乳腺癌前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin水平与前哨淋巴结转移的关系及意义

目的探讨乳腺癌前哨淋巴结中八聚体结合转录因子-4(Oct-4)、血管内皮生长因子-D(VEGF-D)、L-选择素(L-selectin)水平与前哨淋巴结转移(SLNM)的关系及意义。方法选取2020年4月—2022年7月收治的147例乳腺癌,根据SLNM情况分为SLNM组67例、无SLNM组80例,比较2组及不同T分期、区域淋巴结分期患者前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin水平,采用多因素Logistic回归分析寻找乳腺癌SLNM的危险因素,采用决策曲线分析(DCA)和临床影响曲线(CIC)分析前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin评估SLNM的临床效用和与实际情况的符合度。结果SLNM组前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin水平高于无SLNM组(P<0.01)。随着T分期和区域淋巴结分期升高,前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin均是乳腺癌患者SLNM的独立危险因素(P<0.01);绘制DCA曲线显示,前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin评估乳腺癌患者SLNM均有正向的净获益,临床效用排序:Oct-4、L-selectin、VEGF-D,三者联合较单独指标评估的临床获益度均明显升高;绘制CIC显示,阈概率值>0.6时,三者联合评估SLNM与实际情况具有较高的符合率。结论乳腺癌前哨淋巴结中Oct-4、VEGF-D、L-selectin水平与SLNM及肿瘤分期有关,是患者发生SLNM的一个潜在机制,三者联合评估SLNM具有良好的临床获益度,可作为评估乳腺癌患者SLNM的可靠方法。

Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究干细胞相关标志物Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集1996年6月～2006年3月胃癌手术石蜡标本63例,免疫组化法检测组织中Oct-4表达,分别以58例癌旁正常组织和10例正常胃黏膜组织标本作为对照。回顾63例患者的临床病理学指标,并分析各项指标与Oct-4表达的关系。对63例中的50例患者进行为期8年的生存随访,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析Oct-4表达与患者生存的关系;构建Cox回归模型,评估Oct-4作为胃癌患者预后的独立影响因素的可能性。结果Oct-4在胃癌组织中阳性表达率为80.95%(51/63),显著高于癌旁正常组织的5.2%(3/58)和正常胃黏膜组织(0)(P<0.01)。Oct-4表达的阳性程度与胃癌的临床分期呈正相关(P<O.01)。Oct-4表达在不同分化程度胃癌组织及不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Oct-4表达阳性程度高的患者生存时间明显短于Oct-4表达阳性程度低的患者(P<0.05)。Oct-4表达水平与胃癌患者预后无明显相关性(RR 0.554,95%CI 0.209～1.466)。结论Oct-4在胃癌组织中表达的阳性程度与肿瘤临床分期及患者生存期有关,但不是胃癌患者预后的独立影响因素。

干细胞标志物Oct-4 Sox-2表达与结肠癌术后复发转移的关系

目的:探讨结肠癌组织中Oct-4、Sox-2表达情况及其对术后复发转移的预测作用。方法:采用免疫组织化学方法检测手术切除的80例结肠癌术后标本中Oct-4、Sox-2表达情况,并且对两指标的表达同肿瘤分化程度、分期和术后复发转移关系进行分析。采用RT-PCR检测20例冰冻肿瘤组织及癌旁组织中Sox-2、Oct-4表达情况。结果:80例患者中35例出现复发转移,Sox-2、Oct-4在转移组中表达率分别为48.57%(17/35)、51.43%(18/35),在非转移组中表达率分别为17.78%(8/45)、13.33%(6/45),差异有统计学意义(P=0.001)。原发病灶分化程度、T分期和N分期同Oct-4和Sox-2表达无显著性差异。均为阳性表达者其转移发生率高,生存分析显示不同表达状态转移出现时间差异有统计学意义(P=0.001)。RT-PCR分析显示20例肿瘤组织中Sox-2、Oct-4阳性表达率分别为40%(8/20)、45%(9/20),明显高于癌旁正常组织5%(1/20)。结论:肿瘤组织中Sox-2、Oct-4表达同结肠癌术后转移相关,两者联合检测有助于评估结肠癌术后复发转移的可能。

转录因子Oct-4和SOX-2在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的:研究转录因子Oct-4和SOX-2在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达情况,阐明二者作为宫颈癌干细胞标记物的可能性。方法:采用免疫组织化学SP法检测Oct-4和SOX-2在52例宫颈癌组织和28例正常宫颈组织中的表达,分析二者在不同类型宫颈癌患者中的表达情况。结果:Oct-4在宫颈癌组织中表达率(46.1%,24/52)显著高于其在正常组织中的表达率(7.1%,2/28),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);SOX-2在宫颈癌组织中的表达率(59.6%,31/52)显著高于其在正常组织中的表达率(10.7%,3/28),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中Oct-4和SOX-2的表达与患者年龄、病理类型和FIGO分期均无关联性(P>0.05);与宫颈癌的分化程度有关联,随分化程度的降低,Oct-4和SOX-2表达水平升高,不同分化程度宫颈癌患者表达频数比较差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中Oct-4与SOX-2的表达频数呈正相关关系(r=0.753,P<0.05)。结论:Oct-4和SOX-2在宫颈癌组织中频数较高,且随宫颈癌分化程度降低表达频数升高,提示Oct-4和SOX-2可作为宫颈癌干细胞的标记物。

