microRNA-196b通过抑制OTX1而抑制结直肠癌细胞侵袭转移

观察结直肠癌检测microRNA-196b靶定orthodenticle人同源盒基因1(OTX1)在抑制结直肠癌细胞侵袭转移中的作用研究。方法 临床纳入2020年4月至2022年1月在本院就诊的结直肠癌(CRC)病人90例,对OTX1 mRNA、miRNA-196b予以实时定量PCR监测,分析结直肠癌、癌旁组织CPT1A中的OTX1mRNA、mirRNA-196b的表达情况。对miRNA-196b-mimic、miR-NC予以转染CPT1A,予以Transwell实验、细胞划痕实验、CCK-8法对CPT1A予以miRNA-196b对CPT1A的侵袭、迁移、增殖能力的影响;应用Western blotting对OTX1表达蛋白中miRNA-196b分别予以Transwell实验、细胞划痕实验、CCK-8法监测其对CPT1A的侵袭、迁移、增殖功能。结果 结直肠癌组织细胞和癌旁组织细胞中的miRNA-195b、OTX1表达指标水平差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果发现,结直肠癌组织内的OTX1mRNA、miRNA-195b表达指标呈现负相关(r=-0.440,P=0.016);CPT1A转染miRNA-196b后第72、96、120hA值与miR-NC组的细胞增殖能力显著减低(P<0.05);划痕细胞实验发现,划痕24h后,miRNA196b mimic组与miR-NC组比较其迁移功能下降;miRNA196b组的穿模细胞数为(36.524±8.216)个,低于miR-NC组(168.429±12.618)个,差异有统计学意义(t=83.1076,P<0.05)。结论 结直肠癌组织中的OTX1和miRNA-196b表达呈负相关,其中OTX1表达下调可通过miRNA-196b调节,对结直肠癌细胞的侵袭、迁移、增殖起到明显的抑制作用。

OTX1基因与遗传性骨性反畸形相关性的研究

目的研究与遗传性骨性反畸形发生相关的基因,为阐明其分子遗传机制奠定理论和实验基础。方法利用表达序列标签克隆策略选择了1个可能与遗传性骨性反颌畸形相关的候选基因——OTX1。采用PCR扩增后直接测序的方法筛查该基因的编码区突变和单核苷酸多态性(SNPs)位点的分布情况;应用SPSS13.0软件进行χ2检验,检测SNPs在病例组和正常对照组中的Hardy-Weinberg平衡情况,并分析SNPs位点与遗传性骨性反颌的相关性。结果病例组和对照组均未检测到OTX1基因外显子突变;rs17850223CG基因型频率在病例组和对照组间有统计学意义(P<0.05)。结论 OTX1基因SNPs和遗传性骨性反相关,OTX1基因可能是遗传性骨性反的易感基因。

OTX1基因多态性与特发性癫痫的相关性研究

目的探讨中国汉族人群OTX1基因多态性与特发性癫痫的关系。方法将147例特发性癫痫患者分为全面性发作组(n=101)和局灶性发作组(n=46),并与150例健康者(对照组)进行对比。将OTX1的编码序列分为3个部分,PCR扩增,对产物进行测序,比较三组OTX1基因的异同。结果全面性发作组OTX1基因rs17850223 GG基因型频率及G等位基因的频率均显著高于对照组及局灶性发作组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01);对照组及局灶性发作组GG基因或G等位基因差异无统计学意义(P>0.05)。结论OTX1基因rs17850223可能在特发性癫痫全面发作中起重要作用。

下调OTX1的表达抑制直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭

目的:下调直肠癌细胞系Colo320的Orthodenticle人同源盒基因1(orthodenticle homeobox 1,OTX1)的表达,观察其对Colo320细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:构建OTX1 siRNA重组质粒载体p GPU6-OTX1,并转染Colo320细胞。应用qRT-PCR法检测OTX1的基因表达水平,Western blot法检测OTX1的蛋白表达,CCK-8法检测p GPU6-OTX1对Colo320细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测Colo320细胞侵袭能力的变化。结果:成功将构建的p GPU6-OTX1转染Colo320细胞。qRT-PCR和Western blot结果显示p GPU6-OTX1下调Colo320细胞OTX1的表达,CCK-8结果显示p GPU6-OTX1明显抑制SGC-7901细胞的增殖能力,Transwell结果显示下调OTX1的表达抑制Colo320细胞的侵袭能力。结论:下调OTX1的表达能够抑制直肠癌细胞Colo320的增殖和侵袭能力。

