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NGX6基因转染对鼻咽癌细胞基因表达谱的影响 被引量:6
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作者 马健 周洁 +6 位作者 李小玲 龚佳蕾 何显锋 唐珂 阳剑波 胡赓熙 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期416-422,共7页
鼻咽癌是我国南方的常见肿瘤 .NGX6是新近克隆的定位于 9p2 1 2 2 ,在鼻咽癌组织中表达下调的基因 .初步的研究结果显示 ,NGX6基因转染鼻咽癌细胞HNE1能够延缓其生长速度 ,使肿瘤细胞更多地停留在G0 G1期 .为探索NGX6基因在鼻咽癌发... 鼻咽癌是我国南方的常见肿瘤 .NGX6是新近克隆的定位于 9p2 1 2 2 ,在鼻咽癌组织中表达下调的基因 .初步的研究结果显示 ,NGX6基因转染鼻咽癌细胞HNE1能够延缓其生长速度 ,使肿瘤细胞更多地停留在G0 G1期 .为探索NGX6基因在鼻咽癌发病机制中的作用 ,建立了高表达NGX6的鼻咽癌细胞系 .利用包含 14 0 0 0个基因的cDNA微阵列分析了NGX6基因转染对HNE1细胞基因表达谱的影响 ,发现NGX6基因的转染能够上调p2 9、APC7、NEU1、RNasek6、αE catenin和TFⅡEα等基因的表达 ;同时也下调properdinP因子、G0S2、BAZ2B、ZHX1,OS4和PBX3等基因的表达 .研究结果提示 ,NGX6基因对鼻咽癌细胞的生物学行为的影响可能与它对一些细胞周期调控因子和转录调控因子的影响相关 .作为一种高通量的分析技术 。 展开更多
关键词 ngx6 基因转染 鼻咽癌细胞 基因表达谱 CDNA微阵列 细胞周期
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抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 连平 郭勤 +5 位作者 彭娅 肖志明 刘芬 王晓艳 沈守荣 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1154-1160,共7页
NGX6基因是中南大学肿瘤研究所分子遗传室在对鼻咽癌研究中筛选克隆出的一个新基因.以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞为实验组,转染空白质粒的HT-29细胞以及HT-29细胞为对照组,利用PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡... NGX6基因是中南大学肿瘤研究所分子遗传室在对鼻咽癌研究中筛选克隆出的一个新基因.以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞为实验组,转染空白质粒的HT-29细胞以及HT-29细胞为对照组,利用PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡情况,通过EMSA分析体外培养的结肠癌细胞及种植瘤细胞内核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况.研究结果表明:在裸鼠结肠癌种植瘤中,转染了NGX6基因的与未转染及空白载体组比较,结肠癌细胞凋亡率明显增高;EMSA(electrophoretic mobility shift assay)分析体外培养的结肠癌细胞及种植瘤细胞内核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,发现转染了NGX6基因的细胞NF-κB的激活均明显受到抑制.此研究说明,NGX6基因具有诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其可能的机制是抑制了结肠癌细胞NF-κB的激活. 展开更多
关键词 结肠癌 ngx6基因 裸鼠 凋亡
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结肠癌中NGX6抑制EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路的研究 被引量:10
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作者 王晓艳 沈守荣 +3 位作者 刘芬 彭娅 李桂源 范松青 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期570-576,共7页
候选抑瘤基因NGX6具有抑制结肠癌增殖和转移的作用,研究表明其为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的负性调控因子,并可下调JNK通路中重要分子MADD(MAP-kinase activating death domain)的表达,其抑瘤机制是否... 候选抑瘤基因NGX6具有抑制结肠癌增殖和转移的作用,研究表明其为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的负性调控因子,并可下调JNK通路中重要分子MADD(MAP-kinase activating death domain)的表达,其抑瘤机制是否与抑制EGFR介导的JNK信号通路的活性有关?在已建立的转染NGX6的细胞模型基础上,借助蛋白质印迹(Western blot)和免疫组化方法在细胞和组织水平检测NGX6转染前后EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/cyclin D1信号通路中重要蛋白质的表达.结果表明,NGX6转染后结肠癌细胞HT-29在裸鼠体内成瘤明显受抑,差异有统计学意义.Western blot结果显示,在结肠癌细胞中NGX6可明显下调EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达;进一步采用Western blot和免疫组化法验证NGX6在体内对上述关键分子表达的影响,发现NGX6可抑制裸鼠移植瘤组织中EGFR、K-ras、p-JNK、c-Jun和cyclin D1的表达,与体外结果一致.上述研究表明,NGX6在结肠癌中主要通过抑制EGFR介导的JNK通路的活性而发挥其抑瘤作用,该研究为深入探讨NGX6的机制提供了重要的实验依据. 展开更多
