H3K27乙酰化修饰促进lncRNA OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导过敏性鼻炎鼻黏膜上皮细胞凋亡

目的本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA OIP5-AS1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型。采用实时定量PCR检测OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达。ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡。双荧光素酶报告实验用于验证OIP5-AS1和TLR4的关系。染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证OIP5-AS1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰。结果与健康对照和未处理的NEC相比,OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高。敲减OIP5-AS1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平,而过表达OIP5-AS1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平。敲减OIP5-AS1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC的分泌,而过表达TLR4可部分逆转敲减OIP5-AS1对NEC凋亡及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC表达的影响。此外,H3K27ac在OIP5-AS1的启动子区域显著富集,H3K27乙酰化可促进OIP5-AS1在IL-13诱导的NEC中的表达。结论H3K27乙酰化修饰促进OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡。

血清miR-218-5p、LncRNA OIP5-AS1在急性呼吸窘迫综合征患儿中表达及临床预后预测效能分析

目的探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清长链非编码RNA OIP5-AS1(LncRNA OIP5-AS1)、微小RNA-218-5p(miR-218-5p)表达情况及二者在临床预后预测中的价值。方法回顾性选择2020年7月至2022年2月秦皇岛市第一医院收治的104例ARDS患儿为ARDS组。根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))将ARDS患儿分为重度亚组(PaO_(2)/FiO_(2)≤100 mmHg,n=32)、中度亚组(100 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤200 mmHg,n=38)、轻度亚组(200 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤300 mmHg,n=34)。根据ARDS患儿28 d院内死亡情况将其分为存活亚组(n=74)和死亡亚组(n=30)。另选择同期于本院进行健康体检的98例儿童作为对照组。比较各组血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平;收集患儿性别、年龄、气道峰值压、通气时间、入住ICU时间、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))、入院急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、入院序贯器官功能衰竭评分(SOFA)、平均气道压、潮气量、白蛋白等资料。采用Pearson相关分析ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平对ARDS患儿预后的预测价值;采用Logistic回归分析影响ARDS患儿死亡的因素。结果ARDS组血清LncRNA OIP5-AS1为2.04±0.38,显著高于对照组(1.01±0.21),miR-218-5p为0.45±0.16,显著低于对照组(1.02±0.20),差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、轻度亚组、中度亚组、重度亚组ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1表达水平依次升高,miR-218-5p表达水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡亚组血清LncRNA OIP5-AS1表达水平及入院APACHEⅡ评分、入院SOFA、平均气道压、潮气量均高于存活亚组,miR-218-5p表达水平及PaO_(2)、白蛋白均低于存活亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.05)。血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p及二者联合预测ARDS患儿死亡的曲线下面积分别为0.852、0.812、0.904。LncRNA OIP5-AS1是ARDS患儿死亡的独立危险因素(P<0.05),miR-218-5p是ARDS患儿死亡的保护因素(P<0.05)。结论ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1>2.04,miR-218-5p<0.39,均与病情严重程度及预后不良有关。

长链非编码RNA OIP5-AS1促进结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)OIP5-AS1对结直肠癌转移的作用及其机制。方法采用实时定量PCR检测结直肠癌细胞系(SW480、HCT116、HT-29、Caco-2)中OIP5-AS1的表达,选择高表达细胞系进行表达沉默。结直肠癌细胞系随机转染对照序列(NC组)、干扰序列1(OIP5-AS1 siRNA1组)或干扰序列2(OIP5-AS1 siRNA2组)。用Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blotting检测OIP5-AS1对上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达的影响;免疫荧光分析OIP5-AS1对E-cadherin、N-cadherin蛋白表达和细胞定位的影响。结果与低侵袭性HT-29和Caco-2细胞相比,高侵袭性SW480和HCT116细胞中OIP5-AS1的表达显著增高(P<0.05)。OIP5-AS1表达沉默后,SW480和HCT116细胞迁移能力减弱。与对照组相比,沉默OIP5-AS1后SW480和HCT116细胞中E-cadherin蛋白表达增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达减少。结论OIP5-AS1可能通过诱导结直肠癌细胞上皮-间质转化和迁移,促进结直肠癌的转移。

