低频脉冲磁场调节NO/ONOO-对缺氧/复氧条件下心肌细胞的保护作用

目的:观察低频脉冲磁场(LF-PMFs)对缺氧/复氧(H/R)条件下乳鼠心肌细胞增殖与凋亡的影响,并探讨一氧化氮/过氧亚硝基阴离子(NO/ONOO-)平衡在LF-PMFs保护心肌细胞的作用。方法:采用酶消化法分离SD乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、H/R组和磁场组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡程度,MTT比色法检测心肌细胞增殖活性,以观察LF-PMFs对损伤心肌细胞的效果,用WST-1法检测超氧阴离子,Griess法测定NO和ONOO-。结果:LF-PMFs磁场可减少H/R诱导的心肌细胞凋亡,并促进心肌细胞的存活,以15 Hz,4.5 mT LF-PMFs磁场的作用效果最为显著。同时LF-PMFs可减少H/R条件下乳鼠心肌细胞超氧阴离子的生成,促进NO生成,提高NO/ONOO-比值。结论:LF-PMFs可通过抗氧化及调节NO/ONOO-平衡减轻H/R导致的心肌细胞损伤。

血红蛋白-维生素B6-ONOO-体系的荧光特性及ONOO-分析

在中性pH值的缓冲溶液中，血红蛋白作催化剂，维生素B。与过氧亚硝酸活性氧（ONOO-）发生反应，维生素B。原来位于391nm处的强烈的荧光发射峰消失，而在384nm和424nm处出现了两个新的荧光峰。据此建立了血红蛋白～维生素B。体系高灵敏检测ONOO-活性氧的新方法。方法的线性范围为5．24×10^-8～2．62×10^-6mol／L，检出限为2．62×10^-9mol／L，对1．31×10^-7mol／L的ONOO^=溶液测定的相对标准偏差为3．759／6（n=7）。

褪黑素对过氧亚硝基反应体系的调控

目的 :通过检测MT对ONOO-、NO、O·-2 的影响 ,探讨MT对过氧亚硝基反应体系的调控作用。方法 :采用多种化学发光体系在体外检测。结果 :MT对ONOO-有很好的清除效应 (IC50 =15 μg/ml) ,对O·-2 有较好的清除作用 (IC50 =2 30 μg/ml) ,但对NO无清除作用 ;结论 :MT可能通过对过氧亚硝基反应体系的调控 。

Ebselen 抑制 ONOO^- 对神经元[Ca^(2+)]_i 的影响

Ｆｕｒａ－２显微荧光测钙技术研究发现，过氧亚硝基阴离子（ＯＮＯＯ－）作用于ＭＮ９Ｄ细胞，数ｓ内即可导致其胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的急剧升高．胞外液换为无钙液或向胞外液中加入硝苯吡啶（Ｎｉｆｅｄｉｐ－ｉｎｅ）、二硫苏糖醇（ＤＴＴ）均可抑制ＯＮＯＯ－对［Ｃａ２＋］ｉ的影响，提示Ｌ－型钙通道的激活是ＯＮＯＯ－引起［Ｃａ２＋］ｉ升高的主要原因，ＯＮＯＯ－的这种作用可能与其氧化特性有关．Ｅｂｓｅｌｅｎ（２－苯基－１，２－苯并异硒唑－３（２Ｈ）酮）明显抑制ＯＮＯＯ－对［Ｃａ２＋］ｉ的影响，并且存在一定的剂量效应关系．

氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒刺激诱导型一氧化氮合酶和过氧亚硝基阴离子生成的实验研究

目的研究和比较氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒在动物体内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)表达的变化,探讨其在人工假体无菌性松动病理过程的意义。方法昆明小鼠72只,随机均分为3组,构建小鼠air-pouch动物模型。实验组分别注射氧化铝陶瓷颗粒悬液3 m l(A组)和高分子聚乙烯颗粒悬液3m l(B组),对照组注射磷酸盐缓冲盐水3 m。l分别于注射后第3、7、14 d后各处死8只,取出air-pouch囊壁组织。光镜下观察囊壁组织病理变化,细胞计数反映炎性细胞浸润和增殖程度,免疫组化染色法观察iNOS及ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达与分布。结果光镜下实验组(A组和B组)可见大量巨噬细胞浸润和增殖,均存在iNOS、NT染色阳性细胞,而对照组未见明显组织细胞反应,仅见极少数染色呈阳性的细胞;与对照组相比,实验组细胞计数和iNOS、NT阳性细胞率差异均有显著性(P<0.01);各时间点细胞计数B组均高于A组(P<0.05);第14天时,B组iNOS、NT阳性细胞率明显高于A组(P<0.01);各时间点iNOS的表达与NT的表达呈正相关(r=0.623,P<0.05)。结论两种磨损颗粒均能诱导iNOS、ONOO-的表达,并且高分子聚乙烯颗粒高于氧化铝陶瓷磨损颗粒;过量的内源性NO和ONOO-可能与假体周围无菌性松动有关。