关键词 结肠癌 ngx6基因 EGFR JNK信号通路
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NGX6基因对高转移鼻咽癌细胞株5-8F细胞的影响 被引量:8
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作者 王莉莉 张秋红 +5 位作者 马健 彭聪 曹利 唐珂 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期618-624,共7页
NGX6是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因.为进一步研究其功能,在构建NGX6的真核表达载体NGX6/pcDNA3.1(+)基础上,通过脂质体转染方法将NGX6基因导入鼻咽癌细胞株SUNE-1的亚株5-8F细胞(具高成瘤高转移潜能)中,并用RT-PCR和RNA印迹鉴定,建... NGX6是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因.为进一步研究其功能,在构建NGX6的真核表达载体NGX6/pcDNA3.1(+)基础上,通过脂质体转染方法将NGX6基因导入鼻咽癌细胞株SUNE-1的亚株5-8F细胞(具高成瘤高转移潜能)中,并用RT-PCR和RNA印迹鉴定,建立了稳定表达NGX6基因的5-8F细胞系.借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测,同时采用包含1176个与肿瘤学相关的基因cDNA微阵列,分析了NGX6基因转染对5-8F细胞基因表达谱的影响.结果显示:转染了NGX6基因的5-8F细胞的生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降(P<0.05),发现NGX6基因的转染能够上调5-8F细胞中p19、cateninα2、desmoglein1等基因的表达,同时下调EphB4、TIE2、vitronectin等基因的表达.综上所述,NGX6基因可以抑制5-8F细胞的恶性生物学行为,并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的基因的表达.上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索. 展开更多
关键词 ngx6基因 鼻咽癌 肿瘤转移 CDNA微阵列
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NGX6基因在多种常见癌组织中的原位表达及其临床意义的研究 被引量:9
5
作者 范松青 张文玲 +2 位作者 周鸣 彭淑平 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1014-1020,共7页
研究新的候选抑瘤基因NGX6在多种常见癌组织中的mRNA原位表达谱,分析NGX6 mRNA阳性率与肿瘤临床病理特征的关系并评估其作为肿瘤转移、预后预测分子标志物的有效性.利用已制作的多肿瘤组织和鼻咽癌组织微阵列,原位杂交检测NGX6 mRNA在... 研究新的候选抑瘤基因NGX6在多种常见癌组织中的mRNA原位表达谱,分析NGX6 mRNA阳性率与肿瘤临床病理特征的关系并评估其作为肿瘤转移、预后预测分子标志物的有效性.利用已制作的多肿瘤组织和鼻咽癌组织微阵列,原位杂交检测NGX6 mRNA在多种常见癌组织中的阳性率.结果显示,NGX6 mRNA在鼻咽癌、肺癌、胃癌和结、直肠癌中的阳性率低于其对应的正常组织(P<0.05,P<0.01).淋巴结转移性鼻咽癌、肺癌、结、直肠癌和喉癌组织中的NGX6 mRNA阳性率显著降低(P<0.05,P<0.01).NGX6 mRNA阳性率与鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌临床分期有关,临床Ⅱ期、Ⅲ期或Ⅳ期癌组织NGX6 mRNA阳性率明显低于其相应的临床Ⅰ期癌(P<0.05,P<0.01).研究表明,鼻咽癌、肺癌、胃癌和结、直肠癌中存在低水平的NGX6 mRNA,NGX6 mRNA可作为鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌侵袭、转移和临床进展预测的分子标志. 展开更多
关键词 组织微阵列 原位杂交 ngx6基因
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裸鼠脾脏移植瘤模型在NGX6抗结肠癌转移作用研究中的应用 被引量:9
6
作者 肖志明 沈守荣 +2 位作者 连平 王晓艳 刘芬 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期753-757,共5页
目的:建立结肠癌肝转移模型,为抑瘤基因NGX6功能研究提供体内试验平台。方法:将低分化结肠癌细胞系HT-29组(HT-29)、空白质粒转染组[pcDNA3.1(+)/HT-29]、NGX6转染组[(pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29)]细胞分别接种于裸鼠脾脏下极包膜内,每天... 目的:建立结肠癌肝转移模型,为抑瘤基因NGX6功能研究提供体内试验平台。方法:将低分化结肠癌细胞系HT-29组(HT-29)、空白质粒转染组[pcDNA3.1(+)/HT-29]、NGX6转染组[(pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29)]细胞分别接种于裸鼠脾脏下极包膜内,每天称量裸鼠体质量并观察裸鼠摄食、活动及精神情况,45d后处死裸鼠,分别从大体水平以及镜下观察肝、脾、肺、肾、脑等器官肿瘤转移情况。结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组裸鼠较其他两组裸鼠肝脏转移灶数目明显减少、脾脏上种植瘤形成明显减少。结论:抑瘤基因NGX6抑制结肠癌HT-29细胞的转移,裸鼠脾内种植转移模型可作为新基因体内功能研究的理想模型。 展开更多
