月在罗定市人民医院儿科住院诊治的急性呼吸道感染患儿1603例,采集小儿咽/鼻咽拭子标... 目的探讨广东罗定地区近年小儿呼吸道急性感染病原体的流行特征,为小儿呼吸道感染的防治和抗生素的合理应用提供指导数据。方法选取2021年7月至2023年6月在罗定市人民医院儿科住院诊治的急性呼吸道感染患儿1603例,采集小儿咽/鼻咽拭子标本,采用多重扩增核酸检测法对样本进行15种常见呼吸道病原体检测,分析各种病原体在小儿不同年龄段、不同季节的分布情况。结果所检病原体总阳性率为74.6%(1196/1603),单一感染率为35.4%,混合感染率为39.2%。不同年龄段:阳性检出率由高到低依次为幼儿组(30.3%)、婴儿组(21.8%)、学龄前儿童组(17.6%)、小学儿童组(5.0%),各组间阳性率互相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同季节:阳性检出率夏春季最高(分别占25.3%和20.5%),各季节感染情况不同,各季节阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同季节流行的病原体不同,春季以卡他莫拉菌(MC)、鼻病毒(HRV)、流感嗜血杆菌(Hi)流行为主;夏季以呼吸道合胞病毒(RSV)、巨细胞病毒(CMV)流行为主;秋季以RSV、MC流行为主;MC、流感病毒B型(INF-B)在冬季最流行。结论小儿呼吸道感染在本地区全年呈散发流行,以MC、CMV和RSV感染最为常见,夏春季是高发季。值得临床诊疗重视的是低年龄更容易发病,且混合感染在低年龄组中占比较高。通过核酸联检的方式,可以快速、准确地明确患儿的病原体,为临床诊治提供参考。 展开更多
关键词 呼吸道感染 病原体 核酸 多重扩增法
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化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值
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作者 杨华荣 《四川生理科学杂志》 2024年第9期2060-2062,共3页
目的:探讨化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值。方法:选取2020年12月31日至2023年12月31日期间于本院就诊的疑似乙肝患者60例作为研究对象。所有研究对象入院后均采用化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒进行检测。... 目的:探讨化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值。方法:选取2020年12月31日至2023年12月31日期间于本院就诊的疑似乙肝患者60例作为研究对象。所有研究对象入院后均采用化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒进行检测。以肝脏穿刺活检结果为“金标准”,比较化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒单独、联合诊断结果、诊断效能。结果:经肝脏穿刺活检结果显示,60例疑似乙肝人群中阳性35例,阴性25例。经化学发光法检查显示,阳性25例。经核酸检测法检查显示,阳性24例。经联合诊断结果显示,阳性34例。化学发光法与核酸检测法联合诊断灵敏度为88.57%、准确度为88.33%,显著高于单独化学发光法检查(灵敏度为65.71%、准确度为76.67%)及核酸检测法(灵敏度为60.00%、准确度为71.67%),联合检测的漏诊率为11.43%,显著低于化学发光法检查的34.29%及核酸检测法检查的40.00%(P<0.05)。结论:化学发光法联合核酸检测法可提高疑似乙肝人群血液标本乙肝病毒诊断准确率。 展开更多
关键词 乙肝 乙肝病毒 化学发光法 核酸检测法 诊断价值
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多温区恒等温快速核酸检测仪温度校准方法研究
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作者 成华 祝天宇 《计量与测试技术》 2024年第1期112-115,共4页
恒等温扩增技术无需反复升降温和循环,能提高核酸扩增和检测的速度,被广泛应用于核酸POCT设备中。本文针对多温区恒等温快速核酸检测仪的结构、控温原理及关键点,对多温区快速核酸检测仪的温度偏差、升温速率、温度波动度和温度持续时... 恒等温扩增技术无需反复升降温和循环,能提高核酸扩增和检测的速度,被广泛应用于核酸POCT设备中。本文针对多温区恒等温快速核酸检测仪的结构、控温原理及关键点,对多温区快速核酸检测仪的温度偏差、升温速率、温度波动度和温度持续时间偏差进行校准和分析,并验证了该校准方法的可行性和合理性。 展开更多
关键词 等温扩增技术 快速核酸检测仪 多温区 校准方法
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我国猪萨佩罗病毒分子流行病学及检测方法研究进展
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作者 申秋平 黄子惠 +2 位作者 王新茹 孙丽 庄林林 《畜禽业》 2024年第6期7-13,共7页
猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)是一种可引发仔猪腹泻、生长发育迟缓、肌肉震颤等多系统症状的重要病原体,严重影响养猪业的发展。已有研究表明,PSV已在我国多个省市呈现流行趋势,且不同地区的病毒毒株存在一定的差异。由于尚... 猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)是一种可引发仔猪腹泻、生长发育迟缓、肌肉震颤等多系统症状的重要病原体,严重影响养猪业的发展。已有研究表明,PSV已在我国多个省市呈现流行趋势,且不同地区的病毒毒株存在一定的差异。由于尚无抗病毒药物和有效疫苗,早期识别和精准诊断对科学防控PSV感染具有决定性的作用。目前,PSV分子检测方法主要分为2大类:免疫学检测技术和核酸检测技术。免疫学检测技术包括酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光技术;核酸检测技术包括逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、多重RT-PCR、巢式RT-PCR、荧光定量PCR、多重荧光定量PCR、环介导等温扩增、重组酶聚合酶扩增以及原位杂交技术等。在此基础上,作者对PSV分子检测方法的优缺点进行了讨论,并对其未来发展方向进行了展望,以期为我国科学防控PSV提供参考依据。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 分子特征 流行病学 免疫学检测技术 核酸检测技术