LncRNA OIP5-AS1在高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转分化中的作用

目的:腹膜纤维化是终末期肾病患者腹膜透析治疗引起的一种严重并发症。上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是早期腹膜纤维化的一个促成因素。本研究旨在探讨长链非编码RNA(LncRNA)OIP5-AS1在高糖培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)中的作用及相关机制。方法:用OIP5-AS1 siRNA转染RPMC,然后用高糖(high glucose,HG)孵育。应用Transwell法测定RPMC的迁移能力。通过免疫荧光和α-SMA抗体评估RPMC的转分化能力。应用RT-qPCR分析OIP5-AS1、α-SMA、波形蛋白、E-钙黏蛋白、TGF-β_(1)、CTGF和Ⅰ型胶原的基因表达。结果:在HG孵育的RPMC中OIP5-AS1的表达升高。OIP5-AS1沉默降低了HG处理后RPMC的迁移能力,减弱了HG诱导的EMT和转分化。此外,OIP5-AS1沉默降低RPMC分泌的TGF-β_(1),并抑制TGF-β_(1)、CTGF和Ⅰ型胶原的mRNA表达。结论:LncRNA OIP5-AS1通过TGF-β_(1)途径调节EMT、转分化以及迁移。OIP5-AS1是一种新发现的LncRNA,可能与腹膜纤维化的EMT过程有关。

宫颈鳞状细胞癌免疫细胞浸润及OIP5基因失调对疾病进展的生物学意义探讨

基于GEO和TCGA数据库挖掘宫颈鳞状细胞癌的核心基因,研究宫颈鳞状细胞癌免疫细胞浸润情况,探究OIP5基因失调对疾病进展的生物学意义。方法 下载宫颈鳞状细胞癌组织和正常组织的基因表达谱数据,筛选出差异基因进行功能和通路富集;并构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,筛选出关键基因,对其进行总体生存率分析。通过免疫细胞浸润打分,获得免疫细胞矩阵,筛选有统计学意义的免疫细胞浸润。结果 本研究通过GEO 和 TCGA 数据库挖掘,共筛选出 172个差异基因, 31个核心基因 基因。鉴定宫颈鳞状细胞癌中核心基因及特异信号通路,发现ZWINT、CDK1、OIP5和 MCM2等基因表达异常,并且可能和宫颈鳞状细胞癌的发生发展密切相关。免疫细胞浸润分析发现多数免疫细胞在宫颈鳞状细胞癌组织中的浸润程度较低,而某些关键基因与免疫调节密切相关。通过对KEGG结果以及筛选出的核心基因进行功能分析发现,而OIP5可能通过调控细胞周期、染色体的维护、核小体组装等通路等影响宫颈鳞状细胞癌的正常功能,进一步揭示了宫颈鳞状细胞癌的发病机制。结论 通过分析发现,ZWINT、CDK1、OIP5和 MCM2等基因可能和宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切。OIP5可能在宫颈鳞状细胞癌疾病进展中具有重要的意义。

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和裂解的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验确认miR-25-3p与lncRNA OIP5-AS1和SOX4的靶向关系。结果 与NG组相比,HG组细胞中lncRNA OIP5-AS1和SOX4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-25-3p水平降低(P<0.05);敲低lncRNA OIP5-AS1可显著下调SOX m RNA和蛋白水平,上调miR-25-3p水平,增加HK-2细胞活力和SOD、CAT活性以及Bcl-2蛋白水平,降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA、ROS水平、Bax蛋白水平及Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(P<0.05);上调miR-25-3p表达与敲低lncRNA OIP5-AS1的作用一致;在敲低lncRNA OIP5-AS1的基础上,下调miR-25-3p可明显减弱lncRNA OIP5-AS1敲低对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示lncRNA OIP5-AS1和miR-25-3p,以及miR-25-3p和SOX4之间存在结合位点。结论 lncRNA OIP5-AS1可能通过miR-25-3p/SOX4轴促进高糖诱导的HK-2细胞损伤。