关键词 结肠癌 ngx6基因 裸鼠 动物模型
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胃癌和大肠癌中肿瘤相关基因NGX6的表达 被引量:24
7
作者 张晓梅 沈守荣 +2 位作者 王晓艳 王洁如 李江 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第8期873-876,共4页
目的:研究肿瘤相关基因NGX6在胃癌与大肠癌组织以及其配对癌旁正常组织中的表达,探讨此基因在胃癌、大肠癌发生发展中的作用.方法:采用RT-PCR方法、点杂交、Northern-blot方法分别检测34例胃癌、34例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁(手术切缘... 目的:研究肿瘤相关基因NGX6在胃癌与大肠癌组织以及其配对癌旁正常组织中的表达,探讨此基因在胃癌、大肠癌发生发展中的作用.方法:采用RT-PCR方法、点杂交、Northern-blot方法分别检测34例胃癌、34例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁(手术切缘,距肿瘤5cm以上)正常组织NGX6基因表达.结果:RT-PCR显示:NGX6基因在73.5%的大肠癌组织(25/34)和93.8%的有淋巴结或远处转移的大肠癌组织(15/16)中存在表达减弱或不表达,其表达下调率明显高于相应的癌旁组织和无淋巴结或远处转移大肠癌(26.5%、55.6%,P<0.05)。但此基因表达与大肠癌病理类型无显著相关性。点杂交和Northern-blot证实了RT-PCR结果。而胃癌与配对癌旁正常组织中未发现NGX6表达水平改变(表达下调率:29.4%vs41.2%,P>0.05).结论:NGX6基因在大肠癌中表达下调,此基因的低表达在大肠癌的发生和转移中起着一定的作用,但可能与胃癌的发生无关. 展开更多
关键词 胃癌 大肠癌 肿瘤相关基因 ngx6 基因表达 RT-PCR方法 点杂交
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NGX6对结肠癌细胞系HT-29基因表达谱的影响 被引量:15
8
作者 刘芬 王晓艳 +4 位作者 连平 肖志明 沈守荣 马健 熊炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1064-1070,共7页
背景与目的:结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制仍未完全明了。本研究在前期工作的基础上探讨候选抑瘤基因NGX6对结肠癌细胞系HT-29基因表达谱的影响。方法:通过脂质体介导的基因转染构建稳定表达NGX6的结肠癌细胞系pcDNA3.1(+)/N... 背景与目的:结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制仍未完全明了。本研究在前期工作的基础上探讨候选抑瘤基因NGX6对结肠癌细胞系HT-29基因表达谱的影响。方法:通过脂质体介导的基因转染构建稳定表达NGX6的结肠癌细胞系pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29,以NGX6转染组为实验组,空白质粒转染组为对照组,利用高通量的表达谱芯片BiostarH-80sx1筛选差异表达基因,RT-PCR验证部分基因芯片的实验结果。结果:NGX6基因转染结肠癌细胞系HT-29后引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异3倍以上的基因共377个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,包括细胞信号转导﹑细胞周期调控﹑细胞凋亡﹑细胞骨架和运动﹑基因转录和翻译、DNA损伤修复﹑蛋白质合成和代谢等。其中包括一些非常重要的信号转导通路上的分子改变,如Wnt/β-catenin信号通路上的DKK1、ILK、MMP1、COL11A1,ILK信号通路上的ILK,Eph-Ephrins信号通路上的EpHB2,RhoA信号通路上的ROCK2,RanGTPase信号通路上的RANBP1,以及RB/RBBP1信号通路上的RBBP1等。结论:NGX6转染引起了一些非常重要的信号转导通路上的分子改变,可能通过参与调节这些信号转导通路而发挥其抗肿瘤增殖和转移的作用。 展开更多
关键词 结肠癌/遗传学 ngx6基因 基因芯片 信号转导 细胞增殖 肿瘤转移
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NGX6基因抑制高转移鼻咽癌细胞的侵袭运动能力 被引量:4
9
作者 彭淑平 李小玲 +7 位作者 刘华英 王理 周鸣 周后德 李征 钟慧 向波 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期309-315,共7页
NGX6基因是我室利用定位候选克隆策略,在鼻咽癌的高频杂合性缺失区9p21-22克隆的新基因.前期研究结果提示,它与鼻咽癌细胞的侵袭转移密切相关.为了进一步阐明其作用的结构基础,本研究成功构建了含NGX6基因及突变体的pCMV-myc瞬时和pcDNA... NGX6基因是我室利用定位候选克隆策略,在鼻咽癌的高频杂合性缺失区9p21-22克隆的新基因.前期研究结果提示,它与鼻咽癌细胞的侵袭转移密切相关.为了进一步阐明其作用的结构基础,本研究成功构建了含NGX6基因及突变体的pCMV-myc瞬时和pcDNA3.1-his-myc(-)B稳定表达载体.通过脂质体转染技术,构建了NGX6及突变体的稳定表达细胞系5-8F.用免疫荧光试验和免疫电镜观察了NGX6在5-8F细胞中的亚细胞定位主要位于胞膜、核膜以及胞浆中的膜质结构,缺失突变的功能域对其定位没有明显的影响.基质胶侵袭试验和划痕试验研究了NGX6及突变体对细胞运动的影响.NGX6能抑制高转移潜能的鼻咽癌细胞5-8F的运动和侵袭能力,缺失胞内区(CYTO)后NGX6不能抑制5-8F细胞的运动和侵袭,提示CYTO可能是其发挥作用的重要功能域. 展开更多
