OPA柱前自动衍生-紫外检测米胚芽中的γ-氨基丁酸的HPLC法研究

研究了OPA柱前自动衍生 紫外检测米胚芽中的γ 氨基丁酸的HPLC法 ,在最适的条件下 ,γ 氨基丁酸的线性范围为 10～ 2 5 0mg/L ,r =0 9999,RSD小于 1 2 % ,回收率为98 7%～ 10 1 2 %。通过富集 ,米胚芽中的GABA含量由 0 3 0 1mg/g提高到 4 3 9mg/g。

龙牙百合花氨基酸含量的柱前衍生OPA-HPLC法测定

[目的]测定龙牙百合花中的氨基酸含量。[方法]以邻苯二甲醛(OPA)与9-芴基羰酰氯(FMOC-Cl)作衍生剂,利用VWD检测器可变波长检测程序,采用柱前衍生OPA-HPLC法测定邵阳龙牙百合花中的17种氨基酸含量。[结果]邵阳龙牙百合花中含有苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、组氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸等17种氨基酸。其中必需氨基酸的含量为49.7 mg/g,占氨基酸总量的31.20%;儿童必需氨基酸的含量为30.6 mg/g,占氨基酸总量的19.20%;含量最高的是谷氨酸(28.7 mg/g,占氨基酸总量的18.03%);其次是精氨酸(27.5 mg/g,占氨基酸总量的17.30%)。[结论]该方法操作简便,灵敏度高,结果准确,可靠。龙牙百合花中氨基酸的种类齐全,含量丰富,具有很高的开发利用价值。

HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.

HPLC与紫外-可见分光光度法对翻白草中黄酮类成分含量测定

目的 建立测定翻白草中黄酮类成分含量的最佳方法。方法 先建立高效液相色谱法(HPLC)测定翻白草中的4种黄酮类物质含量的方法,其中流动相为乙腈与0.1%甲酸溶液,并采用梯度洗脱,柱温设为30℃,色谱柱为InertSustain C18(150 mm×4.6 mm, 5μm),检测波长设为360 nm,并对不同批次的翻白草中的4种黄酮类物质含量进行检测;选取芦丁作为对照品,以UV-VIS法测定翻白草中总黄酮含量。结果 不同产地的翻白草含有的黄酮类成分含量差异较大,总黄酮含量的差异也较大,建立的HPLC法与紫外-可见分光光变法(UV-VIS)法具有很好地重复性,样品稳定性好,且仪器精密度高,两种检测方法相结合能很好的把控翻白草品质。结论 以UV-VIS法对翻白草中的总黄酮进行测定,并采用HPLC法测定翻白草中含有的槲皮苷、芦丁、山柰酚和槲皮素,方法较为简便,且有很好的重复性、稳定性,精密度高,能很好地控制翻白草的品质,并为临床研究及其药理活性研究提供依据。

长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1靶向调控微RNA-128-3p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的探究长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌中的表达情况及靶向调控微RNA-128-3p(miR-128-3p)对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)定量分析2017年1月至2018年12月在郑州大学人民医院住院并进行手术治疗的38例结直肠癌病人癌组织及相应癌旁组织、结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT-29和LoVo)及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p的表达。将SW620细胞设为si-OIP5-AS1组、si-NC组、miR-128-3p mimic组、mimic-NC组、miR-128-3p inhibitor+si-OIP5-AS1组和inhibitor-NC+siOIP5-AS1组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力,采用蛋白质印迹法检测E2F1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达,采用双萤光素酶报告实验验证lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p的靶向关系。结果与癌旁组织相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌组织中表达显著升高(1.42±0.40比0.98±0.29,P<0.05),miR-128-3p表达显著降低(0.72±0.21比1.52±0.39,P<0.05),且两者在结直肠癌组织中的表达呈负相关;与FHC细胞(1.05±0.10)相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌细胞株[SW480(1.60±0.25)、SW620(2.19±0.33)、HT-29(1.62±0.23)和LoVo(1.95±0.20)]中的表达显著增高(均P<0.05),miR-128-3p表达(0.70±0.15、0.46±0.03、0.59±0.14、0.74±0.09比1.02±0.11)显著降低(均P<0.05)。lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p为相互作用靶基因,lncRNA OIP5-AS1表达下调或miR-128-3p表达上调均能降低vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,增高E-cadherin蛋白表达,抑制SW620细胞的增殖、侵袭和迁移。在转染si-OIP5-AS1的同时转染miR-128-3p inhibitor可增加vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,降低E-cadherin蛋白的表达,逆转lncRNA OIP5-AS1表达下调对SW620细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌中高表达,并靶向调控miR-128-3p参与结直肠癌的增殖、侵袭和迁移过程,lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p能为结直肠癌的诊断和靶向治疗提供潜在的应用价值。

