甲型副伤寒沙门氏菌LPS提取和O-SP纯化

提取甲型副伤寒沙门氏菌脂多糖(LPS)和纯化特异多糖(O-SP),为制备副伤寒结合疫苗奠定基础.采用大罐培养,菌体热酚法提纯去蛋白,乙醇分级沉淀冷冻离心去核酸,乙酸水解脱毒,高速离心,柱层析等方法纯化.纯化O-SP核酸含量低于1%,蛋白含量低于1.5%,O-乙酰基含量0.5～0.8mmol/L,与甲型副伤寒超免血清形成明显沉淀线,核磁共振图谱(NMR)显示甲型副伤寒O-SP的特征谱.建立了实用的纯化甲型副伤寒O-SP工艺.

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。

鼠伤寒结合疫苗研制的初步探讨

通过对鼠伤寒沙门菌LH株的发酵培养,热酚水法提取脂多糖LPS,1%乙酸沸水浴水解90m in脱毒,Super-dex 200柱层析,收集第一峰为鼠伤寒O-SP抗原;然后用CDAP对O-SP活化、ADH衍生后,在EDAC的缩合作用下,结合到破伤风类毒素TT上,制备出鼠伤寒结合疫苗;用含2.5μg多糖鼠伤寒结合疫苗免疫小鼠,以2.5μgO-SP多糖生理盐水溶液以及生理盐水溶液为对照组,间隔14天,免疫三针;以LPS为包被抗原,用间接ELISA法测定血清中抗鼠伤寒LPS IgG抗体。鼠伤寒结合疫苗三针免疫后,小鼠血清抗鼠伤寒LPS IgG抗体效价达到1:80以上的比例为84.2%,而总的几何平均滴度(GMT)达到796;说明制备的鼠伤寒结合疫苗有良好的免疫原性,而且鼠伤寒结合疫苗在小鼠和豚鼠体内有良好的安全性。

志贺氏I型痢疾杆菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

从志贺氏I型痢疾杆菌LPS中分离纯化出O SP半抗原 ,以ADH为连接剂将其与TT结合形成O SP TT结合疫苗 ,并用此结合疫苗免疫NIH小鼠 ,结果显示单独使用O SP免疫后 ,小鼠血清中没有抗LPS抗体产生 ,而用O SP TT免疫后小鼠血清中产生了抗LPSIgG和IgM抗体 ,且IgG抗体水平高于IgM抗体 ;O SP TT免疫组第二次和第三次免疫后IgG抗体水平均有显著的升高 (P <0 0 1) ,但第二次和第三次免疫后血清IgM抗体虽有升高 ,但与前一次免疫相比均无显著差异 (P >0 0 5 ) ,表明O SP TT结合疫苗具有加强免疫应答效应。补体介导的体外杀菌活性试验结果证明 ,O SP TT免疫血清在 1∶16 0倍稀释后仍对志贺氏I型痢疾杆菌具有特异性杀菌活性。

甲型副伤寒菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

以脱毒后去除类脂A的甲型副伤寒杆菌高分子量O SP1和低分子量O SP2 为特异性抗原 ,以破伤风类毒素 (TT)为蛋白质载体 ,用己二酸二肼 (ADH)作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫NIH小鼠 ,结果显示单独注射O SP1或O SP2 免疫小鼠后 ,均不能刺激小鼠产生抗 LPS抗体 ;而用O SP1 TT和O SP2 TT结合物免疫后 ,小鼠血清中均产生了特异性抗 LPSIgG和IgM抗体 ,且O SP1 TT免疫组血清中IgG抗体水平明显高于O SP2 TT免疫组 ,两组结合物免疫血清中抗体类型以IgG为主。O SP1 TT结合物免疫组第二次免疫和第三次免疫后IgG抗体水平均较前一次有显著升高 (p<0 0 1)说明 ,O SP1 TT结合物具有加强应答效果。补体介导的体外杀菌试验证明 ,O SP1 TT与O SP2 TT结合物免疫血清具有特异性杀菌活性。

枯萎病菌的PCR-RFLP分子检测和早期诊断

采用自行设计的、能对镰刀菌18srDNA进行特异性扩增的1对引物,利用PCR-RFLP对尖孢镰刀菌以不同方式侵染的植株进行跟踪检测。结果表明,应用PCR-RFLP检测程序可检测出处于侵染初期和潜育期的枯萎病菌,说明PCR-RFLP能够快速、灵敏、准确地对枯萎病进行早期诊断。

Rhodococcus sp. Ns对硝基苯酚的好氧生物降解

通过驯化富集培养,从红树林底泥中分离出6株硝基苯酚降解菌,其中Rhodococcussp.Ns为对硝基苯酚(PNP)与邻硝基苯酚(ONP)的高效降解菌.在好氧条件下该菌可以耐受小于1.8 mmol/L的PNP,能够利用PNP和ONP为唯一碳源、能源和氮源生长并将其完全矿化.研究了Rhodococcussp.Ns在不同pH、盐度与浓度范围下,PNP的降解特性并探讨了该菌降解PNP的途径.实验得出该菌在盐度<5‰、pH>5的条件下能较快生长,1.5 mmol/L的PNP在96h内被完全降解,并检测到至少2种中间产物4-硝基儿茶酚(4-nitrocatechol)和1,2,4-苯三酚(1,2,4-benzenetriol).红树林底泥中固有的细菌对PNP和ONP具有高效降解作用.

