OK-432激活抗原负载的树突细胞对CIK细胞的作用

目的:探讨OK鄄432对人类外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外培养的影响,及由此产生的DC对CIK细胞抗瘤效果的影响。方法:从PBMC中分离出CD14+的DC前体细胞,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM鄄CSF)和白细胞介素4(IL鄄4)的作用,得到不成熟DC,再予以负载肿瘤抗原及经促成熟因子(MPF)OK鄄432或LPS的刺激后得到成熟DC。同时将PBMC在细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。通过对DC表面标志物的分析、经DC作用的CIK增殖活性、抗瘤效果的检测,研究了不同MPF对DC成熟和功能的影响。结果:OK鄄432可促进体外培养的DC高表达CD1a、CD80、CD83、HLA鄄DR,其作用强于LPS;经OK鄄432作用的负载抗原的DC可促进CIK增殖、加强CIK的抗瘤效率。结论:OK鄄432可促进体外培养的DC成熟,并借此增强CIK的抗瘤作用。

OK-432对荷瘤小鼠脾细胞IL-12及Th1细胞因子分泌的诱导作用

目的 :探讨溶血链球菌冻干制剂OK 4 3 2的抗肿瘤机理。方法 :B16黑色素瘤细胞接种于C5 7BL/ 6小鼠皮下 ,3d后腹腔注射 1KU的OK 4 3 2 ,每周 1次 ,连续 3周。观察肿瘤生长体积及荷瘤小鼠的生存期 ,并测定了OK 4 3 2在体内、体外对荷瘤小鼠脾细胞IL 2 ,IL 4 ,IL 6,IL 10 ,IL 12 ,IFN γ分泌的影响。结果 :OK 4 3 2能显著抑制B16黑色素瘤的生长 ,延长荷瘤小鼠的生存期 (P <0 .0 5 ) ;在体外OK 4 3 2可刺激荷瘤小鼠脾细胞IL 6,IL 10 ,IL 12 ,IFN γ的分泌 (P <0 .0 1) ;腹腔注射OK 4 3 2后荷瘤小鼠脾细胞IL 2 ,IL 12 ,IFN γ的分泌显著增加 ,而IL 10显著减少 (P <0 .0 5 ) ,提示OK 4 3 2治疗后荷瘤小鼠脾细胞Th1增加 ,Th2 相对减少。结论 :OK 4 3 2在体内可通过诱导荷瘤小鼠脾细胞IL 12的分泌 ,促进Th0向Th1分化 ,使宿主的免疫功能处于Th1优势状态 。

生物胶联合OK-432和平阳霉素治疗面颈部巨大静脉畸形

目的:评价生物胶联合OK-432和平阳霉素治疗面颈部巨大静脉畸形的临床疗效。方法:26例面颈部巨大静脉畸形患者,男11例,女15例;年龄4～23岁,平均年龄11.8岁。通过注射生物胶联合OK-432和平阳霉素进行治疗。所有病例均只接受1次治疗。结果:除术区2～3周肿胀外,均无严重并发症出现。随诊6～12个月(平均8.4个月),19例治愈,5例显效,2例有效,无无效病例。结论:生物胶联合OK-432和平阳霉素经皮硬化术治疗面颈部巨大静脉畸形,效果良好,并且简单、安全和可靠。

顺铂联合甘露聚糖肽与联合OK-432胸腔注射治疗恶性胸腔积液的临床分析

[目的]对比观察中心静脉导管胸腔引流并顺铂联合甘露聚糖肽(多抗)或OK-432(沙培林)治疗恶性胸腔积液的临床疗效和毒副反应。[方法]99例恶性胸腔积液病人,随机分为2组:甘露聚糖肽组(A组)53例,OK-432组(B组)46例。行中心静脉导管胸腔引流术,A组胸腔注射甘露聚糖肽和顺铂,B组胸腔注射OK-432和顺铂。两组均每周重复,连续2～4周。[结果]A组RR43例(81.1%),B组RR39例(84.8%),两组有效率无统计学差异(P=0.631)。A组有3例(5.7%)病人发热,B组有24例(52.2%)病人发热(P<0.001)。[结论]中心静脉导管胸腔引流并顺铂联合甘露聚糖肽或OK-432治疗恶性胸腔积液均较安全且方便,临床疗效相似,但沙培林组发热的发生率远高于甘露聚糖肽组。