关键词 ngx6基因 突变体 侵袭
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NGX6和CyclinD1蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义 被引量:5
10
作者 王国磊 蒋庆峰 +2 位作者 张瑞祥 申思宁 李印 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期887-891,共5页
背景与目的:鼻咽癌相关基因6(nasopharyngeal carcinoma-associated gene 6,NGX6)是新近克隆的抑癌基因,NGX6可能通过抑制EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/CyclinD1通路的活性,延缓肿瘤细胞周期由G0/G1期进入S期的过程,从而发挥其抑瘤功能。为阐... 背景与目的:鼻咽癌相关基因6(nasopharyngeal carcinoma-associated gene 6,NGX6)是新近克隆的抑癌基因,NGX6可能通过抑制EGFR/K-ras/JNK/c-Jun/CyclinD1通路的活性,延缓肿瘤细胞周期由G0/G1期进入S期的过程,从而发挥其抑瘤功能。为阐明其作用机制及意义,本研究探讨NGX6和CyclinD1蛋白在食管鳞癌组织中的表达和临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测60例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和20例正常食管黏膜组织中NGX6及CyclinD1蛋白的表达。结果:食管鳞癌组织中NGX6蛋白阳性表达率显著低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P<0.05);而食管鳞癌组织中CyclinD1蛋白阳性表达率显著高于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P<0.05);NGX6和CyclinD1蛋白表达均与临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、性别及分化程度无关(P>0.05);两种蛋白之间阳性表达呈负相关(P<0.05)。结论:NGX6和CyclinD1蛋白异常表达与食管鳞癌的发生、浸润转移及预后密切相关,且两者呈负相关,联合检测NGX6和CyclinD1的表达有望成为食管鳞癌的早期诊断、预后评估的分子标志物。 展开更多
关键词 ngx6 CYCLIND1 食管鳞癌
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NGX6对Wnt/β-catenin通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响 被引量:7
11
作者 刘芬 沈守荣 +4 位作者 李宏韬 王晓艳 彭娅 廖曼甜 郭勤 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期985-991,共7页
目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制。方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1(+)-β... 目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制。方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)及pCMV-myc-NGX6于COS-7细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测转染NGX6前后TCF-4的转录活性。(3)无外源性β-cate-nin,pCMV-myc-NGX6单独转染COS-7细胞及结肠癌SW620细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测TCF-4的转录活性,并采用Western blot的方法检测两组细胞核内β-catenin及TCF-4的表达。结果:(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT);(2)pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)与pCMV-myc-NGX6共转染COS-7细胞较pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)单独转染时TCF-4荧光素酶活性明显下降(P<0.05);(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6转染COS-7及SW620细胞后TCF-4荧光素酶活性较空白质粒转染组下降(P<0.05);(4)NGX6转染COS-7及SW620后核内β-catenin及TCF-4的表达下降。结论:NGX6对结肠癌中Wnt/β-catenin通路的β-catenin/TCF/LEF转录活化具有负性调节作用,其作用机制可能与NGX6抑制β-catenin的核转位有关。 展开更多
关键词 ngx6基因 结肠癌 信号转导 WNT/Β-CATENIN TCF/LEF
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抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞HT-29生长的影响 被引量:13
