电针治疗大鼠神经痛后脑内孤啡肽受体mRNA表达的变化

目的 观察电针治疗大鼠神经痛前后脑内一些与痛觉相关的核团孤啡肽受体 m RNA表达的变化。方法 实验分为3组 ,对照组为正常大鼠 ,神经痛组为大鼠坐骨神经慢性限制性损伤致神经痛模型 ,电针组为术后第 7日给予神经痛大鼠电针治疗 30 m in。各组动物处死后 ,取脑组织 ,冰冻切片 ,采用原位杂交的方法 ,观察电针后脑内与痛觉相关的中脑导水管周围灰质腹外侧 (vl PAG)、中缝背核 (DRN)、中缝大核 (NRM)核团孤啡肽受体 m RNA表达的变化。结果 大鼠坐骨神经结扎后出现痛敏 ,电针能明显抑制大鼠痛敏 ;神经痛大鼠给予电针后脑内 vl PAG、DRN、NRM中孤啡肽受体 m RNA表达明显降低。结论 实验提示脑内孤啡肽受体可能参与电针镇痛过程。

孤啡肽受体拮抗剂对机械性损伤神经元存活率的影响

目的既往研究表明,孤啡肽在脑损伤后的表达明显升高,本研究通过特异性阻断孤啡肽受体(opioid-receptor-like receptor,ORL-1),观察对受损神经元是否具有保护作用。方法建立神经元机械性损伤模型,用孤啡肽受体特异性阻断剂([Nphe1]-NC(1-13)-NH2,Nphe)阻断孤啡肽受体,通过四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,钙离子水平测定,研究Nphe对机械性损伤神经元存活率的影响。结果 MTT法测定神经元机械性损伤后12 h细胞存活率显示:单纯损伤组细胞存活率为46%±4%,与对照组相比显著下降(P<0.05),不同剂量Nphe(30、300、1 200 nM)干预组的细胞存活率分别为56%±5%、67%±7%、72%±8%,与单纯损伤组存活率46%±4%相比差异显著(P<0.05)。LDH活性检测提示损伤后12 h和48 h,Nphe干预组LDH活性与损伤组相比有显著差异(P<0.05)。神经元机械性损伤后12 h,Nphe能够降低损伤后细胞内钙离子水平(P<0.05)。结论 ORL-1的特异性拮抗剂Nphe能够减少机械性损伤后继发性神经元损害,对神经元具有一定的保护作用。

正常人及肠易激综合征患者肠黏膜孤啡肽受体的表达

目的检测正常人及肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜孤啡肽受体(ORL-1)的表达,探讨其在IBS患者发病机制中的作用。方法黏膜标本取自20例正常人和27例腹泻型(D-IBS)、23例便秘型(C-IBS)患者空肠上段及升结肠,应用实时荧光定量RT-PCR法对肠黏膜ORL-1的表达进行定量分析。结果正常对照组空肠上段及升结肠均有ORL-1mRNA的表达,且空肠上段表达量高于升结肠(P<0.05);D-IBS患者空肠及升结肠黏膜ORL-1mRNA表达量均低于正常对照组(P<0.05),C-IBS患者与正常对照组间无差异。结论 ORL-1受体在人胃肠运动及IBS的病理生理机制中可能具有重要作用;OFQ/ORL-1系统对IBS不同亚型的调节具有异质性。

内毒素抑制人外周血淋巴细胞孤啡肽受体基因的表达

目的：研究内毒素对人外周血淋巴细胞孤啡肽受体（ＯＲＬ－１）基因表达的影响。方法：以０、０．１、１０和１００ｎｇ／ｍｌ终浓度的内毒素刺激的人外周血淋巴细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，采用甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）为内参，逆转录聚合酶链反应技术半定量分析外周血淋巴细胞的ＯＲＬ－１的ｍＲＮＡ水平，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实聚合酶链反应产物的特异性。结果：未受刺激时，正常人外周血淋巴细胞孤啡肽受体的ｍＲＮＡ的水平为 １．０６０±０．３９０；１００ｎｇ／ｍｌ的内毒素作用３小时，ＯＲＬ－１基因表达显著抑制（Ｐ＜ ０．０５）；１０ｎｇ／ｍｌ的内毒素刺激作用６小时，ＯＲＬ－１的ｍＲＮＡ水平明显下降（Ｐ＜０．０５）；０．１ｎｇ／ｍｌ的内毒素刺激１２／小时，ＯＲＬ－１的ｍＲＮＡ水平呈显著性下降（Ｐ＜０．０５）；未受刺激作用的淋巴细胞２４小时内，ＯＲＬ－１的基因表达水平无明显变化（Ｐ＞０．０５）。结论：内毒素抑制人外周血淋巴细胞转录ＯＲＬ－１的ｍＲＮＡ水平。淋巴细胞ＯＲＬ－１基因的表达水平与细胞的功能状态有关。孤啡肽可能参与机体的免疫调节。

心理应激对肠易激综合征模型大鼠肠黏膜孤啡肽受体表达的影响

目的检测心理应激对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠肠黏膜孤啡肽受体(ORL-1)mRNA和蛋白表达水平,初步探讨心理应激对IBS大鼠的影响。方法 80只SD雌性大鼠随机分为对照组和实验组,每组40只,实验组采用束缚应激的方法制作IBS动物模型,并对模型进行鉴定。实验0、1、2、3、4周时两组分别随机取出8只大鼠,在近端结肠(距回盲部2 cm)处取2块黏膜,采用荧光定量PCR法检测ORL-1 mRNA的相对表达量,同时用Western blotting的方法检测ORL-1蛋白,动态观察各组大鼠的表达变化。结果与对照组相比,实验组大鼠ORL-1 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),应激1周时最高,2~4周逐渐下降。实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性心理应激引起大鼠IBS的发生机制可能与其影响大鼠肠道肠黏膜孤啡肽受体(ORL-1)mRNA及蛋白表达量相关。