几种疾病外周血单核细胞对OK-432增殖反应的比较

目的研究掌跖脓疱病(pustulosis palmaris et plantaris,PPP)、寻常型银屑病(psoriasis vulgaris,PV)、泛发性脓疱型银屑病(generalized pustular psoriasis,GPP)、连续性肢端皮炎(acrodermatitis continua,AC)患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)对白介素-2(interleukin-2,IL-2)或链球菌粉干制剂OK-432的增殖反应,探讨几种疾病的关系。方法分离提取PPP、GPP、PV、AC及健康患者PBMC,分别加入IL-2或OK-432,第6天MTT法检测细胞增殖活力并测定DNA含量。结果PPP、GPP、PV、AC患者与健康对照组的PBMC对IL-2的增殖反应相比较无统计学差异(P>0.05)。而GPP、PV、AC患者的PBMC对OK-432呈低增殖反应,与健康对照组或PPP组有统计学差异(P<0.01)。PPP患者的PBMC对OK-432呈高增殖反应,与健康对照组无统计学差异(P>0.05)。结论PPP和健康对照组对OK-432的反应相似,而与其它几种疾病反应不同,提示PPP与其它几种疾病可能存在不同的发病背景。

纤维蛋白胶联合OK-432和博来霉素经皮硬化治疗头颈部大囊型淋巴管畸形

目的:评估纤维蛋白胶联合OK-432和博来霉素治疗头颈部大囊型淋巴管畸形的临床效果。方法 :回顾分析15例经皮硬化治疗巨大淋巴管畸形患者,男6例、女9例,年龄13个月～14岁(平均6.1岁)。治疗区域包括颈部(6例)、腮腺区和咽旁(4例)、口底(2例)、面颊部(2例)和眶区(1例)。病变大小4 cm×5 cm～12 cm×16 cm(平均7.7cm×9.5 cm)。全麻下注射纤维蛋白胶和OK-432、博来霉素混合物。术前、术后采用CT扫描,并由3名口腔颌面外科医师组成的小组评估其治疗效果。结果:术后3～4周面部肿胀,无其他严重并发症。随访8～16个月(平均11.5个月),8处病变完全治愈,5处大部分治愈,2处部分治愈。结论:纤维蛋白胶联合OK-432和博来霉素经皮硬化治疗头颈部大囊型淋巴管畸形是一种安全、可靠的治疗手段。

OK-432联合IL-2对C_(57)BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及c-fos蛋白的表达

目的研究 OK- 432与 IL- 2抑制近交系小鼠 C5 7BL/ 6 L ewis肺癌 (L L C)的生长及 c- fos蛋白的表达。方法以 C5 7BL/ 6荷瘤 L L C小鼠为模型 ,观察 OK- 432联合 IL- 2对肿瘤发生、生长、转移的影响 ,体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠 c- fos单克隆抗体进行 SABC免疫组化技术半定量测定 c- fos在 L ewis肺癌原发灶中的表达。结果二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强 (P<0 .0 1) ,增强抑瘤率 (P<0 .0 5 ) ,肺转移灶数目明显减少。电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞 ,瘤细胞核染色质浓集成块 ,在核膜内呈新月形或环形排列 ,核膜清楚 ,瘤细胞内质网扩张 ,线粒体肿胀。c- fos在联合用药组与对照组比较明显减少 (P<0 .0 1)。结论 OK- 432与 IL- 2有明显的协同抗肿瘤活性 ,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击 ,和促进体内对多种反应细胞的相互作用 ;部分原因可能阻抑 c- fos癌基因的表达 ;提示 OK- 432联合 IL-

OK-432增强脐血树突状细胞瘤苗抗胃癌作用的实验研究

目的:用脐血浆代替胎牛血清,观察OK-432对脐血来源的树突状细胞(DCs)功能的影响,探讨制备高效抗肿瘤DCs疫苗的优化方案。方法:分离脐血单个核细胞并在含10%同源脐血浆、GM-CSF和IL-4的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性,LDH法检测DCs诱导的CTL对不同靶细胞的细胞毒作用。结果:收集第9 d的各组DCs,肿瘤冻融抗原冲击后的DCs呈成熟形态,能呈递胃癌相关抗原给淋巴细胞刺激其增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTL毒性。OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击能增强其抗原呈递功能,诱导更强的混合淋巴细胞增殖反应及针对胃癌细胞株的强烈CTL杀伤效应。结论:该DCs培养方案具有培养时间短、细胞因子消耗少、试剂简单等优点,可用于制备DCs肿瘤疫苗,有临床应用价值。