敲除OIP5-AS1基因通过miR-7-5p/PARP1轴增强非小细胞肺癌细胞的化学敏感性

目的探讨OIP5-AS1基因对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞化学敏感性的作用及分子机制。方法采用CCK-8法检测正常肺细胞系BEAS-2B、肺癌细胞系A549和顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP的半抑制浓度(IC50)值。应用RT-qPCR检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的表达水平。生物信息学检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的靶向关系,用荧光素实验进一步验证。Western blot法检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成检测细胞生长情况。结果A549/DDP细胞中IC50值最高,且OIP5-AS1高表达,miR-7-5p低表达。miR-7-5p是OIP5-AS1的靶向调节基因之一,且为负调控关系。敲除OIP5-AS1抑制A549/DDP细胞的生长并增强化学敏感性,促进A549/DDP细胞凋亡。敲除OIP5-AS1下调PARP1可以增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。结论OIP5-AS1通过上调miR-7-5p或下调PARP1,增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。

lncRNA OIP5-AS1在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及对缺氧缺糖复供诱导的细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)Opa相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及其对缺氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法构建脑缺血再灌注大鼠模型,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测脑组织中OIP5-AS1水平。PC12细胞分成Control组(空白对照)、OGD/R组(OGD/R处理)、Vector+OGD/R组(转染阴性对照载体,OGD/R处理)、OIP5-AS1+OGD/R组(转染OIP5-AS1过表达载体后以OGD/R处理)、OIP5-AS1+OGD/R+LY294002组[转染OIP5-AS1过表达载体,并以磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号抑制剂LY294002处理,之后进行OGD/R处理]。CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2、磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平。结果脑缺血再灌注大鼠模型脑组织中OIP5-AS1表达水平降低。与Control组比较,OGD/R组PC12细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低,SOD活性降低,MDA和ROS水平升高(均P<0.05)。与Vector+OGD/R组比较,OIP5-AS1+OGD/R组PC12细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt升高,SOD活性升高,MDA和ROS水平降低(均P<0.05)。与OIP5-AS1+OGD/R组比较,OIP5-AS1+OGD/R+LY294002组PC12细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,SOD活性降低,MDA和ROS水平升高(均P<0.05)。结论OIP5-AS1在脑缺血再灌注大鼠模型中表达下调,上调OIP5-AS1可抑制OGD/R诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤,其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关。

OIP5-AS1和miR-410在胶质瘤中的表达及调控机制

目的对比OIP5-AS1和miR-410在胶质瘤与正常脑组织中表达的差异并探讨OIP5-AS1与miR-410的关系及作用机制。方法收集胶质瘤患者标本65例,脑组织标本10例作为对照组。通过qRT-PCR方法检测2组标本中OIP5-AS1和miR-410的表达情况并进行比较。通过Starbase 2.0预测:OIP5-AS1与miR-410的关系。通过双荧光素酶报告基因检测miR-410和OIP5-AS1的靶向关系。结果与正常组织比较,胶质瘤组织中OIP5-AS1的表达水平明显升高,miR-410的表达明显降低(P<0.05)。OIP5-AS1在高级别胶质瘤组的表达显著高于低级别组,miR-410的表达趋势相反。相关性分析结果示,OIP5-AS1表达与miR-410表达呈负相关。Starbase 2.0预测:OIP5-AS1是调节miR-410的分子海绵。双荧光素酶活性测定:miR-410 mimics显著下调OIP5-AS1-wt的荧光素酶活性(P<0.05)。结论胶质瘤组织中OIP5-AS1的表达水平明显升高,miR-410的表达明显降低,且OIP5-AS1和miR-410的表达与胶质瘤的病理分级相关。OIP5-AS1表达与miR-410表达呈负相关,两者存在靶向调节关系。

