重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染对胰腺细胞损伤的保护作用

目的 :研究重组质粒p EGFP-N2/Pim-3转染对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的大鼠胰腺AR4-2J细胞损伤的保护机制。方法:实验分为4组:A组(正常对照组),B组(5μg/m L LPS处理组),C组(空载质粒p EGFP-N2转染+5μg/m L LPS处理组),D组(重组质粒p EGFP-N2/Pim-3转染+5μg/m L LPS处理组)。流式细胞仪检测各组处理24 h后细胞凋亡情况。处理0、6、12、24 h后分别提取各组总RNA及蛋白,RT-PCR及Western blot分别检测Pim-3、细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin)m RNA及蛋白的表达。结果 :处理24 h,各组细胞凋亡率分别为:A组(7.85±1.14)%、B组(53.13±5.73)%、C组(51.76±5.17)%、D组(21.13±4.15)%,D组细胞相对B、C组凋亡明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);D组Pim-3表达与A、B、C组之间的差异有统计学意义(P<0.05);处理12 h后B、C、D组ICAM-1高表达,24 h达高峰,相对于A组,差异均有统计学意义(P<0.01),D组与B、C组差异有统计学意义(P<0.05);处理6 h后,B、C、D组Occludin高表达,12 h达高峰,相对于A组,差异均有统计学意义(P<0.01),D组与B、C组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丝/苏氨酸激酶Pim-3能够抑制胰腺细胞炎症反应和胰腺细胞凋亡,可能与上调闭锁蛋白和下调细胞间黏附分子的表达有关。