OK-432联合IL-2对C_(57)BL/6小鼠Lew is肺癌的抑制作用及p21的表达

目的 研究 OK- 432与 IL - 2抑制近交系小鼠 C5 7BL / 6 L ewis肺癌 (L L C)的生长及 p2 1的表达。 方法 以 C5 7BL / 6荷瘤 L L C小鼠为模型 ,观察 OK- 432联合 IL - 2对肿瘤发生、生长、转移的影响 ,体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠 p2 1单克隆抗体进行 SABC免疫组化技术半定量测定 p2 1在 L ewis肺癌原发灶中的表达。 结果 二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强 (P<0 .0 1) ,增强抑瘤率 (P<0 .0 5 ) ,肺转移灶数目明显减少。电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞 ,瘤细胞核染色质浓集成块 ,在核膜内呈新月形或环形排列 ,核膜清楚 ,瘤细胞内质网扩张 ,线粒体肿胀。 p2 1在联合用药组表达明显减少。 结论 OK- 432与 IL - 2有明显的协同抗肿瘤活性 ,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击 ,部位原因可能阻抑 ras癌基因的激活 ,诱导瘤细胞凋亡 ;提示 OK- 432联合 IL -

OK-432和IL-2联合用药对C_(57)BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及Bcl-2表达的影响

目的 研究A组溶血性链球菌冻干生物制剂OK-432联合白细胞介素2（IL-2）对小鼠C57BL/6Lewis 肺癌（LLC）生长的抑制作用及对Bcl-2表达的影响。方法 将40只C57BL/6荷瘤LLC小鼠分4组，分别用生理盐水、OK-432、IL-2和OK-432联合IL-2处理，观察用药后肿瘤生长的状况, 用抗鼠bcl-2单克隆抗体进行SABC免疫组化技术半定量测定Bcl-2在Lewis肺癌原发灶中的表达。结果 OK-432/IL-2抑制肿瘤作用强，抑瘤率为60%，（P<0.05）。对照组中的Bcl-2的表达明显高于联合用药组（P<0.05）。结论 OK-432与IL-2有明显的协同抗肿瘤活性，其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击，并促进体内多种反应细胞相互作用，其机制可能与抑制Bcl-2基因的表达、诱导瘤细胞的凋亡有关。

OK-432治疗晚期乳腺癌临床疗效观察

目的 :观察、分析OK 4 32在晚期乳腺癌治疗中的近期疗效。方法 :选择我院门诊就医的晚期乳腺癌患者 18例 ,应用OK 4 32作临床治疗 ,取病情相似的患者 10例作统计配对 ,观察其治疗效果并作分析。结果 :治疗组的有效率为 94 .5% ,对照组中除 1例稳定外 ,其他病例的病情均恶化。OK 4 32的治疗效果明显好于对照组。结论 :OK 4 32治疗晚期乳腺癌的近期疗效优于一般支持治疗。

OK-432联合聚肌胞诱导小鼠树突状细胞成熟及其抗损伤作用

目的比较体外单独或联合应用TLR配体-沙培林(OK-432)、聚肌胞对树突状细胞(DCs)成熟状态的影响,并将DCs与小鼠前胃癌细胞上清液共培养,检测DCs存活率,探讨OK-432联合聚肌胞对小鼠前胃癌细胞上清液诱导树突状细胞损伤的保护作用及机制。方法采用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CFS)联合重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4),诱导小鼠骨髓源性的单个核细胞分化为未成熟的DCs(imDCs),分别经OK-432、聚肌胞或OK-432联合聚肌胞诱导DCs成熟,未成熟或成熟的DCs分别与不同浓度的小鼠前胃癌细胞上清液共培养24 h。电镜及光镜观察DCs的细胞形态变化,流式细胞仪检测DCs CD83和CD86的表达情况,ELISA法测定上清液中IL-12的分泌水平,MTT法测定DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性以及DCs与不同浓度小鼠前胃癌细胞上清液共培养24 h后的活性,免疫组化法检测DCs锌指蛋白A20(A20)的表达水平。结果联合刺激组DCs的形态学,表面抗原CD83和CD86的表达率,IL-12的分泌量及刺激淋巴细胞增殖的能力均显著高于其它处理组;小鼠前胃癌细胞上清液能损伤DCs,联合刺激组DCs的成活率均高于其它处理组,且其成活率与A20蛋白的表达量成正比。结论OK-432联合聚肌胞能有效诱导DCs成熟;OK-432联合聚肌胞对小鼠前胃癌细胞上清液诱导树突状细胞的损伤有保护作用,其机制与上调A20蛋白表达增高有关。

