O-GlcNAc修饰在糖尿病心肌病中的作用及机制研究进展

糖尿病是一种慢性代谢性紊乱疾病。据统计,我国2021年糖尿病患者数量已高达1.41亿[1]。糖尿病引发的心血管意外已成为患者死亡的主要原因,且死亡率明显高于非糖尿病患者[2]。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy, DCM)是一种因长期高血糖引起的心脏结构和功能异常的疾病,与多种信号通路有关。

O-抗原糖基转移酶对嗜水气单胞菌环境适应性及致病性的影响

[目的]本文旨在探究4种O-抗原糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)对嗜水气单胞菌NJ-35环境适应性和毒力的影响。[方法]采用同源重组技术构建GT基因缺失株ΔGT-1、ΔGT-2、ΔGT-3和ΔGT-4,比较缺失株与野生株在体外生长、抗应激、抗吞噬、细胞黏附能力、对斑马鱼毒力以及脂多糖(LPS)表达量等方面的差异。[结果]在含有20 g·L^(-1)NaCl的高渗LB(Luria-Bertani)培养基中,相比野生(WT)菌株,4个缺失株生长均未发生明显变化;在2 mmol·L^(-1)H _(2)O_(2)的强氧化应激条件下,4个缺失株抗氧化能力显著降低,特别是缺失株ΔGT-3存活率下降90%,ΔGT-4存活率下降86.5%,另外2株缺失株存活率下降近40%;在LB培养基(pH5.0)中作用30 min,4个缺失株存活率相比野生株均明显降低,其中ΔGT-3存活率下降近30%;4个缺失株对上皮细胞的黏附能力均显著降低,抗吞噬能力均显著增强;相比野生株,ΔGT-4对斑马鱼半数致死量(LD 50)上升近20倍,其他缺失株的毒力无明显变化;4个缺失株的LPS表达量均降低,且ΔGT-1和ΔGT-4的LPS最高分子质量条带出现缺失。[结论]O-抗原糖基转移酶有助于嗜水气单胞菌抵抗酸应激和氧化应激环境,并在该菌的黏附和毒力上发挥重要作用。

酯化酶甾醇O-酰基转移酶1在恶性肿瘤中作用的研究进展

甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)是一种位于内质网内的酯化酶,催化细胞内游离胆固醇转化为脂滴。SOAT1被发现在多种恶性肿瘤内高表达,并与恶性肿瘤增殖、侵袭迁移紧密相关。这表明SOAT1有潜力成为恶性肿瘤早期诊断的生物标志物和治疗新靶点。本文就SOAT1的结构、功能及其在恶性肿瘤中作用的相关研究进展进行综述。

食品中一种新型非法添加物O-丙基伐地那非的快速筛查和定量测定

目的对在食品中发现的一种非法添加的新型磷酸二酯酶5型(phosphodiesterase type 5,PDE-5)抑制剂O-丙基伐地那非进行结构解析并建立定量测定方法。方法采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(high performance liquid chromatography-diode array detector,HPLC-DAD)发现了一种未知的新型伐地那非类似物,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry,UPLC-Q-Orbitrap HRMS)对其结构进行质谱解析,并依据解析的化学结构购买对照品,确定该物质为O-丙基伐地那非。采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(ultra performance liquid chromatography-coupled triple quadrupole mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立典型食品中O-丙基伐地那非的定量测定方法。结果O-丙基伐地那非在0.50~50.25 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.9998,方法检出限(S/N=3)为0.02mg/kg,方法的定量限(S/N=10)为0.05mg/kg,在咖啡、压片糖果、保健酒基质中3个水平加样回收率分别为91.8%~93.9%、84.9%~87.3%和95.6%~103.0%,相对标准偏差均不大于4.6%。采用该方法对市场监管部门送检的93批样品进行测定,结果其中17批检出O-丙基伐地那非,其含量为28~359 mg/kg。结论所建立的方法快速、灵敏、准确,可用于O-丙基伐地那非的筛查和定量。本研究思路可给其他非法添加未知物的鉴定提供参考。