OIP5-AS1和miR-410对胶质瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的通过建立OIP5-AS1 siRNA和miR-410抑制剂转染的U87细胞系,探讨OIP5-AS1和miR-410抑制剂对胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法通过Lipofectamine-2000转染人胶质细胞瘤细胞系U87细胞。将细胞分为5组:对照组(未转染细胞)、NC组(转染NC序列的细胞)、OIP5-AS1 siRNA组(转染OIP5-AS1 siRNA的细胞)、miR-410抑制剂组(转染miR-410抑制剂的细胞)、OIP5-AS1 siRNA+miR-410抑制剂(siRNA+inhibitor)组(转染OIP5-AS1 siRNA和miR-410抑制剂的细胞)。通过MTT法检测5组U87细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭力,Wound-healing实验检测细胞迁移。结果OIP5-AS1 siRNA组细胞增殖较对照组明显受到抑制(P<0.05)。miR-410抑制剂组细胞增殖较对照组明显增强(P<0.05)。与OIP5-AS1 siRNA组比较,siRNA+inhibitor组增殖显著增加(P<0.05)。与对照组比较,OIP5-AS1 siRNA组G0/G1期的细胞比例显著增高,而S期的细胞比例降低,细胞凋亡率明显升高差异均有统计学意义(P<0.05);在miR-410抑制剂组G0/G1期的细胞比例降低,S期的细胞比例显著升高,细胞凋亡率明显降低差异均有统计学意义(P<0.05)。与OIP5-AS1 siRNA组比较,siRNA+inhibitor组G0/G1期细胞明显减少,S期细胞比例增加,凋亡率降低(P<0.05)。各组G2期所占比例无显著差异。OIP5-AS1 siRNA组的侵袭细胞数量和划痕修复能力显著降低,而miR-410抑制剂组的侵袭细胞数量和划痕修复能力显著升高(P<0.05)。siRNA+inhibitor组在这两个指标上均高于OIP5-AS1 siRNA组(P<0.05)。结论沉默OIP5-AS1可抑制U87细胞的增殖、侵袭和迁移。下调OIP5-AS1表达可诱导U87细胞在G0/G1期停滞和凋亡。miR-410抑制剂可逆转OIP5-AS1 siRNA对U87细胞的生物学作用。

OIP5基因在肾癌细胞中的作用及索拉非尼对Raf1/OIP5通路的影响

目的探讨OIP5基因在肾癌中的作用机制及索拉非尼对Raf1/OIP5通路的影响。方法利用CCK-8及细胞迁移实验来检测上调OIP5基因前后细胞的增殖活力及迁移能力,并利用侵袭实验来检测下调OIP5基因前后细胞的侵袭能力。在786-O细胞中下调Raf1基因后,检测OIP5基因的RNA及蛋白的表达情况。利用5μmol/L和10μmol/L的索拉非尼作用于786-O细胞48h后,检测Raf1和OIP5基因的表达情况。结果上调OIP5基因后786-O细胞的增殖活力及迁移能力都明显增强。下调OIP5基因后786-O细胞的侵袭能力明显减弱。下调Raf1基因后,OIP5基因的RNA及蛋白水平都明显下调。利用5μmol/L和10μmol/L的索拉非尼作用于786-O细胞48h后,Raf1及OIP5的表达均明显下调。结论 OIP5基因在肾癌中起到类似癌基因的作用,索拉非尼可以通过Raf1/OIP5通路发挥其抗肿瘤的作用。

lncRNA OIP5-AS1通过海绵吸附miR-143-3p调控COL1A1促进胃癌发展

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)Opa相互作用蛋白5反义RNA1(OIP5-AS1)对胃癌发展的调控机制。方法qRT-PCR检测lncRNA OIP5-AS1在正常胃细胞系(GES-1)和胃癌细胞系(AGS和SGC7901)中的表达水平;构建OIP5-AS1敲低载体、miR-143-3p抑制剂(miR-143-3p inhibitor)以及Ⅰ型胶原α1(COL1A1)敲低载体并转染胃癌细胞系,运用CCK-8实验、伤口愈合实验、Transwell实验检测lncRNA OIP5-AS1、miR-143-3p、COL1A1在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭中的作用;采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR、Western blot实验检测lncRNA OIP5-AS1以及miR-143-3p、COL1A1之间的靶向调控作用。结果OIP5-AS1在胃癌细胞AGS、SGC7901中表达水平分别是GES-1细胞的6.10和5.53倍,差异有统计学意义(P<0.01)。同时,敲低OIP5-AS1会抑制胃癌细胞增殖[AGS:(0.71±0.07)比(1.20±0.11);SGC7901:(1.02±0.10)比(1.80±0.10),P均<0.05]、迁移[AGS:(29.01±3.68)%比(72.04±6.82)%;SGC7901:(23.97±2.24)%比(62.02±3.73)%,P均<0.01]和侵袭[AGS:(35.68±6.96)个比(278.33±11.85)个;SGC7901:(62.74±12.77)个比(248.65±12.03)个,P均<0.01]。双荧光素酶报告基因证实OIP5-AS1靶向作用miR-143-3p并下调其表达水平,miR-143-3p可负调控COL1A1的表达(P<0.01)。进一步研究发现,敲降OIP5-AS1通过靶向上调miR-143-3p对COL1A1的抑制作用,抑制胃癌细胞增殖[AGS:(0.73±0.05)比(1.14±0.10);SGC7901:(1.21±0.09)比(1.59±0.09),P均<0.01]、迁移[AGS:(28.00±4.32)%比(73.67±4.50)%;SGC7901:(24.33±2.05)%比(67.67±4.11)%,P均<0.01]和侵袭[AGS:(57.00±6.16)个比(261.33±16.42)个;SGC7901:(65.00±7.26)个比(249.33±10.66)个,P均<0.01]。结论lncRNA OIP5-AS1通过海绵吸附miR-143-3p进而上调COL1A1促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,为胃癌临床诊断与治疗提供了潜在的标靶。