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某些分子光谱分析法测定核酸的进展 被引量:40
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作者 刘绍璞 龙秀芬 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期101-107,共7页
对近年来利用分光光度法、荧光法和共振光散射法定量测定核酸的现状进行了评述 ,表中列出了重要的反应体系及分析特征 ,引用文献
关键词 分子光谱分析法 核酸 测定 DNA 分光光度法 荧光法 共振光散射法 共振瑞利散射法
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9例核酸反应性标本与对应ELISA、CLIA法检测HBV的关联分析 被引量:21
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作者 张毓 孙国栋 +1 位作者 张丽 王学刚 《临床输血与检验》 CAS 2018年第2期206-208,共3页
目的为保障临床输血的安全性,比较已知酶联免疫吸附试验(ELISA)、ALT阴性合并核酸检测(NAT)反应性标本与对应化学发光(CLIA)法检测HBV的结果,对三种检测方法进行相关性分析。方法对17508例无偿献血者(排除ELISA法初复检公共阳性、ALT阳... 目的为保障临床输血的安全性,比较已知酶联免疫吸附试验(ELISA)、ALT阴性合并核酸检测(NAT)反应性标本与对应化学发光(CLIA)法检测HBV的结果,对三种检测方法进行相关性分析。方法对17508例无偿献血者(排除ELISA法初复检公共阳性、ALT阳性等)进行NAT,并对NAT反应性标本进行CLIA检测。结果经核酸检测出9例HBV DNA反应性标本,未检出HCV RNA和HIV RNA反应性标本,其中1例为ELISA法"阴性高值"标本;对应CLIA法HBV"两对半"检测出现2例HBsAg(-)抗-HBs(-)抗-HBc(+)及5例HBs Ag(-)抗-HBs(+)抗-HBc(+)血清型,可能为OBI,2例均无反应性,可能为窗口期标本。结论无偿献血者的现有血液筛查方法 NAT检测和ELI SA法具有互补性,NAT检测可弥补ELISA法检测的"窗口期"问题;NAT与CLIA法检测结果具有一致性;OBI可能是本地区NAT检测HBV DNA献血者的主要类型;对可能影响血液质量的ELISA法"阴性高值"标本的淘汰,会降低输血感染风险。 展开更多
关键词 核酸检测 ELISA法 CLIA法 HBV
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双孢蘑菇中核酸提取的研究 被引量:8
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作者 王小红 钱骅 +2 位作者 张卫明 赵伯涛 黄晓德 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期216-219,共4页
通过对酶解法、热回流法、超声波和微波法提取双孢蘑菇中核酸效果进行了比较,结果表明微波法优于其它方法。最终,确立采用微波破壁提取双孢蘑菇中核酸。经单因素(时间、功率、NaCl%、pH)实验和正交实验,得最佳提取条件为:30min、300W、4... 通过对酶解法、热回流法、超声波和微波法提取双孢蘑菇中核酸效果进行了比较,结果表明微波法优于其它方法。最终,确立采用微波破壁提取双孢蘑菇中核酸。经单因素(时间、功率、NaCl%、pH)实验和正交实验,得最佳提取条件为:30min、300W、4%NaCl、pH为11。用定磷法测得双孢蘑菇核酸提取率为2.78%。 展开更多
关键词 双孢蘑菇 核酸 微波 定磷法
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核酸分析方法在土壤微生物多样性研究中的应用 被引量:9
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作者 钟文辉 王薇 +2 位作者 林先贵 尹睿 申卫收 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期334-341,共8页
土壤微生物多样性一般包括微生物分类群的多样性、遗传(基因)多样性、生态特征多样性和功能多样性。传统的分离培养方法和土壤微生物的生化研究手段具有一定的局限性,核酸分析方法为土壤微生物多样性研究注入了新活力。本文主要综述了... 土壤微生物多样性一般包括微生物分类群的多样性、遗传(基因)多样性、生态特征多样性和功能多样性。传统的分离培养方法和土壤微生物的生化研究手段具有一定的局限性,核酸分析方法为土壤微生物多样性研究注入了新活力。本文主要综述了近年来国内外研究土壤微生物多样性所采用的核酸提取方法及核酸分析方法。重点阐述了基于PCR的分子指纹技术、核酸杂交技术、基因芯片等核酸分析方法的原理、优缺点和应用。各种土壤微生物多样性研究方法的综合应用可扬长避短,起到相互补充的作用,从而能够提供更加丰富而准确的土壤微生物群落结构及种群丰度变化等方面的信息,也将成为这一领域今后的发展趋势。 展开更多
关键词 土壤微生物多样性 核酸分析方法 DNA/RNA提取 PCR
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CTAB法用于染病烟草植株中烟草丛顶病毒RNA的提取 被引量:6
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作者 左瑞娟 周雨泫 +3 位作者 李丽娟 董鹏 陈海如 李凡 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-29,共4页
CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒(烟草丛顶病毒)引起的烟草丛顶病... CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒(烟草丛顶病毒)引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。 展开更多
关键词 CTAB法 TRIZOL法 核酸提取 烟草丛顶病毒
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