12
作者 王晓艳 沈守荣 +6 位作者 刘华英 张晓梅 彭聪 黄河 刘芬 李晓玲 李桂源 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第3期574-579,共6页
目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用. 方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重... 目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用. 方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重组体转染低表达NGX6的人结肠癌细胞HT-29,Dot blot及RT-PCR方法检测外源性NGX6基因的表达,借助生长曲线、MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、裸鼠成瘤实验对NGX6转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测. 结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组细胞生长速度比pcDNA3.1(+)/HT-29和HT-29组明显减慢(P<0.05),其倍增时间为34.5 h比pcDNA3.1(+)/HT-29(27.1 h)和HT-29 (23.0 h)延长;pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组软琼脂集落形成率较对照组明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测NGX6高表达能延缓HT-29细胞周期由G0/G1期→s期的进程;裸鼠成瘤实验表明pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组成瘤受抑. 结论:NGX6的重表达可逆转人结肠癌细胞HT-29的恶性表型;NGX6是极具前途的结肠癌相关抑瘤基因侯选者. 展开更多
关键词 ngx6基因 肿瘤抑制 结肠癌 HT-29细胞 肿瘤生物学 DNA探针
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鼻咽癌相关基因NGX6对鼻咽癌细胞周期的影响 被引量:10
13
作者 李江 黄宇琛 +3 位作者 张秋红 谭琛 李小玲 李桂源 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第4期300-304,共5页
为了探讨鼻咽癌(NPC)候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用westernblot验... 为了探讨鼻咽癌(NPC)候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用westernblot验证它对细胞周期的影响.结果显示稳定表达NGX6的HNE1细胞较对照组细胞周期中G0 G1期比例明显增加,而S期比例减少.细胞凋亡率无明显变化.流式细胞仪检测发现cyclinD1、A和E的表达明显减少,以cyclinD1的改变最为明显.Westernblot检测也发现cyclinD1的表达明显下调.以上结果说明NGX6主要通过下调cyclinD1的表达,延缓细胞周期的G1→S的进程,从而抑制NPC细胞的过度增殖. 展开更多
关键词 鼻咽癌 相关基因 ngx6 癌细胞周期 细胞周期素 流式细胞仪
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抑瘤基因NGX6对鼻咽癌细胞株HNE1细胞生长的影响(英文) 被引量:6
14
作者 李江 黄宇琛 +5 位作者 李伟芳 谭琛 张秋红 彭聪 李小玲 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期398-403,共6页
鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质... 鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1中 ,Northern杂交方法筛选高效表达NGX6的细胞株 ,并借助细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验和流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行了检测 .结果显示 ,转染了NGX6基因的HNE1细胞的生长速度明显减慢 ,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P〈0 0 5 ) ,裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长 ,瘤体的大小和重量较对照组明显减少 ,流式细胞仪检测发现细胞的凋亡率无明显变化 .为了明确NGX6蛋白在细胞中发挥作用的部位 ,进一步将NGX6的开放阅读框架完整正确地克隆到pEGFPC1的荧光载体中 ,转染到COS7细胞中 ,用荧光显微镜观察细胞中荧光的分布 ,发现荧光主要分布在细胞浆中 ,说明NGX6蛋白可能是一种胞浆蛋白 .该研究表明 ,NGX6在NPC的发生发展中起重要作用 ,为全面阐述NGX6的功能提供重要的信息 。 展开更多
关键词 抑瘤基因ngx6 鼻咽癌细胞株 HNE1细胞生长
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NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响 被引量:14
15
作者 王晓艳 沈守荣 +2 位作者 刘芬 李晓玲 范松青 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期45-50,共6页
NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减... NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用. 展开更多
关键词 ngx6 HT-29细胞 细胞周期 细胞周期素 细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)
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抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响 被引量:2
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作者 连平 郭勤 +5 位作者 彭娅 肖志明 刘芬 王晓艳 沈守荣 李桂源 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第25期2577-2584,共8页
目的:探讨抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响.方法:将HT-29细胞分为3组:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组(稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞)、pcDNA3.1(+)/HT-29组(转染空白质粒的HT-29细胞)及HT-29对照组.通过鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实... 目的:探讨抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响.方法:将HT-29细胞分为3组:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组(稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞)、pcDNA3.1(+)/HT-29组(转染空白质粒的HT-29细胞)及HT-29对照组.通过鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验检测结肠癌细胞接种鸡胚血管形成情况.裸鼠成瘤实验观测种植瘤及其对裸鼠的影响,然后对种植瘤进行免疫组织化学实验检测其内部血管生成.RT-PCR检测NGX6基因及VEGF基因在各组细胞中的表达.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组鸡胚血管形成平均数量较HT-29与pcDNA3.1(+)/HT-29组明显减少(6.2±0.2vs8.6±0.2,8.4±0.3,P<0.05);HT-29组裸鼠明显消瘦且pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组与HT-29和pcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤平均质量、种植瘤微血管密度明显降低(1.83±0.25gvs4.06±0.20g,4.16±0.4g;1.83±0.52vs7.36±1.12vs6.96±1.43,均P<0.05);VEGF在pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29细胞及种植瘤中较其余两组明显降低,而pcDNA3.1(+)/HT-29细胞与未转染的HT-29细胞与种植瘤中呈高表达;且HE染色切片显示HT-29组及PcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤血管内都有癌栓,而PcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组种植瘤内未见有癌栓形成.结论:NGX6基因能抑制结肠癌细胞HT-29血管的形成,抑瘤基因NGX6的抑癌能力部分是通过抑制血管形成来实现的. 展开更多
关键词 结肠癌 ngx6基因 裸鼠 血管形成
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BRD7、NGX6基因在急性白血病中的表达 被引量:1
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作者 唐雪元 龙潺 +3 位作者 刘芬 吕宏伟 胡进 沈守荣 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期635-638,共4页
目的探讨急性白血病患者骨髓单个核细胞BRD7、NGX6基因的表达水平。方法采用RT-PCR对52例急性白血病(acute leukemia,AL)患者及30例正常骨髓对照进行NGX6、BRD7基因mR-NA水平的检测,对其中7例AL患者用免疫组化法检测BRD7蛋白表达水平。... 目的探讨急性白血病患者骨髓单个核细胞BRD7、NGX6基因的表达水平。方法采用RT-PCR对52例急性白血病(acute leukemia,AL)患者及30例正常骨髓对照进行NGX6、BRD7基因mR-NA水平的检测,对其中7例AL患者用免疫组化法检测BRD7蛋白表达水平。结果在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中BRD7、NGX6基因均存在明确表达。NGX6 mRNA的相对表达量在AL组与正常对照中差异无统计学意义(t=-1.014,P=0.982)。而BRD7 mRNA的表达水平AL组高于正常对照组,差异有统计学意义(t=3.672,P=0.001),但在AL各亚型之间BRD7 mRNA的表达差异无统计学意义(t=1.076,P=0.287),且BRD7 mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。其中,对部分样品检测了BRD7蛋白的表达,结果发现AL患者BRD7阳性表达细胞百分率均值高于正常骨髓对照。结论AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞均表达BRD7和NGX6,且BRD7基因在急性白血病细胞中表达上调,但BRD7 mRNA表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。 展开更多