干扰LncRNA OIP5-AS1对人乳腺癌细胞迁移、上皮间充质转化及Notch1表达的影响

目的 探讨干扰LncRNAOIP5-AS1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、上皮间充质转化及Notch1表达的影响。方法 培养MDA-MB-231细胞,转染LncRNA OIP5-AS1 siRNA为LncRNA OIP5-AS1 siRNA组,转染NC siRNA的为NC siRNA组,未作任何处理的为Control组;采用RT-qPCR方法检测各组细胞LncRNAOIP5-AS1的表达水平;采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;Western blots法检测LncRNA OIP5-AS1被干扰后乳腺癌细胞上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达变化;T-qPCR方法检测Notch1 mRNA的表达水平。结果 通过siRNA技术使LncRNA OIP5-AS1的表达受到抑制;LncRNA OIP5-AS1被干扰后,乳腺癌细胞的迁移能力降低,与Control组和NC siRNA组比,LncRNA OIP5-AS1 siRNA组细胞迁移能力受抑制更加明显(P<0.01);Western blots结果显示:与Control组和NC siRNA组相比,LncRNA OIP5-AS1 siRNA组细胞的E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),而Vimentin蛋白表达水平降低(P<0.05);Notch1 mRNA的表达也受到抑制(P<0.01)。结论 LncRNA OIP5-AS1很可能通过对Notch信号通路的调控,从而实现对乳腺癌细胞的迁移能力及上皮间充质转化的抑制作用。

H3K27ac促进lncRNA OIP5-AS1的表达进而诱导食管鳞癌放射抵抗的产生

目的本研究旨在探索放射相关H3组蛋白修饰调控OIP5-AS1的分子机制,从而为逆转食管鳞癌放射抵抗提供依据。方法本研究纳入137例西安医学院第一附属医院食管鳞癌患者标本。qRT-PCR及Western blotting检测目的基因的表达。划痕实验及CCK8实验检测细胞迁移及增殖能力。应用ChIP检测OIP5-AS1与H3K27ac的结合情况。结果OIP5-AS1在食管癌放疗抵抗患者中高表达;且促进食管癌抵抗细胞的增殖及转移能力。H3K27ac在食管癌放射抵抗细胞中高表达,且富集于OIP5-AS1的启动子区域。CBP在食管癌放射抵抗细胞中高表达;其抑制剂C646可明显抑制H3K27ac在OIP5-AS1启动子区域的富集。结论OIP5-AS1参与调控食管鳞癌放射抵抗。CBP通过促进H3K27ac与OIP5-AS1的结合,进而激活OIP5-AS1的表达,从而促进放射抵抗的产生。

人脑胶质瘤中OIP5和CTCFL的表达及临床意义

目的检测癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OIP5和CTCFL mRNA在人脑胶质瘤(以下简称胶质瘤)中的表达,探讨OIP5和CTCFL作为胶质瘤免疫治疗靶抗原的可能性。方法用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测92例胶质瘤组织中OIP5和CTCFL mRNA的表达水平;分析其表达与胶质瘤患者临床病理特征的相关性。结果在92例胶质瘤组织中,OIP5和CTCFL mRNA的阳性表达率分别为18.47%(17/92)和20.65%(19/92);DNA测序结果证实RT-PCR产物为OIP5和CTCFL基因c DNA的扩增片段。OIP5和CTCFL mRNA的表达与胶质瘤患者的性别、年龄、病理分级、组织学类型和卡氏评分等临床指标均无关(P>0.05)。结论OIP5和CTCFL mRNA在胶质瘤组织中的阳性表达率不高,能否作为胶质瘤免疫治疗的新靶点有待进一步评估。