硝化应激参与介导缺血性脑损伤的研究进展

硝化应激(nitrosative stress)指机体对活性氮族(reactive nitrogen species,RNS)的高应激性,主要表现为病理过程中过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO-)过量生成,从而诱发细胞内蛋白质酪氨酸硝基化等分子事件,并最终导致细胞损伤或凋亡级联反应。缺血性脑损伤病理过程中,硝化应激稳态失衡与血脑屏障及神经血管单元破坏密切关联,近年来以抗硝化应激来进行神经血管保护的药物研究受到关注。通过减少ONOO-生成和清除过多的ONOO-来对抗硝化应激损伤将有可能成为防治缺血性脑血管病的策略之一。

肝肿瘤发生中过氧亚硝酸阴离子标志物作用

目的比较过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)对正常人胚肝细胞株L-02和肝母细胞瘤细胞株HepG2 DNA损伤和细胞毒性差异,探索ONOO-在肝肿瘤发生中的作用及可能标志物。方法0.01,0.05,0.1 mmol/L ONOO-作用细胞后,检测ONOO-对2株肝细胞的细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化,DNA损伤,生长抑制DNA损伤基因(GADD)表达的影响差异。结果ONOO-使2种肝细胞的生存率下降、SOD含量降低(P<0.05)和CAT、GSH的显著变化,显著升高MDA的含量;DNA损伤程度和GADD45、GADD153基因表达水平在2株肝细胞均随着剂量的增加显著升高。2种肝细胞相比,各浓度组L-02细胞损伤程度大于HepG2细胞,但只有GADD基因表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论ONOO-对正常肝细胞和肝癌细胞均显示细胞毒性作用,引起DNA损伤,诱导GADD表达。GADD基因表达水平在不同肝细胞中差异有统计学意义,可能是ONOO-细胞损伤效应的标志物。

痰浊阻遏证及脾肾阳虚证血脂异常患者椎、基底动脉血流动力学特点及其与ONOO^-浓度间的相关性研究

目的探讨痰浊阻遏证及脾肾阳虚证血脂异常患者椎、基底动脉血流动力学特点及其与过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO-)浓度指标的关系。方法在符合血脂异常诊断标准的基础上,通过中医证候辨识标准判断患者证候,其中痰浊阻遏证20例、脾肾阳虚证23例。采用经颅多普勒超声(trancranial doppler,TCD)测定43例血脂异常患者椎、基底动脉血流动力学指标,包含血流速度[收缩期峰值血流速度(peak systolic velocity,PSV)、舒张末期血流速度(end diastolic velocity,EDV)和平均血流速度(mean flow velocity,MFV)]以及搏动指数(pulsatility index,PI)和阻力指数(resistance index,RI)等相关指标;采用酶联免疫吸附的方法检测ONOO-的浓度。结果椎动脉流速及基底动脉流速(PSV、EDV和MFV)脾肾阳虚证患者均快于痰浊阻遏证患者,其中左侧椎动脉的PSV、右侧椎动脉的MFV、PSV、EDV条目中有统计学意义(P<0.05)。脾肾阳虚证患者左侧椎动脉的MFV、PFV及EDV与ONOO-浓度成正相关(P<0.05);痰浊阻遏证患者双侧椎动脉、基底动脉结果、脾肾阳虚证患者基底动脉结果与ONOO-浓度的相关性不强。结论(1)从TCD指标上看,血脂异常患者不同证候间,椎动脉、基底动脉血流动力学指标部分指标可以反映证候的不同;(2)脾肾阳虚证血脂异常患者随着椎动脉流速的增快,可能出现由于ONOO-浓度随之升高所致的血管内皮损伤,可以通过TCD检查量化血流动力学指标,间接推测血管损伤的程度,为进一步治疗提供参考;(3)上述变化特点与不同证候间中医病因病机分析相一致,丰富中医辨证的内涵,为标准化、客观化辨证提供依据。

NADPH氧化酶抑制剂apocynin对力竭运动大鼠运动性蛋白尿的影响

目的:研究NADPH氧化酶抑制剂apocynin对力竭运动大鼠运动性蛋白尿产生的影响及其机制。方法:32只SD雄性大鼠随机分为安静对照组(C组)、对照+药物组(CA组)、力竭运动组(E组)、力竭运动+药物组(EA组)。药物注射按10 mg/kg体重,每天一次,连续3 d,并在末次药物注射1 h后进行一次性跑台力竭运动。测定运动后尿UP、血液BUN水平、肾脏ROS浓度、NOS活性、NOS与3-NT蛋白含量。结果:结果显示,E组UP、肾脏ROS、iNOS含量及活性、3-NT明显升高,而EA组的这些指标与C组相比无显著性差异。结论:力竭运动可明显增加肾组织NADPH氧化酶活性,从而产生大量的ROS,后者可迅速地与由肾脏iNOS催化生成的NO反应,产生过量的ONOO-,诱发运动性蛋白尿的生成。