下调OTX1的表达对胃腺癌SGC-7901细胞系增殖和凋亡的影响

目的:观察沉默胃腺癌细胞系SGC-7901的Orthodenticle人同源盒基因1(orthodenticle homeobox 1,OTX1)对SGC-7901细胞增殖能力和凋亡情况的影响。方法:构建shRNA-OTX1重组质粒载体p GPU6-OTX1,并应用脂质体转染法将其转染入SGC-7901细胞。qRT-PCR法检测OTX1基因的表达;Western blot法检测OTX1蛋白的含量;CCK-8法检测p GPU6-OTX1对SGC-7901细胞增殖能力的影响;AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测p GPU6-OTX1对SGC-7901细胞凋亡的影响。结果:成功将构建的p GPU6-OTX1转染入SGC-7901细胞;qRT-PCR结果显示p GPU6-OTX1下调SGC-7901细胞OTX1基因的表达;Western blot结果显示p GPU6-OTX1使SGC-7901细胞OTX1蛋白表达降低;CCK-8结果显示p GPU6-OTX1明显抑制SGC-7901细胞的增殖能力;流式细胞术结果显示p GPU6-OTX1能够诱导SGC-7901细胞凋亡。结论:p GPU6-OTX1能够抑制胃腺癌细胞SGC-7901的增殖,并诱导凋亡。

Otx1诱导外向钾电流并抑制小鼠神经母细胞瘤细胞增殖

目的:探讨Otx1(orthodenticle homeobox 1)蛋白在调节电压门控性钾通道中的作用,并分析其对体外培养的小鼠神经细胞增殖的影响。方法:小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中分别转染对照和过表达Otx1的质粒DNA,应用全细胞膜片钳记录N2a细胞中K^(+)依赖的外向电流;通过电生理技术,分析Otx1对K^(+)电流激活、失活和失活后恢复时间等参数的影响;通过细胞转染Otx1突变体,研究其对细胞增殖的影响。结果:过表达Otx1可增强电压依赖性外向K^(+)电流,降低半失活电位,并延迟外向电流失活后恢复;星形胶质细胞瘤相关的Otx1突变体K321T和Y320C所诱导的K^(+)电流幅度较低,与野生型Otx1相比,转染K321T或Y320C突变体的细胞增殖率升高;在N2a细胞表达Kv4.2α也导致外向K^(+)电流增强,并抑制N2a细胞的增殖。结论:Otx1可在体外培养的小鼠神经细胞中诱导电压依赖性K^(+)电流,而K^(+)电流可能参与细胞的增殖过程。

探究microRNA-196b/OTX1调控结直肠癌细胞发生失巢凋亡抵抗机制

研究microRNA-196b/果蝇Orthodenticle基因1(OTX1)调控结直肠癌细胞发生失巢凋亡抵抗的机制。方法 选取结直肠癌细胞开展体外实验研究,过表达或抑制microRNA-196b功能检测结直肠癌细胞中OTX1mRNA和蛋白表达水平;构建过表达microRNA-196b质粒、降表达microRNA-196b质粒、OTX1-siRNA质粒分别转染HCT166细胞,利用Q-PCR、Western Blot、流式细胞仪和悬浮诱导失巢凋亡试验等方法检测受试细胞上皮间质转化标志物E-cadherin和Vimentin、失巢凋亡标志物TrkB、凋亡相关蛋白Bim的表达及失巢凋亡率。结果 过表达microRNA-196b组的结直肠癌细胞OTX1mRNA和蛋白表达水平均低于抑制microRNA-196b组(P<0.05)。过表达microRNA-196b组的E-cadherin、Vimentin、TrkB、Bim表达水平高于降表达microRNA-196b组,失巢凋亡率低于降表达microRNA-196b组(P<0.05);OTX1-siRNA组的E-cadherin、Vimentin、TrkB、Bim表达水平高于过表达microRNA-196b组,失巢凋亡率低于过表达microRNA-196b组(P<0.05)。结论 microRNA-196b过表达能负性调控OTXT1表达,导致结直肠癌细胞中的OTX1表达降低,进而促进结直肠癌细胞发生失巢凋亡抵抗。