O-GlcNAc糖基化修饰在糖尿病性白内障中的作用

目的:分析O-连接N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰在年龄相关性白内障和糖尿病性白内障晶状体前囊膜中的表达变化,探讨O-GlcNAc糖基化修饰在糖尿病性白内障中的作用。方法:以糖尿病性白内障患者54例56眼和年龄相关性白内障患者115例120眼的晶状体前囊膜为研究对象,利用免疫印迹技术检测年龄相关性和糖尿病性白内障晶状体前囊膜中O-GlcNAc蛋白的表达水平,富集晶状体前囊膜组织中O-GlcNAc糖蛋白并通过质谱方法鉴定两组样本晶状体前囊膜中O-GlcNAc差异蛋白的表达。结果:免疫印迹结果显示,糖尿病性白内障组晶状体前囊膜中O-GlcNAc蛋白表达水平显著高于年龄相关性白内障组(P<0.01),且随着糖化血红蛋白水平的升高,O-GlcNAc蛋白表达水平也升高(P<0.01)。我们采用质谱法对糖尿病性白内障和年龄相关性白内障晶状体前囊膜中O-GlcNAc蛋白进行差异分析,在糖尿病性白内障组中发现5种表达上调的O-GlcNAc蛋白(FABP5、KRT16、PGK1、CTSD、S100A7),18种表达下调的O-GlcNAc蛋白(CRYβB1等),同时我们还鉴定出3个新的O-GlcNAc糖基化修饰位点:蛋白质PTPRQ的T1730和S1738位的O-GlcNAc糖基化和蛋白质ATP5MC2的T61位的O-GlcNAc糖基化。结论:O-GlcNAc糖基化修饰可能参与了糖尿病性白内障的形成和发展。质谱鉴定出的O-GlcNAc差异蛋白为进一步研究糖尿病性白内障的发病机制提供了理论依据。

保健食品中O-丙基羟基伐地那非的快速筛查、确证和定量测定

目的利用高分辨质谱仪快速筛查壮阳类保健食品中的磷酸二酯酶5型抑制剂(phosphodiesterase type 5 inhibitors,PDE-5i),确证其中发现的新型非法添加物并建立定量检测方法。方法采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪(ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对20批次保健食品中的非法添加物进行日常非靶向筛查,在2批次压片糖果中鉴别出一种新型伐地那非类似物。结合化合物的质谱裂解规律及核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectrometry,NMR)对未知物结构进行确证。采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(ultra performance liquid chromatography-coupled triple quadrupole mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立了典型食品基质中未知物的定量检测方法。结果未知物被确证为O-丙基羟基伐地那非。该物质溶剂校准和基质匹配曲线在2~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)大于0.995,检出限为0.05 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。在固体饮料、压片糖果、果冻基质中3个水平加标回收率为94.45%~104.16%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.70%~4.02%。采用该方法测得2批次阳性样品中O-丙基羟基伐地那非的含量分别为22.0 mg/kg、13.8 g/kg。结论本方法适用于食品中那非类似物的快速筛查,用于O-丙基羟基伐地那非的定量检测高效、灵敏、准确。本研究为食品基质中非法添加物的系统性确证和定量研究提供了可供借鉴的参考模型。

O,O-二烷基硫代磷酰氯制备过程中一氯化硫处理进展

O,O-二烷基硫代磷酰氯是一种重要的农药中间体,可用于制备多种有机磷类杀虫剂。基于五硫化二磷合成O,O-二烷基硫代磷酰氯是目前研究热点,综述了以五硫化二磷为原料合成O,O-二烷基硫代磷酰氯过程中一氯化硫的处理方法,并分析了各种方法的优缺点。

O-乙基-S-乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)磷酸酯的合成

为了研究毒死蜱中转位杂质的含量,及减少毒死蜱合成中该杂质的形成,探究合成O-乙基-S-乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)磷酸酯的最优工艺参数。以三氯化磷和乙醇为原料,经取代、氨化、缩合、酰化和缩合五步反应合成目标产物。取代、氨化、缩合、酰化和缩合的收率分别为82.3%、90.3%、96.0%、97.1%和96.7%,总收率达到67.0%。实验结果经色谱分析表明:合成的产物气液相面积归一化均可达到98%。

固醇O-酰基转移酶1在肿瘤中的研究进展

固醇O-酰基转移酶1(SOAT1),又称为酰基辅酶A、胆固醇酰基转移酶1(ACAT1),是胆固醇酯化途径中至关重要的酶,其可将内质网中的胆固醇转化为胆固醇酯,随后储存于脂滴中,以维持细胞内脂质代谢平衡。研究发现,SOAT1不仅与动脉粥样硬化和阿尔茨海默病等的发生发展密切相关,还在促进肿瘤发生发展中发挥重要作用。在多种肿瘤中,SOAT1高表达与患者的预后不良密切相关,SOAT1被认为可能成为多种肿瘤患者预后的生物标志物和治疗靶点。本文对SOAT1的结构功能及其在肿瘤中的作用进行综述,以期为SOAT1的进一步研究及临床应用提供参考。