SIN-1产生ONOO^-及其被抗氧化剂清除的化学发光研究

采用3-morpholino-sydnonimine(SIN-1)作为过氧亚硝基(ONOO^-)的发生器.以鲁米诺作为光的扩增剂,建立一个检测ONOO^-及筛选清除剂的发光体系。在探索pH、温度、SIN-1浓度对ONOO^-发光强度影响的基础上,确定了ONOO^-—鲁米诺化学发光体系,测定了水溶性维生素E(Trolox)、茶多酚、槲皮素对ONOO^-的清除作用。建成SIN-1为0.30mg/mL、鲁米诺为1×10^(-4)mol·L^(-1)、pH7.4、温度为30℃的发光体系,测得3种清除剂皆有清除ONOO^-的作用,清除效果槲皮素>茶多酚>Trolox。SIN-1—鲁米诺化学发光体系测定ONOO^-的产生和清除是一个快速、简便、灵敏且较稳定的新技术。

钴(Ⅱ)对纤维蛋白原硝化损伤及活性的影响研究

以纤维蛋白原为研究对象,运用紫外分光光度法、三维荧光光谱法、SDS-PAGE和Von-Clauss法研究了Co(Ⅱ)参与过氧亚硝酸根(ONOO-)介导的纤维蛋白原硝化反应过程。结果表明,Co(Ⅱ)对ONOO-硝化损伤纤维蛋白原存在明显的促进作用,并加剧了硝化损伤后纤维蛋白原凝聚活性的下降。

基于DCI的近红外探针和微信小程序的便携式荧光传感平台用于ONOO^(-)的分析检测

该研究设计并合成了一种基于吡喃腈类(DCI)荧光衍生物的近红外探针1a用于特异性检测ONOO-。该探针本身具有橙色荧光,经ONOO^(-)刺激后,探针的苯硼酸频哪醇酯结构脱落,母体分子的内电荷转移(ICT)效应恢复,使得荧光发射增强,荧光颜色由橙色变为红色。此外,探针1a具有良好的选择性和抗干扰能力,检出限低至97 nmol/L。同时,通过自主开发的微信小程序“色度采集(Colorimetric acquisition)”配合探针1a评估色度与ONOO^(-)浓度的相关性,搭建了可对外源性ONOO^(-)检测效果进行智能评估的简易检测平台,该检测平台有望成为便携智能检测环境中有害物质的简易分析工具。该文利用近红外染料开发的探针1a可用于ONOO-的检测,为智能化检测有害物质提供了新的参考。

基于反应型荧光探针检测过氧化亚硝酰阴离子的进展

过氧化亚硝酰阴离子(ONOO^(-))是由一氧化氮(NO)和超氧化物自由基(O_(2)^(·-))在扩散控制下自由组合产生的,它是一种强氧化剂和硝化剂,会对细胞中的DNA、蛋白质和其他生物分子造成损害。由于ONOO^(-)在生理条件下寿命短(≈10 ms)、反应活性高、浓度低、在生物系统中发挥的确切致病作用尚未完全清楚,因此开发对ONOO^(-)灵敏度高、选择性好、实时的检测方法具有十分重要的意义。本文主要综述了近年来在开发检测ONOO^(-)的小分子荧光探针方面取得的进展,以与ONOO^(-)反应的机制分类,分别简述了基于硫族元素化合物氧化反应、碳碳双键断裂反应、酰肼的氧化反应、氧化N⁃脱芳基化反应、硼酸或硼酸酯的氧化反应等反应机制的荧光探针。

消可宁颗粒减少ONOO^-形成 保护高糖条件下内皮细胞的实验研究

目的:观察体外高糖培养条件下,消可宁颗粒对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxide synthase,iNOS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)及过氧亚硝酸阴离子(peroxynitrite,ONOO-)的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,分常规培养组、高糖对照组和不同浓度消可宁组,检测NOS和NO的吸光度,计算出活力或含量。用免疫组织化学方法检测ONOO-生成的标记物一硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的表达。结果与高糖对照组比较,消可宁组eNOS活力明显增加,iNOS活力降低,NO含量下降,NT表达减少。并具有剂量与时间依赖性。结论:消可宁可以抑制iNOS活性,并降低NO含量,减少血管内皮细胞内ONOO-形成而发挥抗氧化作用。