枸杞不同部位UV-Vis和HPLC指纹图谱研究

目的采用多维指纹图谱结合化学计量学方法,比较枸杞果实和根皮中黄酮、香豆素类和苯丙酸类等成分的整体差异,并综合多糖和总黄酮的含量比较,为枸杞不同药用部位的价值评估和质量标准的建立提供理论依据。方法建立HPLC指纹图谱进行相似度评价和共有峰确定。化学计量学方法对药材不同部位进行分类研究,建立分类模型,筛选出重要差异性标志物并进行定量分析;紫外-可见光谱(UV-Vis),反映药材化学组成的整体特征;采用2020年版《中华人民共和国药典》苯酚-硫酸法测定枸杞多糖的含量,亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量。结果HPLC指纹图谱共标定9个共有峰,指认了绿原酸、东莨菪内酯、槲皮素、芦丁4个色谱峰。相似度评价表明果实和根皮整体组成差异较大,地骨皮不同产地之间质量缺乏一致性;正交偏最小二乘法-判别分析找出芦丁是对整体差异性贡献比较大的化学成分;UV-Vis呈现明显的指纹特性;枸杞子中枸杞多糖和总黄酮的含量分别为2.74%~3.79%和1.52%~2.24%,均高于地骨皮中1.92%~2.67%和0.46%~0.58%,且含量分布具有产地差异性。结论综合多指标揭示枸杞果实和根皮中化学成分差异,为枸杞药材的质量评价和资源价值的充分利用提供重要的数据参考。

HPLC法测定1-氟萘中工艺杂质和遗传毒性杂质含量

建立了1-氟萘中的2种工艺杂质和1种遗传毒性杂质含量检测的HPLC方法。采用Phenomenex Gemini色谱柱(C18250×4.6mm,5µm);流动相为10mM碳酸氢钠+6mM三乙胺∶乙腈=55∶45,等度洗脱,采集时间为主峰的2倍保留时间;柱温为40℃;检测波长为220nm;流速为1.0mL/min;进样量为20μL。采用加校正因子的主成分自身对照法对各杂质进行计算,各杂质分离度良好,定量限为0.005~0.008μg/ml,线性关系良好,精密度和高中低三浓度准确度符合要求。实验结果表明该方法专属性强、灵敏度高、操作简便、重复性好、结果准确可靠,可用于1-氟萘中杂质控制。

HPLC测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量

目的建立HPLC法测定蜈蚣配方颗粒中3,8-二羟基喹啉的含量。方法采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以10 mmol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇(68∶32)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为252 nm。结果HPLC色谱图中阴性对照无干扰;3,8-二羟基喹啉在0.01163~1.395 mg/ml(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.4%(RSD=2.7%)。结论该方法准确、稳定、可行,本文建立的方法经方法学验证可用于评价蜈蚣配方颗粒的质量。

HPLC柱前衍生法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量

利用基于OPA柱前衍生-紫外检测的HPLC方法测定糙米中γ-氨基丁酸（GABA）含量。结果表明：在最适的条件下，GABA的线性范围为10～250mg／L，R2=0．9996，RSD小于1．200％，回收率为101．3％～108．5％；用该方法验证测定原料糙米和发芽糙米的GABA含量分别为3．891～7．709mg／100g和12．77-24．89mg／100g，测定结果准确，重现性好。

RP-HPLC测定人血浆中还原型谷胱甘肽浓度

目的 :建立并考察人血浆中还原性谷胱甘肽的测定方法。方法 :采用邻苯二甲醛 (OPA)柱前衍生化RP-HPLC测定人血浆中谷胱甘肽的含量 ,并进行了方法学考察。结果 :3种浓度谷胱甘肽的平均回收率为 10 4.0 0 %± 3 .91% ,日内RSD≤ 3.6 9% ;日间RSD≤ 5 .38%。结论