微小RNA-424-5p调控OTX1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究结直肠癌组织中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与orthodenticle人同源盒基因1(OTX1) mRNA表达的关系,并探讨miR-424-5p对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法收集2017年6月至2018年6月在昆明医科大学第三附属医院结直肠外科收治的60例结直肠癌患者,采用实时定量PCR (RT-qPCR)检测miR-424-5p和OTX1 mRNA在60对结直肠癌组织和癌旁组织以及结直肠癌HCT116细胞中的表达情况,并分析两者表达的相关性.HCT116细胞分别转染miR-NC(miR-NC组)和miR-424-5 p-mimic(miR-424-5p-mimic组),采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测miR-424-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测过表达miR-424-5p对OTX1蛋白表达的影响.荧光素酶报告实验检测miR-424-5p对OTX1-3'UTR报告载体荧光素酶活性的影响.结果 OTX1 mRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为1.049±0.446和0.639±0.178(t=-6.583,P<0.001);miR-424-5p在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.865±0.261和1.329±0.387(t=7.705,P<0.001),差异均有统计学意义.结直肠癌组织中miR-424-5p和OTX1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.439,P=0.015).HCT116细胞转染miR-424-5p-mimic后第72、96和120 h时吸光度(A)值分别为0.813 ±0.064、0.960±0.098、1.287±0.192,转染miR-NC后第72、96和120 h时A值分别为1.163 ±0.158、1.645 ±0.117、2.043±0.236,miR-424-5p-mimic组细胞增殖能力显著低于miR-NC组,差异均具有统计学意义(t=3.538,P=0.024;t=7.778,P=0.001;t=4.257,P=0.013).划痕实验结果显示,划痕24 h后miR-424-5p-mimic组与miR-NC组相比迁移能力显著减弱.miR-NC组和miR-424-5p-mimic组穿膜细胞数分别为(177.104±17.834)个和(35.667±13.634)个,差异有统计学意义(t=15.246,P<0.001).OTX1蛋白在miR-NC组和miR-424-5p-mimic组中的相对表达量分别为0.862 ±0.121、0.342±0.103,差异有统计学意义(t=16.286,P<0.001).荧光素酶实验结果显示,过表达miR-424-5p后,wt-OTX1-3'UTR和mut-OTX1-3'UTR报告载体的荧光素酶活性分别为0.305±0.095和0.898±0.080,差异有统计学意义(P<0.001).结论 miR-424-5p与OTX1mRNA在结直肠癌组织中的表达呈负相关,miR-424-5p可通过下调OTX1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

Otx1在小鼠癫痫样行为中的潜在作用机制:大脑皮质第5皮层锥体神经元生理功能的“调节者”

转录因子Otx1在大脑皮质第5皮层锥体神经元中特异性表达。该研究利用全细胞膜片钳记录技术和神经元三维形态模拟重构及定量分析平台探讨Otx1在小鼠癫痫样行为中的潜在作用机制。结果表明,在大脑皮质运动区第5皮层锥体神经元中鉴定到四种不同放电类型的神经元,即固有爆发式、节律性振荡爆发式、适应性规律式及紧张性放电型。与对照相比,Otx1突变小鼠中规律式放电神经元的比例显著升高,而爆发式放电神经元的比例显著减少并表现出增强的兴奋性。此外,Otx1突变促使神经元动作电位(action potential,AP)阈值、输入阻抗及快速后超极化电位都显著降低,进而使其兴奋性增强。Otx1突变降低神经元基树突形态结构复杂性,主要表现为基树突表面积、体积、分节表面积及分节体积的显著降低。可见,Otx1突变导致大脑皮质运动区第5皮层锥体神经元生理功能的改变可能是小鼠癫痫样行为的潜在原因。