应用OP9/OP9-DL1阐明小鼠8.5天胚胎的淋系潜能

胚胎时期淋巴细胞的发生位点一直存在争议。为明确能自主产生淋系的解剖部位,本研究选取小鼠8.5天胚胎的卵黄囊(胚外)和脏壁层(胚内体系)作为实验对象,此时血液循环尚未建立。用集落形成实验检测脏壁层和卵黄囊的造血集落,用OP9共培养检测脏壁层和卵黄囊的B淋巴细胞,用三步法检测脏壁层和卵黄囊的T细胞生成。结果表明:在标准的集落形成实验中,两者均能产生典型的造血集落,但其类型有差异。通过OP9共培养发现:脏壁层可产生B淋巴细胞,它们表达B220、CD19和IgM。采用三步法在OP9-DL1上诱导脏壁层至第16天,可产生CD44-/CD25+幼稚T细胞前体以及CD4+/CD8-单阳性T细胞。然而,上述共培养体系均不能诱导卵黄囊产生B和T淋巴细胞。结论:与卵黄囊相比,脏壁层具有较强的体外淋系分化潜能。今后,应用新的模式动物有望获得更可靠的体内证据,以解答淋系起源这一关键科学问题。

Notch1信号调控小鼠胸腺T细胞凋亡的机制研究

目的:Notch1基因介导的信号传递系统对哺乳动物胸腺T细胞的发育极为重要,而细胞凋亡是T细胞分化和成熟过程中重要的调控方式,Notch1对小鼠胸腺T细胞凋亡的影响。方法:应用Notch1基因配体结合域点突变小鼠的胸腺T细胞以及突变小鼠胸腺T细胞和OP9-DL细胞共培养体系,研究Notch1对小鼠胸腺T细胞自发和诱导性凋亡的影响。结果:Notch1胞外段点突变后,Notch1信号转导能力降低,胸腺T淋巴细胞的自发性凋亡、诱导凋亡以及配体介导下的细胞凋亡等均有所增加;此外,Notch1信号传递能力的降低增强了促凋亡基因的表达而降低凋亡抑制基因的表达。结论:Notch1和配体相互作用通过凋亡相关基因的表达参与T细胞凋亡的调控。