福氏2a痢疾杆菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫学特性

通过己二酸二肼 (ADH)将福氏 2a痢疾杆菌脂多糖 (LPS)经酸水解脱毒纯化后得到的O SP和破伤风类毒素 (TT)蛋白共价结合 ,制备了福氏 2a痢疾杆菌结合物。以 2 5 μg多糖或含 2 5 μg多糖的结合物经皮下注射免疫NIH品系雌性小鼠 ,同时以 2 5 μg多糖或含 2 5 μg多糖的结合物经耳缘静脉注射家兔。用ELISA方法分别检测小鼠和家兔血清中抗脂多糖抗体水平及抗TT水平 ,并用豚鼠血清补体介导进行了体外杀菌实验。结果显示 :用本实验方法提取的多糖 ,合成的多糖衍生物 ,多糖 蛋白结合物都具有福氏 2a痢疾杆菌O 抗原特异性 ,其化学组成及结构特异性和国外文献报道基本一致。单独用多糖免疫小鼠和家兔未能诱导LPS抗体 ,而结合物免疫小鼠和家兔的血清诱导出了较高的抗LPSIgG抗体及抗TT抗体 ,并有较强的体外杀菌活性。产生的抗体存在着免疫记忆性 。

5个精神分裂症高发家系与COMT关联的分析

本研究旨在探测儿茶酚氧位甲基转移酶基因(COMT)多态性与精神分裂症(SP)的关系,搜寻中国汉族人精神分裂症易患性基因。应用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)方法对5个精神分裂症高发家系进行初步研究。用改进的传递/不平衡(TDT)进行统计分析,结果表明,在5个精神分裂症高发家系中,COMT基因与精神分裂症相关联(P=0.0455)。研究结果提示,在我们研究的家系中,22号染色体长臂(22q11.2)可能存在精神分裂症易患性基因。

降解邻硝基酚葡萄球菌的分离与特性研究

从实验室长期存放的三硝基酚试剂瓶中 ,分离到一株能以邻硝基酚为唯一碳氮源生长的细菌 ,经初步鉴定为葡萄球菌 (Staphnykococcussp .LT) .在降解试验中可直接检测到亚硝酸根离子 (NO- 2 )的释出 ,用薄层层析方法观察到了降解中间产物的存在 .

红罗非鱼和福寿鱼雌亲鱼不同组织脂肪酸组成分析

Folch法提取红罗非鱼(Oreochromis sp.)和福寿鱼(O.mossambicus×O.niloticus)雌亲鱼不同组织(肌肉、肝胰脏和卵巢)中的脂质,GC法分析脂肪酸组成。结果显示,红罗非鱼和福寿鱼卵巢中总脂含量分别占湿重的16.16%和10.20%,显著高于肝胰脏中的总脂含量(P<0.05),而肝胰脏中的总脂含量又显著高于肌肉(P<0.05)。2种鱼肌肉、肝胰脏和卵巢中共检出18种脂肪酸,主要饱和脂肪酸(SFA)是C14:0、C16:0和C18:0,主要单不饱和脂肪酸(MUFA)是C16:1和C18:1n-9,主要多不饱和脂肪酸(PUFA)是C18:2n-6、C20:4n-6(ARA)、C20:5n-3(EPA)和C22:6n-3(DHA)。ARA在福寿鱼肌肉中含量最高(9.16%),显著高于2种试验鱼其他组织中的ARA含量。Σ(EPA+DHA)在红罗非鱼的卵巢和福寿鱼的肌肉、肝胰脏和卵巢中含量高于其它组织(5.09%～7.70%),福寿鱼肌肉中最高(7.70%),卵巢中次之(6.97%)。红罗非鱼肌肉、肝胰脏和卵巢中的ΣPUFA含量均低于福寿鱼相应组织。红罗非鱼与福寿鱼各组织之间n-3/n-6比率变化不显著,但均小于1,为0.12～0.41。红罗非鱼的肝胰脏和卵巢中,脂肪酸含量ΣSFA>ΣMUFA>ΣPUFA;红罗非鱼肌肉、福寿鱼肝胰脏和卵巢中,ΣMUFA>ΣSFA>ΣPUFA;福寿鱼肌肉中,ΣSFA>ΣPUFA>ΣMUFA。