OK-432增强人腹腔抗癌免疫功能的研究

目的 探讨腹腔内注射OK - 4 32增强腹腔免疫功能的机制。方法 选择非炎症和非肿瘤手术患者作为实验对象 ,实验组分别于手术前 72小时、4 8小时和 2 4小时腹腔内注射 4KE的OK - 4 32。开腹后采集腹腔内巨噬细胞 ,并用人胃癌MKN1细胞作为靶细胞对巨噬细胞的癌细胞毒性进行分析。同时采集大网膜 ,对大网膜乳斑的数量和面积进行了观察分析。结果 OK - 4 32显著增加了腹腔内巨噬细胞的数量 (P <0 .0 5 )、增强了巨噬细胞的吞噬活性和酶活性 (P <0 .0 5 )、增加了NO的分泌和巨噬细胞的癌细胞毒性 (P <0 .0 5 ) ,以及大网膜乳斑的数量和面积 (P <0 .0 5 )。结论 手术前腹腔内注射OK - 4 32可以作为预防癌细胞腹腔内种植转移的有效方法。

抑制SOCS1联合OK-432刺激的DC疫苗抗肿瘤效应的初步研究

背景与目的:细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling1,SOCS1)在肿瘤免疫负反馈调节中起重要作用,下调其表达可以有效增强机体的抗肿瘤免疫反应。本研究应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调SOCS1基因表达联合OK-432刺激成熟的树突细胞(dendritic cell,DC)体外诱导特异性抗肿瘤作用,初步探讨其作用机制。方法:利用特异性小干扰RNA(siRNA)下调DC中SOCS1的表达,同时用肝癌HepG2细胞裂解物负载DC,OK-432刺激DC成熟,观察DC的形态特征,流式细胞仪检测刺激前后DC的表型变化,奥马蓝(AlamarBlue)法检测成熟DC对自身淋巴细胞的激活和增殖作用,LDH法检测其对HepG2、EC109细胞和K562细胞的杀伤作用。结果:DC体外诱导培养成功,设计的siRNA片段能有效下调iDC中SOCS1的表达,OK-432刺激DC成熟,CD80、CD83、CD86、HLA-DR等DC表面抗原明显表达上调,而负载肝癌抗原对DC表型无明显影响;SOCS1的下调可以促进DC成熟,负载肝癌抗原的DC能有效刺激自体淋巴细胞增殖,T细胞增殖率为(110.7±22.2)%,同时产生针对HepG2细胞的特异性杀伤作用,特异性细胞毒T淋巴细胞活性为(54.0±13.2)%。而针对EC109细胞和K562细胞的杀伤率仅为(10.0±30.7)%和(14.5±15.5)%。结论:RNAi下调SOCS1表达,OK432刺激负载肝癌全细胞抗原的成熟DC可以产生高效而特异性的抗肝癌的免疫应答。

经链球菌菌体制剂OK-432刺激的树突状细胞对自然杀伤细胞增殖及功能的影响

目的:探讨经链球菌菌体制剂OK-432刺激的树突状细胞(Dendritic cells,DC)对自体自然杀伤细胞(Naturalkiller cells,NK)体外扩增和功能的影响。方法:将DC分为未成熟DC组和OK-432刺激的DC组,48小时后MTT法检测DC增殖情况,FCM检测DC表型CD80、CD83、CD86的表达情况;后将未成熟DC组和OK-432刺激的DC组分别与NK细胞以1∶1、1∶5、1∶10、1∶20、1∶40比例混合继续培养。0、2、4、6天时计算NK细胞扩增倍数;FCM检测NK细胞PFP、GraB、CD107a的表达;LDH释放法检测NK对HepG2细胞的杀伤活性。结果:OK-432(5μg/ml)使DC增殖达到最佳(30%),且能显著增强DC表型表达(P<0.05)。1∶5(OK-DC)组NK细胞扩增倍数达最大(P<0.05);1∶5(OK-DC)组能显著促进NK释放穿孔素(Pore-forming protein,PFP)、颗粒酶(Granzyme B,GraB)、CD107a(P<0.05);1∶5(OK-DC)组对HepG2细胞的杀伤活性(67.12±5.36)%达到最大(P<0.05)。结论:OK-432(终浓度5μg/ml)能促进DC增殖,并促进DC成熟;OK-DC与NK细胞共培养能以剂量依赖的方式增强NK细胞杀伤HepG2细胞功能,可能与增加NK扩增倍数和PFP、GraB、CD107a的表达有关。

