HE4蛋白与OPN蛋白对子宫内膜癌患者预后的影响

目的探讨正常子宫内膜组、癌前病变组和子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组中人附睾分泌蛋白4(HE4)和骨桥蛋白(OPN)的表达和相关性,及其对EC手术预后的影响。方法采用免疫组化(SP)法,检测分析2009年1月~2015年6月期间就诊于邯郸市中心医院的正常组、癌前病变组及癌组中HE4、OPN的表达情况,采用Kaplan-Meier生存分析法和Logrank检验来评价各因素与EC患者生存时间的关系,并用COX风险模型进行多因素分析。结果正常组、癌前病变组和癌组的子宫内膜组织中,HE4蛋白的阳性表达率逐渐升高分别为13.33%、32.00%、70.76%,OPN蛋白的阳性表达率也逐渐升高分别为10.00%、24.00%、63.74%,且组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE4蛋白及OPN蛋白的阳性表达率在手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴结转移组中比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示,EC中HE4蛋白的表达与OPN蛋白的表达呈正相关(r=0.397,P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示手术-病理分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、HE4阳性表达及OPN阳性表达5个因素与预后相关(P<0.05),年龄、组织学分级、组织学类型与预后不相关(P>0.05)。COX多因素逐步分析显示,手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润深度、HE4阳性表达、OPN阳性表达是影响预后的显著因素,但组织学分级影响最不明显(P=0.049)。结论 HE4和OPN蛋白在EC中高表达且正相关,手术-病理分期晚、组织学分级高、肌层浸润深、HE4表达阳性、OPN表达阳性者预后差,HE4和OPN有望成为评价EC预后的重要标记。

Cyclin D1、PSTAT3和OPN蛋白在胰腺导管腺癌中的表达及临床意义

目的分析细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、PSTAT3和骨桥蛋白(OPN)蛋白在胰腺导管腺癌(PDAC)中的中临床意义。方法选取2015年3月至2017年3月本院收治的75例PDAC患者为PDAC组,另外取30例来自切取供肝时附带的正常胰腺组织作为对照组。比较CyclinD1、PSTAT3和OPN蛋白在不同组织中的表达及与PDAC病理参数、预后的关系。结果PDAC组CyclinD1、PSTAT3和OPN蛋白阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ+Ⅳ、有淋巴转移及神经浸润的患者CyclinD1、PSTAT3和OPN蛋白阳性率表达显著更高(P<0.05)。神经浸润、淋巴转移、Cyclin D1、PSTAT3和OPN蛋白阳性是影响PDAC患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。CyclinD1阴性、PSTAT3阴性及OPN蛋白阴性组平均生存时间均长于各蛋白阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CyclinD1、PSTAT3和OPN蛋白的高表达与PDAC病情进展及预后有着密切关系,可作为预测患者预后生存的分子标志物和肿瘤治疗的潜在的靶点。

小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1∶1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。

釉基质蛋白对大鼠骨髓基质细胞合成非胶原蛋白的影响

目的探讨釉基质蛋白对大鼠骨髓基质细胞合成非胶原蛋白的影响。方法采用全骨髓法培养大鼠骨髓基质细胞,通过免疫细胞化学和图像分析方法观察釉基质蛋白对骨髓基质细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响。结果实验组非胶原蛋白合成明显强于对照组。结论一定浓度的釉基质蛋白可以有效促进骨桥蛋白、骨涎蛋白的合成。

缺氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

[目的]研究缺氧对阴茎海绵体平滑肌细胞(cavernosum smooth muscle cells,CCSM)表型转化的影响。[方法]用酶消化法获取SD大鼠的原代CCSM,并用细胞免疫荧光法进行鉴定。将原代CCSM置于缺氧小室中(37℃,5%CO2,1%O2,94%N2)培养,按缺氧时间分为0h组、24h组、48h组、72h组,用western-blot法检测四组的α-SMA、OPN蛋白表达量。[结果]低氧可以诱导CCSMα-SMA蛋白表达下降,且在72h内随着缺氧时间延长差异显著性增加。低氧24h组细胞OPN蛋白表达增加(P<0.05);低氧48h组细胞OPN蛋白表达显著增加(P<0.01);48h后随着时间延长差异可能会减小(P>0.05)。[结论]缺氧可以诱导CCSM由收缩型向合成型转化。