邻苯二甲醛法(OPA)与高效液相色谱法(HPLC)测定降胆固醇的双歧杆菌的对比

为了测定实验室保藏的5株双歧杆菌体外降胆固醇能力,分别采用邻苯二甲醛法与高效液相色谱法测定培养基中胆固醇,对两种方法的线性、精密度和加标回收率进行了对比。5株双歧杆菌菌株的降胆固醇率在12.34%-28.57%,两种方法分别在0-0.20 mg/mL和0-0.70 mg/mL范围内呈现良好的线性关系,精密度相对标准偏差分别为0.32%（n=5）和0.96%（n=5）,加标回收率在99.33%-100.18%。整体比较,两种方法均可用于测定双歧杆菌的降胆固醇能力,不过邻苯二甲醛法更适合降胆固醇双歧杆菌的初筛检测。

HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸中不同衍生方式的比较研究

针对HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸（GABA）所用衍生剂缺乏系统的比较分析,研究了3种常见衍生剂及其色谱方法比较。以邻苯二甲醛（OPA）、丹磺酰氯（Dansyl-Cl）、6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）3种物质作为柱前衍生剂,色谱柱为intertsil ODS-C18柱（前两者使用）、Waters AccQ Tag氨基酸分析柱,均为梯度洗脱,紫外吸收波长分别为332 nm、386 nm、250 nm,线性方程分别为Y=9.0×106X＋2062.5（R2=0.9989）、Y=7.0×106X＋11337（R2=0.9982）、Y=7.1×106X＋10025（R2=0.9999）,检出限分别为0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.001 mg/mL,同一样品中测得GABA峰面积的RSD分别为1.16%、1.98%、0.94%,加标回收率分别为98.5%～106.9%、95.8%～110.6%、99.4%～103.4%,同一样品中测得GABA含量分别为11.24、10.67、13.47 mg/100 g干重。从上述结果得知,HPLC法测定GABA的3种衍生剂中,测定结果最准确的是AQC,其次是OPA和Dansyl-Cl。AQC作为一种新型衍生剂,在γ-氨基丁酸乃至氨基酸分析中前景广阔。

HPLC法测定脑复清胶囊中γ-氨基丁酸的含量

目的 :建立柱前衍生高效液相色谱法测定脑复清胶囊中γ 氨基丁酸 (GABA)含量的方法。方法 :色谱柱为HypersilODSC18柱 (12 5mm× 4 .0mm ,5 μm) ,流动相A为 2 0mmol·L-1乙酸钠 +0 .0 2 %三乙胺 (pH 7.3) ;流动相B为 10 0mmol·L-1乙酸钠 (pH7.2 ) 乙腈 甲醇 (10 0∶175∶2 2 5 )梯度洗脱 ;检测波长为 338nm。结果 :线性范围0 .0 5～ 1.0 3mg·mL-1,线性方程A =4 2 3784C +6 919.5 ,r =0 .9994 ,平均加样回收率 10 1.7% ,RSD为 1.7%(n =9)。结论 :本法简便、快速、灵敏度高 ,可用于脑复清胶囊中GABA的质量控制。

有机相阴离子交换固相萃取HPLC-UV法快速测定食品接触材料中4种尼泊金酯的特定迁移量

建立了有机相阴离子交换固相萃取/高效液相色谱紫外法(HPLC-UV)快速测定10%乙醇、3%乙酸、20%乙醇、50%乙醇和橄榄油食品模拟物中尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金异丙酯和尼泊金丙酯的特定迁移量(SM)。橄榄油食品模拟物样品采用有机相阴离子交换固相萃取法净化,水基食品模拟物样品经亲水性聚四氟乙烯针式过滤器过滤后直接进样。以甲醇和纯水为流动相,4种尼泊金酯在ZORBAX SB-Phenyl柱上等度洗脱,12.5 min内达到基线分离;紫外外标校准曲线法定量。4种尼泊金酯在0.5~100 mg/L范围内线性关系良好(r2≥0.999 8),在10、50、100 mg/kg 3个浓度水平下的加标回收率为97.9%~103%,相对标准偏差为0.02%~2.2%,在5种食品模拟物中的定量下限为0.1~0.5 mg/kg。结果表明,该方法的色谱分离和线性关系好,回收率和准确度高,满足欧盟(EU)NO 10/2011法规附表1中4种尼泊金酯SM的限量要求,并已应用于实际样品的检测。

HPLC测定石菖蒲药材中β-细辛醚、α-细辛醚的含量

目的 :测定石菖蒲药材中 β 细辛醚、α 细辛醚的含量。 方法 :色谱条件 :ODSC18分析柱 ( 15 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相为甲醇 水 ( 6∶4 ) ,10 0 0mL中加入磷酸二氢钾 1.4 g ,十二烷基磺酸钠 1.2 g ,检测波长 2 5 7nm :流速 1.0mL·min-1室温操作。结果 :β 细辛醚、α 细辛醚平均回收率分别为 99.0 2 % (RSD =1.0 3% ) ,10 1.2 6 % (RSD =3.5 7% )。 结论 :方法快速准确 ,样品处理简便 。