蛋白质O-连接-N-乙酰葡萄糖胺修饰在心力衰竭中的作用的研究进展

蛋白质O-连接-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰是细胞内普遍存在的重要蛋白质翻译后修饰,对于细胞生物学功能至关重要。这种翻译后修饰可影响细胞的翻译与转运,对维持和促进正常细胞发挥功能有重要意义。蛋白质O-GlcNAc修饰对心脏组织有重要作用,短期内增加的蛋白质O-GlcNAc对心脏有保护作用,而长期增加的蛋白质O-GlcNAc导致心脏功能障碍。蛋白质O-GlcNAc修饰在心血管疾病中的辅助治疗作用已成为当前研究热点。现就蛋白质O-GlcNAc修饰在心力衰竭中的作用的研究进展进行综述。

N,O-羧甲基壳聚糖的合成和性质研究

采用多段升温法将壳聚糖改性 ,合成了取代度为 1.84、平均分子量为 3.0 8× 10 5、等电点为 7.2 8的N ,O 羧甲基壳聚糖 (CMC) ,分别用紫外光谱、红外光谱、荧光光谱对其结构进行了表征 ,并对其水溶液的Zeta电位、电导率、表面张力以及水分散体系中羧甲基壳聚糖微粒的粒径分布进行了研究 .结果表明 ,N ,O 羧甲基壳聚糖具有表面活性 ;

^(17)O-核磁共振研究给水中常见离子对水缔合的影响

给水中通常含有少量的离子 ,如Na+,K+,Ca2 +,Mg2 +及Cl- ,SO2 - 4,CO2 - 3等 .本文测量了不同温度 (2 0～60℃ )下的水及由上述离子组成的不同浓度盐溶液 (0～ 1mol/L)的17O 核磁共振 (17O NMR)的化学位移和半峰宽 .根据化学位移和半峰宽的变化与水缔合的关系分析了离子对水缔合的影响 .结果表明 ,不同离子对水缔合的影响不同 ,阳离子促进液态水形成缔合结构 ,阴离子则破坏水的缔合结构 ;离子电荷越大 ,半径越大 ,对水缔合的影响越大 。

N,O-羧甲基壳聚糖羧化度计算式的修正

通过N ,O 羧甲基壳聚糖电位滴定曲线与模型化合物氨基葡萄糖、羧甲基纤维素钠、N 羧甲基壳聚糖以及标准盐酸溶液电位滴定曲线的比较 ,重新确定了N ,O 羧甲基壳聚糖电位滴定曲线突跃的意义并推断出样品羧甲基存在形式和壳聚糖的结构组成。依据壳聚糖结构单元组成及羧甲基的存在形式 。

高效液相色谱法测定家蝇细胞色素P450O-脱甲基活性

建立了以乙酸乙酯/正己烷为终止剂(含1%H3PO4)和萃取剂,利用高效液相色谱,ZORBAXEclipseXDBC18色谱柱,梯度洗脱,在316nm检测,外标法分析对硝基苯酚的生成量,表征家蝇粗酶液中细胞色素P450催化的对硝基苯甲醚O-脱甲基活性的新方法。本方法的检出限为0.1ng;分析精密度的RSD为1.02%;0.351,1.755和8.755μg对硝基苯酚3个添加水平的回收率为92.34%～87.60%;回收率的RSD为2.64%～5.90%;对硝基苯酚在9.72～486ng范围内,线性关系良好,r=0.9995。应用本方法比较了家蝇吡虫啉抗性品系与敏感品系细胞色素P450的活性差异。结果表明,家蝇抗性品系的P450O-脱甲基活性是敏感品系的3.34倍;细胞色素P450活性的提高是家蝇对吡虫啉产生抗性的一个重要机制。

N,O-羧甲基壳聚糖树脂的制备及其对重金属吸附性能研究

通过乳化交联法制备了一种新型的戊二醛交联N,O-羧甲基壳聚糖树脂,用SEM和FT-IR对树脂的表面结构和化学结构进行表征。用树脂吸附水溶液中的Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)等重金属离子,研究了不同pH值、接触时间和初始浓度对吸附量的影响。当pH值=5时,树脂对Cu(Ⅱ)的吸附量达到最大值;当pH值=6时,对Pb(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)的吸附量达到最大值。利用两种吸附等温线模型对数据进行拟合并对吸附动力学进行研究,实验数据对Langmuir等温线模型具有较高的拟合度,拟合后对Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)的最大吸附量分别为156.25、222.22和178.57mg/g,吸附过程符合拟二级反应动力学模型。