高尔基体蛋白-73和骨桥蛋白在肝癌肝硬化中的表达及对肝硬化分级辅助诊断的价值

目的探索高尔基体蛋白-73 (GP73)和骨桥蛋白(OPN)在肝癌肝硬化中的表达及对肝硬化分级辅助诊断的价值。方法选择2017年5月至2020年5月武警特色医学中心接收的72例肝癌肝硬化患者作为肝硬化组,选择同期40例健康体格检查者作为对照组,比较两组受检者的肝硬化相关指标和血清GP73、OPN水平,分析GP73、OPN与肝癌肝硬化相关指标、Child-Pugh分级以及肿瘤大小的关系,最后通过受试者工作特征曲线(ROC)分析GP73、OPN对肝癌肝硬化诊断的价值。结果与对照组比较,肝硬化组患者的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、凝血酶原时间(PT)、总胆红素(TBIL)、甲胎蛋白(AFP)、OPN、GP73水平明显升高,血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、血浆白蛋白(ALB)水平明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);GP73、OPN与AFP、TBIL、PT、Child-Pugh分级均呈正相关(P<0.05),与ALB均呈负相关(P<0.05);与肝癌直径<3 cm组比较,肝癌直径≥3 cm组患者的GP73和OPN表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);AFP、OPN和GP73诊断肝癌肝硬化的灵敏度为73.6%、77.3%、79.2%,特异性为85.0%、87.5%、85.0%,而OPN、GP73与AFP联合诊断对肝癌肝硬化具有更高的灵敏度和特异性,分别为97.3%、71.5%。结论 GP73、OPN均与肝癌肝硬化指标及Child-Pugh分级相关,与AFP联合能够提高肝癌肝硬化检出率,可以作为肝癌肝硬化的辅助诊断指标。

敦煌医方瞿麦汤对草酸钙型肾结石模型大鼠肾功能的影响及可能机制

目的探讨敦煌医方瞿麦汤对草酸钙型肾结石模型大鼠肾功能的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组,模型组,肾石通颗粒组,以及瞿麦汤5、10、20 g/(kg·d)剂量组,每组10只。给药组和模型组采用1%乙二醇+2%氯化铵的混合液每日2 ml灌胃,连续28 d;同时给予药物干预,肾石通颗粒组给予肾石通颗粒2.8 g/(kg·d)灌胃治疗,瞿麦汤组按5、10、20 g/(kg·d)灌胃治疗,正常对照组和模型组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续4周。末次给药24 h后,称量各组大鼠体质量,计算肾指数;采用HE染色法观察肾组织的病理形态变化;采用ELISA法检测各组大鼠尿液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、骨桥蛋白(OPN)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的含量;采用比色分析法检测各组大鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量和肾组织总抗氧化能力(T-AOC)的活性。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低、肾组织T-AOC活性明显下降(P<0.05),肾指数明显升高,尿液MCP-1、OPN、NGAL含量和血清BUN和Cr含量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组体质量明显升高(P<0.05),肾指数明显降低(P<0.05),血清BUN和尿液MCP-1、OPN、NGAL含量均明显降低(P<0.05);瞿麦汤10和20 g/(kg·d)剂量组和肾石通颗粒组血清Cr含量明显降低(P<0.05);瞿麦汤20 g/(kg·d)剂量组和肾石通颗粒组肾组织T-AOC活性明显升高(P<0.05)。结论瞿麦汤可显著改善肾草酸钙结石模型大鼠的肾功能,其作用机制可能与下调MCP-1、OPN、NGAL等蛋白的表达和减少BUN、Cr的含量有关。

骨肉瘤的浸润、转移与OPN、BMP-2及其mRNA表达的关系

目的探讨骨桥蛋白（osteoponin，OPN）和骨形态发生蛋白-2（bonemorphogeneticprotein-2，BMP-2）及其mRNA在骨肉瘤组织中的表达，分析OPN和BMP-2蛋白及其mRNA与骨肉瘤的临床分期、病理分级、浸润、转移及预后的关系。方法应用免疫组化和原位杂交方法检测105例骨肿瘤组织中的OPN、BMP-2蛋白及其mRNA的表达，并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较，用X^2检验进行统计学处理。结果OPN、BMP-2蛋白及其mRNA阳性表达在骨肉瘤中明显高于骨软骨瘤阳性表达（P〈0．01）；在骨肉瘤临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期明显高于Ⅰ期、Ⅱa期（P〈0．01），并随着病理分级恶性程度增高而显著增加（P〈0．01），在软组织浸润和转移组中明显高于非浸润和非转移组（P〈0．01）。结论OPN、BMP-2蛋白及其mRNA在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移呈正相关，提示OPN、BMP-2蛋白及其mRNA高表达在骨肉瘤的发生、发展和浸润转移过程中发挥重要作用。