HPLC法测定β-榄香烯脂质体药物含量及包封率

目的:建立β-榄香烯脂质体药物含量及包封率测定的 HPLC 法。方法:采用 Diamonsil C_(18)(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(80:20),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长210 nm,柱温25℃,进样量20μL。采用葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)柱分离脂质体中游离药物。结果:在本色谱条件下β-榄香烯与辅料及溶剂峰分离良好,β-榄香烯浓度在5.0～60.0μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9994),精密度试验的 RSD 为1.4%～4.2%(n=5),重复性试验的 RSD 为3.1%(n=5),平均回收率为101.8%(n=15)。结论:该方法简便、易行,可用于β-榄香烯脂质体含量及包封率的测定。

HPLC法检测人外周血5-~mC含量及其与年龄相关性研究

目的探讨人外周血中5-^mC含量随年龄变化的规律。方法94例健康个体（4～87岁，男性50例，女性44例）按年龄分为6组：〈20岁、20～30岁、30～40岁、40～50岁、50～60岁及〉60岁组，用HPLC法对外周血中5种脱氧核苷进行定量分析。结果50～60岁组（平均年龄54．7岁）和〉60岁组（平均年龄71．7岁）间的5-^mC含量差异无显著性，但与其它4组有明显差异（P〈0．0001）；〈20岁、20～30岁、30～40岁和40～50岁4组间无显著性差异。男性5-^mC含量的均值（3.5％±0．005％）稍低于女性（3．32％±0．006％），但差异无统计学意义。结论5-^mC的含量随着年龄的增长呈下降趋势，但其下降程度很小。

HPLC及LC-MS法测定全血中青霉素

青霉素(penicilin G)属于青霉素类杀菌剂药物,极易溶于水,在甲醇、乙醇中溶解,在脂溶性溶剂中不溶解.易吸潮,遇酸、碱或氧化剂等迅速失效,水溶液也易分解.人体肌注后15～30 min血浓度达到高峰值,有60%～90%原形物从肾脏中排出.青霉素毒性很小,人类即使使用大剂量也难以中毒,但是青霉素肌内注射、输液常引起过敏,并导致死亡.……

茶叶中γ-氨基丁酸与L-谷氨酸的HPLC分析方法

以2、4-二硝基氟苯为衍生试剂,以0.05mol/L乙酸钠缓冲液(pH=6.5,含10mL/LN,N-二甲基甲酰胺)和体积分数50%乙腈为流动相,建立了茶叶中γ-氨基丁酸与L-谷氨酸的HPLC分析方法。结果表明:γ-氨基丁酸与L-谷氨酸浓度在0.03～2.0mmol/L内,峰面积与浓度之间有良好的线性关系,相关系数R2均为1。各样品γ-氨基丁酸、L-谷氨酸含量RSD(%)分别为0.91%～2.01%和0.94%～1.91%,加标回收率分别为95.82%～99.33%和95.83%～99.88%。

HPLC—ELSD法同时测定马铃薯中α-茄碱和α-卡茄碱含量

建立高效液相色谱—蒸发光散射检测（HPLC—ELSD）同时测定马铃薯中α-茄碱和α-卡茄碱的方法,并对不同样品含量进行测定。结果表明：当ELSD漂移管温度98℃,雾化管温度30℃,载气压力6.90kPa时,以0.1%三氟乙酸水—乙腈为流动相,经梯度洗脱程度,α-茄碱和α-卡茄碱可获得良好分离,色谱峰柱效高。样品用质量100倍的1%甲酸甲醇为提取溶剂在70℃下提取90min,提取液直接注入色谱仪进行检测。α-茄碱标准品在0.196-9.800μg线性关系良好（R2=0.999 5）,平均回收率为99.4%,并以该标准曲线同时计算样品中的α-茄碱和α-卡茄碱的含量。马铃薯植物的不同部位均含有生物碱,α-茄碱的含量为0.13-1.59mg/g,α-卡茄碱的含量为0.39-8.28 mg/g;两种生物碱总量为0.52-9.37mg/g,同一部位中α-卡茄碱的含量为α-茄碱的1.2-7.6倍。