猪圆环病毒I型ORF2蛋白序列与其核定位功能的相关性

软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,分别转染Hela细胞,可观察到后者绿色荧光聚集在细胞核区域;而前者转染Hela细胞结果显示核定位现象消失,从而可以推断这一区域是CPV1-ORF2蛋白核定位的功能区。

戊型肝炎病毒ORF2蛋白与新型融合标签Halo Tag的融合表达

目的在大肠杆菌KRX中表达戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）ORF2与新型融合标签Halo Tag融合蛋白。方法采用RT-PCR法从4型HEV毒株中扩增ORF2基因部分片段（aa 382~620）,插入含新型融合标签Halo Tag的原核表达载体pFN18the中,构建重组表达质粒pFN18the-ORF2,转化大肠杆菌KRX,鼠李糖诱导表达Halo-ORF2融合蛋白,纯化后Western blot分析融合蛋白的反应原性。结果经RT-PCR扩增出717 bp的目的基因片段;重组表达质粒pFN18the-ORF2经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白Halo-ORF2相对分子质量为57 900,表达量约占菌体总蛋白的15%,以包涵体形式表达,纯化后纯度达90%以上,可与HEV IgG阳性血清特异性结合。结论在大肠杆菌KRX中表达了Halo-ORF2融合蛋白,为HEV结构蛋白抗原表位的筛选及戊肝血清学诊断的研究奠定了基础。

猪戊型肝炎病毒ORF2基因不同抗原区域的原核表达及鉴定

为了表达出含有猪戊型肝炎病毒（hepatitis Evirus，HEv）天然免疫表位的重组蛋白作为血清学诊断的候选抗原，利用Protean软件对猪戊型肝炎病毒ORF2区域基因进行分析，选取2段抗原富集区域（290～405aa和398～619aa）用RT—PCR技术扩增该区域基因。然后把扩增的目的基因导入pGEX-6P-1表达载体中并在大肠杆菌BL21中诱导表达。结果显示，成功表达了大小为39ku和48ku的融合蛋白；重组蛋白经变复性透析纯化后进行的Western—blot分析表明，48ku融合蛋白可与HEV阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的反应原性。结果表明，猪HEV的天然免疫表位处于398～619aa之间。研究结果为HEV结构蛋白抗原表位的筛选及猪戊型肝炎血清学诊断的研究奠定了基础。