OK432-肿瘤疫苗对DBA/2小鼠外周血中T细胞亚群的影响

目的探讨OK432-肿瘤疫苗对小鼠外周血T细胞亚群的影响。方法将36只DBA/2小鼠随机分为OK432-肿瘤疫苗组、OK432组及正常组,每组12只。培养细胞,制作疫苗后,对三组小鼠分别腹腔注射OK432-肿瘤疫苗、OK432及磷酸盐缓冲液(PBS),每周1次,连续3周。然后分别在1、3、7 d时眼球采血,利用流式细胞术检测外周血中的T细胞亚群的含量,采用SPSS 17.0软件进行数据处理。结果免疫后第3天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组、OK432组CD3+T细胞平均值分别为(55.31±2.06)%、(48.81±3.60)%、(47.21±3.51)%;CD4+T细胞平均值分别为(40.55±2.32)%、(34.91±1.04)%、(34.24±0.95)%;OK432-肿瘤疫苗组与正常组及OK432组CD3+、CD4+T细胞差异均有统计学差异(P<0.05)。免疫后第7天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组CD3+T细胞平均值分别为(36.26±1.98)%、(23.72±1.90)%;CD4+T细胞平均值分别为(27.11±0.87)%、(15.42±2.87)%;CD4+/CD8+的平均值分别为(3.47±0.33)%、(2.91±0.52)%,差异均有统计学差异(P<0.05);OK432-肿瘤疫苗组、OK432组CD8+T细胞的平均值为(7.85±0.98﹚%、(5.48±0.40)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OK432-肿瘤疫苗能够有效增强小鼠的细胞特异性免疫能力。

OK-432增强舌癌化疗效应的实验研究

本研究用火舌癌裸小鼠原位移植模型探讨OK－432对5一氟尿嘧啶和平阳霉素抗舌癌效应的影响，以寻找提高舌癌化疗效应的有效途经。荷瘤棵小鼠被随机分成对照组和实验组。结果表明：单用OK－432组，其抗癌效应无显著意义（P＞005）；与OK－432联用组抑瘤率和生命延长率均明显高于单用化疗组。提示：OK－432皮内注射可显著增强5-氟尿嘧啶和平阳霉素的抗瘤效应，明显改善症状，延长生存期。该方案值得在临床上广泛推广应用。

OK-432对5-氟尿嘧啶在小鼠体内药代动力学的影响

目的 :通过检测 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在小鼠体内的血药浓度 ,分析OK 4 32对 5 FU在小鼠体内药代动力学参数的影响。方法 :小鼠腹腔注射后定时采血 ,研究单用 5 FU及其联用OK 4 32后的药代动力学 ,并用反相高效液相色谱法精密检测血浆中 5 FU的浓度 ,用“3p97”程序计算药动学参数。 结果 :联用OK 4 32后 ,5 FU的时间浓度曲线下面积AUC增大 ,进入血循环总药量增加 ,消除速率半衰期t1 /2 β增加 ,作用时间延长。结论 :联用OK 4 32可使 5 FU在体内吸收减慢 ,达峰时间延迟 ,但吸收总量增加 ,消除延缓。

OK-432局部注射对兔舌下腺的影响

直视下将0.01mg/mlOK-432溶液1ml注射到兔的舌下腺,于注射后1、3、7d、2、4、8周切取舌下腺组织,在光镜和透射电镜下观察,发现OK-432注射到舌下腺后,早期引起急性炎性反应,然后舌下腺组织可出现纤维化,并有部分腺泡萎缩。说明OK-432可作为硬化剂治疗舌下腺囊肿。

OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响

目的利用DBA/2小鼠移植舌癌荷瘤模型,探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响。方法 ELISA定量检测脾脏淋巴细胞所产生的IFN-γ,IL-2,TNF-α等细胞因子的分泌水平。结果 OK-432肿瘤疫苗组中IFN-γ、IL-2以及TNF-α的含量明显高于实验对照组(P<0.05)。结论 OK-432肿瘤疫苗可刺激荷瘤小鼠脾脏细胞Th1细胞及TNF-α的分泌,增强DBA/2小鼠的抗肿瘤免疫功能。