基于同位素特征的华北平原菜地N_2O排放监测中取样时间的探讨

【目的】为了长期监测土壤释放N_2O的通量和同位素变化规律,了解产生N_2O的微生物过程,提高对N_2O排放量和排放系数估计的准确性,需要对N_2O的日变化规律做深入研究,以便获得具有代表性的取样时间点及密闭时间。【方法】采用田间原位试验对华北平原的莴苣菜地进行了N_2O排放监测,选取N_2O排放高峰期即施肥灌溉后5 6 d为监测时间段,采用静态气体箱收集土壤释放的N_2O气体,结合气相色谱和质谱技术测定N_2O的含量及其同位素值(δ^(15)N-N_2O,δ^(18)O-N_2O和SP)。试验设2种取样间隔,即2 h和10 min,分别对N_2O日变化规律和密闭时间进行研究。【结果】1)在莴苣菜地N_2O排放高峰期内,N_2O通量日变化范围为34.65 131.45μg/(m^2·h),最大和最小的通量分别发生在13:00和次日5:00,9:00的N_2O通量为83.66μg/(m^2·h),与日通量平均值82.81μg/(m^2·h)相接近。N_2O通量产生日变化的原因与土壤温度有关,相关分析表明,N_2O通量与地下5 cm处土壤温度呈显著正相关(R2=0.82,P<0.01),而与土壤充水孔隙度(WFPS)无显著相关性。2)24 h内,δ^(15)Nbulk-N_2O和δ^(18)O-N_2O随着时间呈现先降低后增加的变化趋势,变化范围分别为-31.22‰-11.09‰和-7.45‰-0.68‰;SP值随时间呈现先增加后降低的变化趋势,变化范围为16.13‰26.41‰。N_2O各个同位素值随时间的变化表明产生N_2O的微生物过程随之变化,但SP值在9:00 17:00较稳定,变化范围为23.26‰26.21‰,极显著高于其他时刻(P<0.01),表明硝化作用在这一时间段内对N_2O的产生起主导作用。3)扣箱40min后,N_2O含量、δ15N-N_2O和SP值都达到稳定状态,因此选取40 min作为单次观测N_2O含量和同位素变化的密闭时间。4)24 h内N_2O通量加权SP值为22.54‰。根据前人总结的规律,本研究中N_2O主要由细菌硝化作用产生,且估计60.92%的N_2O来自于细菌硝化作用,39.08%的N_2O来自于反硝化作用。【结论】华北平原莴苣菜地的N_2O通量和同位素值具有较大的日变化,综合N_2O通量和同位素值,建议选取9:00作为观测莴苣菜地N_2O排放通量和同位素特征值变化规律的时刻,建议静态气体箱密闭时间为40 min。

茼蒿中绿原酸抑制西瓜枯萎病菌活性研究

为了确定茼蒿中抑制西瓜枯萎病菌的物质,以西瓜枯萎病菌为指示菌株,对从茼蒿茎叶组织中分离纯化并鉴定出的3-O-咖啡酰奎宁酸(绿原酸)的离体抑菌活性进行了研究。结果表明,绿原酸对西瓜枯萎病菌的最不抑菌浓度(MIC)和最不杀菌浓度(MFC)分别为31.25和125 mg·m L^(-1),经室内毒力测定,其对西瓜枯萎病菌的凌半最大效应浓度(EC50)为53.05 mg·m L^(-1)。在绿原酸浓度分别为31.25、125、53.05 mg·m L^(-1)时,即MIC、EC_(50)、MFC的绿原酸浓度处理下,西瓜枯萎病菌的孢子萌发率分别为64%、33%、12%,而绿原酸浓度为0时的孢子萌发率则达到92%,经邓肯氏差异分析,各处理间孢子萌发率差异均显著。随着绿原酸浓度的增大,西瓜枯萎病菌的菌丝干、鲜重均呈现出下降的趋势。此外,绿原酸处理能使细胞膜通透性增加,从而导致菌体细胞内电解质外渗速度加快。本研究结果为茼蒿的深度开发和利用提供了科学依据,也为其他天然抑菌活性成分的筛选及抑菌机理的研究提供可行的试验方法和理论依据,对研究和开发新的天然植物源杀菌剂具有重要的学术价值和应用前景。

一株芽孢杆菌及其破乳特性研究

从某油污样品中分离、筛选出一株破乳菌株10^#，经鉴定属芽孢杆菌属。该菌株对油田稳定O／W乳化液具明显的破乳效果。该菌株最佳培养条件为：温度30-35℃，pH7．0-7．5，生长时间48-72h，碳源为液体石蜡。该菌株在培养48h后具有明显而稳定的破乳效果，破乳活性部位为菌体。