癌-睾丸抗原OIP5的研究进展

癌-睾丸抗原（cancer-testis antigen,CTA）是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,自从VANDER BRUGGEN等[1]发现首个CTA（MAGE-A1）后,多种CTA相继被发现,目前已有200多个CTA在CTA数据库中注册（http：//www.cta.lncc.br/）。由于CTA能在多种肿瘤组织中表达,

MicroRNA-653靶向调控OIP5基因介导mTOR信号通路对非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨microRNA-653(miR-653)靶向调控OIP5基因介导mTOR信号通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学特性的影响。方法:选取人正常内皮细胞BEAS-2B和4种NSCLC细胞系(H1650、H1975、A549和H292),分为control组、mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组进行瞬时转染,利用荧光定量PCR、蛋白印迹、MTT、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术等方法分析miR-653对NSCLC细胞中OIP5、mTOR信号通路相关基因表达及增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期分布的影响。结果:与control组、mimics-NC组和inhibitor-NC组相比,mimics组mTOR信号通路被抑制,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,凋亡率明显增加,细胞多停滞于G1期(均P<0.05);然而,inhibitor组mTOR信号通路被激活,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显升高,而凋亡率明显降低,G1期细胞数量较少(均P<0.05)。结论:miR-653可通过负调控OIP5基因抑制mTOR通路激活,从而阻止NSCLC的发生与发展。

Linc-OIP5调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的本研究旨在探讨linc-OIP5与乳腺癌恶性程度的关系,以及对乳腺癌细胞生物学功能的影响。方法采用RT-PCR方法检测linc-OIP5在不同恶性程度的乳腺癌细胞系中的表达情况;采用转染si RNA方法干扰乳腺癌细胞中的linc-OIP5基因,后以RT-PCR方法检测干扰效率;采用CCK8方法检测乳腺癌细胞的增殖能力;以及Transwell细胞侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果乳腺癌细胞中linc-OIP5的表达量与细胞的恶性程度呈正相关。在细胞功能实验中,与对照组相比,linc-OIP5干扰组细胞的增殖和侵袭能力均减弱。结论 Linc-OIP5在乳腺癌中起到致癌基因的作用,可以调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检测OIP5-AS1和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常细胞肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2170中OIP5-AS1表达显著增加,miR-511-3表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);敲低OIP5-AS1或者过表达miR-511-3p显著抑制了肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭;OIP5-AS1可以靶向负调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以部分回复敲低OIP5-AS1对肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 LncRNA OIP5-AS1通过靶向调控miR-511-3p的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

OIP5反义RNA 1靶向调控微小RNA-200b-3p对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA OIP5反义RNA 1(OIP5-AS1)靶向调控微小RNA-200b-3p(miR-200b-3p)在食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和凋亡中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测ESCC组织和细胞的OIP5-AS1和miR-200b-3p水平。双荧光素酶报告基因实验鉴定OIP5-AS1与miR-200b-3p之间的相互作用。将靶向OIP5-AS1的小干扰RNA序列si-OIP5-AS1、miR-200b-3p抑制物(inhibitor)单独或共转染EC109细胞,qPCR验证转染效果后采用MTT法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测EC109细胞的增殖和凋亡情况。结果 与癌旁组织比较,ESCC组织的OIP5-AS1水平升高而miR-200b-3p水平降低(P<0.05),且两者水平呈负相关性(r=-0.415,P<0.001)。与HET-1A细胞相比,ESCC细胞的OIP5-AS1水平上调而miR-200b-3p水平下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验结果显示OIP5-AS1可靶向结合miR-200b-3p。与未转染细胞相比,EC109细胞转染si-OIP5-AS1后的凋亡率升高且细胞活力减弱,而转染miR-200b-3p inhibitor后的凋亡率降低且细胞活力增强,上述差异有统计学意义(P<0.05);共转染后的凋亡率和细胞活力与未转染细胞的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OIP5-AS1通过抑制miR-200b-3p进而诱导ESCC细胞增殖和抑制细胞凋亡,并在ESCC的发展中起到肿瘤启动因子的作用,OIP5-AS1/miR-200b-3p轴有望成为ESCC的防治靶点。