过氧化亚硝酸盐(ONOO^(-))荧光探针研究进展

过氧化亚硝酸盐(ONOO^(-))是一种重要的活性氧,在生命系统的生理和病理过程中起着至关重要的作用,可以抵抗免疫系统中的外来病菌。但是过量的ONOO^(-)可能会引起许多疾病,甚至是癌症。因此有效的识别和检测ONOO^(-)具有重要意义。近年来由于操作方便、选择性高、可实时性和无创性检测等优势,荧光探针法检测ONOO^(-)的研究得到了快速的发展。基于探针设计原理根据不同的荧光母体进行分类,综述了近五年来用于检测ONOO^(-)荧光探针的研究现状,评述了ONOO^(-)荧光探针的优点和不足,探讨了该领域面临的挑战,展望了ONOO^(-)荧光探针的研究和发展方向,为今后人们研究ONOO^(-)在生理病理过程中的作用提供了一定的参考价值。

力竭运动诱导大鼠心肌过氧亚硝酸阴离子生成

探讨力竭运动对大鼠心肌自由基生成的影响,将16只大鼠随机分为安静组和运动组,运动组采用跑台力竭运动模型,运动后即刻取样,测定血清中一氧化氮(NO)浓度、心肌中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)含量。结果:力竭运动后,心肌中ONOO-和MDA显著升高(P<0.05),SOD活力显著下降(P<0.01),血清中NO含量有一定上升,但无统计学意义(P>0.05)。结论:力竭运动诱导心肌ONOO-的大量生成,其机制可能源于力竭运动导致心肌超氧阴离子的大量生成与NO的过量生成。

过氧化物酶催化的硝化反应研究进展

过氧化物酶是一类广泛存在于动植物体内的氧化还原酶,可催化多种反应;在H2O2/NO2-体系下,过氧化物酶可以催化酚类以及其他芳香族化合物的硝化,对过氧化酶用途、催化的硝化反应及其硝化机理做简要的综述。

人参皂苷Re对人脐静脉内皮细胞PARP-1表达的抑制作用

目的：筛选对多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）有潜在抑制作用的中药单体，研究中药单体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）PARP-1表达的抑制作用。方法在中国天然产物数据库中通过计算机虚拟筛选初步得到对PARP-1有潜在抑制作用的6种中药单体，对加入中药单体的细胞分设高、低剂量组，浓度分别为1×10-4、1×10-6 mol/L，另将加入3-氨基苯甲酰胺（3-AB）的细胞作为阳性对照组、只加2×10-4 mol/L ONOO -的细胞作为模型组。Western blotting检测PARP-1表达。若待筛药物对PARP-1表达有抑制作用，则以1×10-4～1×10-8 mol/L的药物进行浓度依赖性实验。结果1×10-4、1×10-6 mol/L人参皂苷Re与1×10-4 mol/L人参皂苷Rb1对ONOO -引起的PARP-1激活有抑制作用。1×10-4～1×10-8 mol/L人参皂苷Re对 PARP-1的表达有明显的抑制作用，且呈现出剂量依赖性（P＜0．05）。结论人参皂甙Re对HUVEC上ONOO -激活的PARP-1蛋白表达有抑制作用，对ONOO -引起的细胞损伤具有保护作用，其效应呈现出剂量依赖性。

血脂异常不同证候间患者血浆ONOO^-、D-二聚体特点及其与血脂指标典型相关性分析

目的:探讨不同证候间血脂异常患者血浆过氧亚硝基阴离子(ONOO-)、D-二聚体特点、证候与血脂指标的典型相关性。方法:采用流行病学横断面调查的方法,测定116例不同证候血脂异常患者相关指标,分析不同证候患者血浆ONOO-、D-二聚体特点,对血脂指标与中医证候积分进行典型相关分析。结果:1痰浊阻遏证血脂异常患者血浆ONOO-高于脾肾阳虚证患者,D-二聚体低于脾肾阳虚证患者(P<0.05);2TC和中医证候间有典型相关性、痰浊阻遏证和血脂指标间具有典型相关性。结论:血浆ONOO-及D-二聚体结合临床症状有可能成为评价血脂异常患者中医证候程度的参考指标之一。TC能更敏感反映中医证候程度,而痰浊阻遏证的严重程度与血脂指标的关系更加密切。血脂指标与证候积分的典型相关性为中医药防治血脂异常提供了依据。

天然抗氧化剂对ONOO^-损伤的抑制效应

过氧亚硝基阴离子(ONOO-)是生物体内产生的一种强氧化剂和细胞毒性物质。它可以介导生物大分子(包括DNA、蛋白质和脂质)的修饰与损伤。本文着重介绍四类主要的天然抗氧化剂——生物碱、多酚、多糖以及萜类抗氧化剂及其抑制ONOO-损伤的研究进展,并对未来的研究作了展望。