深水条件下岩塞钻孔爆破关键技术及应用

为实现深水条件下的岩塞钻孔爆破贯通与成型,系统研究深水条件下岩塞钻孔爆破的贯通机理。提出结合隧洞开挖的岩塞爆破试验方法,对岩塞钻孔爆破参数的合理性、爆破器材的防水抗压性能以及起爆网路的可靠性、施工工艺等进行现场试验;对岩塞在库区与隧洞内外不同水压差下的爆破石渣运动形态进行水工模型试验,解决了高水压条件下的岩塞钻孔爆破贯通成型、石渣运动控制等技术难题,并成功应用于长甸水电站扩机工程的岩塞爆破中。可为类似岩塞爆破工程提供参考与借鉴。

奥尼罗非鱼与星洲银罗非鱼染色体组型的比较研究

以奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)和星洲银罗非鱼(Oreochromis sp.)为材料,胸腔注射PHA及秋水仙素溶液,取头肾细胞经空气干燥法制片。经核型分析,奥尼罗非鱼核型公式为2n=44,6sm+28st+10t,NF=50,星洲银罗非鱼核型公式为2n=44,10sm+20st+14t,NF=54。这两种鱼都具有1对特大的染色体,染色体对的相对长度范围也相似,但未发现中部着丝粒染色体对和异型染色体,它们的核型与已报道的亲代相似。

综合护理干预对老年精神障碍患者住院期间安全性的影响

目的探讨综合护理干预对老年精神障碍患者住院期间安全性的影响。方法选取精神科住院的2014年8月-2015年1月的66例患者为对照组,2015年2~7月的66例患者为实验组。对照组给予常规护理,实验组采用综合护理干预模式进行护理。干预2周后,比较2组患者安全事件发生情况及2组患者家属的满意度。结果实验组安全事故发生情况少于对照组(Z=-2.049,P=0.040),实验组患者家属满意度显著高于对照组(Z=-4.963,P<0.001)。结论综合护理干预可提高老年精神障碍患者住院期间的安全性,并能有效提高家属的满意度。

旱芹粗提物对棉花枯萎病菌丙二醛含量、电导率及保护酶活性的影响

研究了旱芹粗提物对棉花枯萎病菌丙二醛(MDA)含量及保护酶活性的影响。结果显示,粗提物处理过的棉花枯萎菌菌体发生膜质过氧化作用,随着处理时间的延长,MDA累积量增大,8h时达到最高,为对照的3.9倍,48h时降到最低;同时电导率也呈现先升后降的趋势。在12h时达到最高,为对照的1.20倍,48h时降至最低。结果还显示,随着处理时间的增加,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及过氧化物酶(POD)3种保护酶活性先升高后降低,SOD、CAT在10h时达到最高值,分别是对照的1.40倍和1.23倍,48h时降至最低,POD略有不同,在12h达到最高值,是对照的1.47倍,48h时降到最低。上述结果表明,粗提物破坏了枯萎病菌体内SOD、POD及CAT酶系统原有的动态平衡状态,导致自由基清除系统出现障碍,体内自由基水平升高;MDA含量的增加,破坏了膜系统的完整性,对枯萎病菌产生伤害作用。

小鼠金属硫蛋白基因在丝状体蓝藻中的表达及对重金属抗性的提高

应用蓝藻类金属硫蛋白启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性，在丝状体蓝藻鱼腥藻（Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０）中表达具有更高金属结合能力和对Ｃｄ２＋有选择特异性的小鼠金属硫蛋白基因（ｍＭＴⅠｃＤＮＡ）。构建穿梭表达载体ｐＫＴＭＲＥ并在大肠杆菌ＨＢ１０１中扩增，经三亲接合转移、链霉素筛选、ＤＮＡ和蛋白质印迹等方法鉴定得到稳定的转基因工程蓝藻。转基因蓝藻对金属离子吸附能力和较高重金属浓度下放氧活性测定表明，外源基因的表达提高了蓝藻对重金属离子的抗性，是野生蓝藻的１．５～２．０倍。

海藻多糖抑制白细胞呼吸爆发作用研究

采用ＥＳＲ、自旋捕集及自旋氧探针技术，研究了海藻硫酸多糖（ＳＰＳ）对豆蔻酰佛波醇乙酯（ＰＭＡ）刺激的多形核白细胞（ＰＭＮ）呼吸爆发的影响．结果表明，ＳＰＳ能显著抑制ＰＭＮ呼吸爆发，１０ｇ／Ｌ和５ｇ／ＬＳＰＳ几乎完全清除ＰＭＮ呼吸爆发产生的自由基，１ｇ／ＬＳＰＳ可清除５３２％；