关键词 白血病 BRD7 ngx6 基因表达
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双向电泳和质谱技术研究鼻咽癌候选抑瘤基因NGX6的功能 被引量:2
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作者 李江 谭琛 +6 位作者 向秋 张小梅 马健 李伟芳 王洁如 梁宋平 李桂源 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第7期692-695,共4页
目的:NGX6基因是我室克隆的与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,它的功能与作用机制目前尚不清楚。方法:通过亚克隆的方法将NGX6 cDNA 片段克隆至pcDNA3.1(+)的表达载体,经脂质体导入HNE1细胞,采用双向凝胶电泳分离细胞内蛋白质,筛选... 目的:NGX6基因是我室克隆的与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,它的功能与作用机制目前尚不清楚。方法:通过亚克隆的方法将NGX6 cDNA 片段克隆至pcDNA3.1(+)的表达载体,经脂质体导入HNE1细胞,采用双向凝胶电泳分离细胞内蛋白质,筛选差异表达的蛋白质点进行质谱分析和生物信息学资料处理。结果:我们鉴定出7种表达下调的蛋白质,其中包括RAB蛋白、NG24前体、LIM同源盒9等。这些蛋白参与了细胞生长、增殖和分化的信号传导通路。结论:这些结果说明NGX6基因可能通过多种途径影响鼻咽癌的生长。本文为研究NGX6的作用机制提供了很好的实验资料,对鼻咽癌的基因治疗奠定了一定的研究基础,也为研究其他基因的作用机制提供了新思路。 展开更多
关键词 双向电泳 基质辅助性 激光解吸飞行时间质谱 细胞转染 ngx6基因 鼻咽癌
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人鼻咽癌相关基因NGX6在大肠杆菌中的诱导表达及纯化 被引量:1
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作者 李小玲 李江 +4 位作者 黄宇琛 董莉 张秋红 谭琛 李桂源 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第2期151-155,共5页
NGX6是一个新克隆的鼻咽癌抑瘤基因候选者,为了进一步制备抗NGX6编码蛋白质的抗体和研究它的功能,本研究拟在原核表达系统中表达并纯化出NGX6蛋白.采用多聚酶链式反应(PCR)方法扩增出NGX6基因蛋白编码序列,构建该基因的融合表达质粒pGEX... NGX6是一个新克隆的鼻咽癌抑瘤基因候选者,为了进一步制备抗NGX6编码蛋白质的抗体和研究它的功能,本研究拟在原核表达系统中表达并纯化出NGX6蛋白.采用多聚酶链式反应(PCR)方法扩增出NGX6基因蛋白编码序列,构建该基因的融合表达质粒pGEX3X NGX6,导入大肠杆菌中,IPTG诱导表达,SDS PAGE电泳,Westernblot鉴定.用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白.结果显示构建的融合表达质粒酶切和测序鉴定阅读框架正确,导入大肠杆菌中诱导后出现一条42kDa的新蛋白带,主要存在于细菌沉淀中,占总蛋白的26%,Westernblot鉴定其为GST NGX6融合蛋白,并进一步纯化出融合蛋白.研究表明NGX6基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达,并能纯化出该种蛋白,为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下了基础. 展开更多
关键词 鼻咽癌 基因ngx6 大肠杆菌 诱导表达 蛋白纯化
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NGX6基因在肝细胞癌中的表达及意义 被引量:2
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作者 肖际东 沈守荣 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期937-941,共5页
目的:探讨NGX6基因在肝细胞癌及癌旁组织中有无表达及其与临床病理特征的关系。方法:肝细胞癌患者组织标本分为癌与癌旁对照组,应用RT-PCR检测45例肝细胞癌及配对癌旁组织NGX6表达,并对其表达和各临床病理参数的关系进行分析。结果:癌组... 目的:探讨NGX6基因在肝细胞癌及癌旁组织中有无表达及其与临床病理特征的关系。方法:肝细胞癌患者组织标本分为癌与癌旁对照组,应用RT-PCR检测45例肝细胞癌及配对癌旁组织NGX6表达,并对其表达和各临床病理参数的关系进行分析。结果:癌组织NGX6阳性表达率35.5%(16/45),NGX6表达强度相对值为0.245±0.060;癌旁组织阳性表达率为77.8%(35/45),强度相对值为0.352±0.113;癌与癌旁组织的表达阳性率及强度比较差异有统计学意义(P<0.05);肝细胞癌组织NGX6表达与TNM分期(χ2=6.106,P=0.042)、淋巴结转移(χ2=5.237,P=0.022)有关。结论:NGX6基因转录水平的表达降低或缺失,可能在原发性肝细胞癌的发生过程中起了重要作用,NGX6基因表达水平有可能作为一项早期预测肝癌发生发展的指标。 展开更多
关键词 肝细胞癌 ngx6基因 表达
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