茶树类黄酮O-甲基转移酶基因的克隆及原核表达分析

【目的】克隆茶树(Camellia sinensis)的一个类黄酮O-甲基转移酶基因,并对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为进一步研究其酶学特性和调控茶树中甲基化类黄酮物质的代谢机理奠定基础。【方法】采用同源克隆法,以从茶树叶片中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR与RACE克隆技术获得该基因cDNA全长,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21并诱导表达。【结果】该基因cDNA全长为1 246 bp,其开放阅读框为1 077 bp,编码358个氨基酸,推测的蛋白分子量为40.2 kD,理论等电点为5.62;其核苷酸编码序列与葡萄和毛果杨的类黄酮O-甲基转移酶基因相似性分别为80%和81%;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。【结论】利用RT-PCR与RACE克隆技术从茶树叶片中克隆得到了一个类黄酮O-甲基转移酶基因,成功构建了原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。

硝化液回流比对A^2/O-BCO工艺反硝化除磷特性的影响

以低C/N城市生活污水为处理对象,重点考察了硝化液回流比对A2/O-BCO(生物接触氧化)工艺脱氮除磷特性的影响.在A2/O反应池水力停留时间(HRT)为8h,污泥回流比为100%条件下,将硝化液回流比分别设定为100%、200%、300%和400%进行试验.结果表明,系统在A2/O中实现了反硝化除磷,具有很好的同步氮磷的去除效果,出水COD浓度均在50mg/L以下.上述不同硝化液回流比下总氮(TN)去除率分别为48.8%、66.5%、75.6%和62.5%,总磷(TP)去除率分别为86.0%、90.3%、91.0%和95.0%.在硝化液回流比为300%时,系统平均出水TN和TP浓度分别为14.96mg/L和0.49mg/L.系统反硝化除磷量随着硝化液回流比的增大略有增加,在硝化液回流比为400%时,反硝化除磷量高达磷总去除量的98%.

高取代度N,O-羧甲基壳聚糖的合成及其对水中Cu^(2+)的螯合絮凝性能

以壳聚糖为原料 ,通过两段加碱法制备出取代度 1.0以上的 N,O-羧甲基壳聚糖 ,对其螯合 Cu2 + 机理进行了研究 ;考察了取代度、脱乙酰度、样品用量、溶液初始 Cu2 + 浓度及 p H值等因素对螯合能力的影响 ,以及螯合物的解附 .结果表明 ,取代度直接影响螯合能力 ,高取代度羧甲基壳聚糖对 Cu2 +螯合能力很强 ,其螯合反应在几 min内便接近平衡 ,且取代度为1.63时 ,在 Cu2 +初始浓度 4 .82 66× 10 - 4mol/ L 的稀溶液中 ,螯合容量可达 189mg/ g样品 .

O-羧甲基壳聚糖对电镀废水中Cr(Ⅵ)吸附性能的研究

O-羧甲基壳聚糖对六价铬具有吸附作用。本文研究了溶液的pH、吸附时间、温度和O-羧甲基壳聚糖的加入量对其吸附性能的影响。结果表明，在室温下，pH为2，吸附时间2h，O-羧甲基壳聚糖加入量为5g时，其吸附性能最好，吸附率可达98％以上。

野生刺梨汁中游离态和O-糖苷键合态挥发性物质的检测

以鄂西宣恩野生刺梨汁为研究对象,采用顶空固相微萃取技术萃取游离态挥发性成分和Amberlite XAD-2树脂吸附、β-葡萄糖苷酶酶解释放O-糖苷键合态挥发性成分,并结合气相色谱-质谱联用分析技术,研究其游离态和O-糖苷键合态挥发性成分组成。结果表明:宣恩野生刺梨汁中游离态和O-糖苷键合态挥发性成分在组成和含量上差异较大;采用顶空固相微萃取技术结合气相色谱-质谱联用技术,鉴定出宣恩刺梨汁中游离态挥发性成分3 8种,含量较高的有(+)-柠檬烯、叶醇、丁酸乙酯、正己醇、苯乙烯、异戊酸乙酯、2,4-二叔丁基苯酚、松油烯、月桂烯、罗勒烯、丁酸-3-己烯酯、芳樟醇、辛酸、辛酸乙酯和双戊烯等;采用β-葡萄糖苷酶酶解释放结合气相色谱-质谱联用分析技术,鉴定出宣恩刺梨汁中O-糖苷键合态挥发性成分有38种,含量较高的有4-羟基肉桂酸、2′-羟基-4′,5′-二甲基苯乙酮、辛酸、肉桂酸、2,4-二叔丁基苯酚、3,4-二甲氧基肉桂酸、苯甲醇、己酸、3,4,5-三甲氧基苯酚、叶醇和阿魏酸等,其中有苯甲醇、苯乙醇、橙花醇、肉桂酸、香草酸、3-羟基己酸乙酯、丁香酚等33种物质在游离态组分中并不存在。