大鼠胚胎原代海马神经元两种转染方法的比较

目的:原代海马神经元是原代细胞中比较难转染的细胞,为了得到比较高的转染效率,通过比较Li-pofectamine2000转染法和大鼠神经元核电转法(rat neuron nucleofector kit)转染效率及转染前后细胞的存活率,来探讨Nucleofector Kit核电转法的高效性。方法:选取胚胎18 d(E18)大鼠的海马神经元进行原代培养,获取海马神经元单细胞悬液后,于种植前和种植24 h后分别采用Nucleofector Kit和Lipofectamine 2000转染红色荧光蛋白(red fluorescence protein,DsRed)质粒。神经元转染48 h后分别采用轴突标记物Tau-1进行免疫荧光染色鉴定神经元。神经元的存活率采用台盼兰进行检测。结果:Lipofectamine2000的基因转染率仅为5.34%,而大鼠神经元Nucleofector Kit的转染率为44.54%,后者为前者的8.34倍。Lipofectamine2000转染细胞前后的存活率分别为98.56%和91.44%,而Nucleofector Kit组分别为98.26%和74.02%。结论:大鼠神经元核电转法能高效稳定的转染原代海马神经元。

树突状细胞抗原负载方法探讨

目的探讨树突状细胞(DC)抗原负载方法。方法体外诱导培养外周血单核细胞来源的DC,分别用脂质体和Nucleo-fector转染试剂盒体外负载抗原,比较2种负载方法转染效率以及对DC表型的影响。结果Nucleofector转染方法能够显著的提高转染效率,2种转染方法对DC细胞的表型无显著影响。结论Nucleofector转染是一种有效的DC抗原体外负载方法,为抗原修饰的DC细胞疫苗的改进提供了新的途径。

两种转染人宫颈癌HeLa细胞的方法学比较

目的比较两种不同的转染方法，即Lipofectamine2000和Nucleofector Kit转染人宫颈癌Hela细胞的转染效率。方法分别选取Lipofectamine2000转染和Amax核电转（ Amax Nucleofector Kit）两种转染方法。HeLa细胞培养贴壁达到85%~90%后传代获取HeLa单细胞悬液，细胞分成2管，其中1管直接采用核电转法转染红色荧光蛋白（ DsRed）后种植于1.5 ml的细胞培养皿；另一管先种植于细胞培养皿，待贴壁24 h后采用Lipofectamine2000转染DsRed。细胞的存活率采用台盼兰进行检测。分别比较两者转染效率及转染前后细胞的存活率，进一步探讨Nucleofector Kit核电转法的高效性。结果 Lipofectamine2000的基因转染率仅为20.23%，而核电转法的转染率为90.14%，后者为前者的4.46倍。Lipo-fectamine2000转染细胞前后的存活率分别为96.34%和90.76%，而核电转组分别为95.98%和78.35%。结论细胞核电转法能高效稳定地转染人宫颈癌细胞株HeLa细胞。