ox-LDL抑制大鼠骨髓间充质干细胞的体外增殖和Oct-4表达

目的以大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)为研究对象,在体外培养过程中观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MSCs增殖、干细胞表面标志Oct-4表达的影响。方法将体外培养的MSCs分为4组:对照组,不加任何干预因素;Ox-LDL组,在培养基中分别加入不同浓度(1、5、10、20μg/mL)的ox-LDL;Ox-LDL+NAC组,采用抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后再加入ox-LDL;阴性对照组,在培养基中加入对应浓度的天然低密度脂蛋白(nLDL)。在不同培养时间点收集细胞计数并绘制生长曲线;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测干细胞特异表面标记Oct-4表达水平;电子顺磁共振技术检测氧化活性产物(ROS)产量。结果 ox-LDL抑制MSCs的增殖,浓度越大细胞增殖抑制越明显,当浓度大于5μg/mL时细胞出现凋亡,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平减弱;ox-LDL干预后Oct-4的表达水平显著减弱,且与干预浓度呈正相关;ox-LDL干预后ROS的产量明显升高,而nLDL对ROS生成没有影响。结论 ox-LDL抑制MSCs的体外增殖和Oct-4表达,可能与ROS增加有关。

膀胱移行细胞癌组织中PSCA和Oct-4表达及其意义

目的研究膀胱移行细胞癌和癌旁正常移行上皮组织中前列腺干细胞抗原（PSCA）和Oct-4表达水平及其临床病理意义。方法收集45例膀胱移行细胞癌和10例癌旁正常膀胱移行上皮组织标本常规制作石蜡切片,以PSCA和Oct-4标志物进行EnV ision免疫组织化学法染色。结果膀胱移行细胞癌PSCA和Oct-4表达阳性率（55.6%;53.3%）明显高于癌旁正常膀胱移行上皮组织（PSCA：10.0%,2χ=6.81,P=0.009;Oct-4：10.0%,2χ=6.20,P=0.013）。病理分级0~Ⅰ级、临床分期Tris-T1、初发病例及单发病例PSCA和Oct-4表达阳性率明显低于病理分级Ⅱ~Ⅲ级、临床分期Ⅱ~Ⅳ、复发病例及多发病例（P〈0.05或P〈0.01）。膀胱移行细胞癌中PSCA和Oct-4表达呈高度一致性（2χ=7.88,P=0.005）。结论 PSCA和Oct-4可能是反映膀胱移行细胞癌发生、进展、侵袭潜能及预后的重要生物学标志物。

干细胞相关标志物Oct-4在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨干细胞相关标志物Oct-4在宫颈癌组织中的表达并分析其在宫颈癌发生、发展中的作用和意义。方法选取宫颈癌患者的组织检查标本50例,正常宫颈组织标本20例,采用免疫组织化学法和反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测正常宫颈组织和不同分化宫颈癌组织Oct-4mRNA的表达量,比较两者Oct-4蛋白表达阳性率以及宫颈癌患者在不同病理情况下Oct-4蛋白表达的阳性率。结果 RT-PCR检测显示Oct-4mRNA在宫颈癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,免疫组织化学染色显示正常宫颈鳞状上皮组织不表达Oct-4蛋白,宫颈癌组织中阳性表达率为56.0%(P<0.01)。Oct-4蛋白表达在宫颈癌患者的不同年龄和不同病理类型之间差异无统计学意义(P>0.05),但在低分化的宫颈癌组织中明显高于中高分化的宫颈癌组织,在宫颈癌复发转移者明显高于临床治愈者(P<0.01)。结论 Oct-4基因在宫颈癌组织中表达增加,表达程度随着宫颈癌细胞的分化而降低,可能在宫颈癌放疗抵抗中起重要作用。

维持胚胎干细胞多能性和自我更新的转录因子Oct-4/Nanog以及相关的调控网络

Oct-4和Nanog是两种维持干细胞多能性和自我更新的转录因子,它们通过结合靶基因调控区,选择性地抑制分化基因表达或促进多能性基因表达。它们通常只在多能干细胞中表达,在分化细胞中不表达。在不同的发育阶段,它们的表达量受到特异调控,并且分别与Sox-2、FoxD3等其他转录因子以及LIF、BMP等胞外信号通路互相作用,形成一个复杂的转录调节crosstalk网络,在特异时空激活或抑制靶基因的转录;通过互相制约最终决定干细胞是保持多能性还是分化,以及向哪个方向分化。此外,Oct-4和Nanog对体细胞重编程为多能细胞也有重要作用。

Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化中的甲基化状态

目的研究Oct-4在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向诱导分化中的甲基化状态。方法全骨髓贴壁筛选法培养小鼠BMSCs,通过形态学观察及免疫细胞化学进行鉴定。骨块接种培养法培养小鼠成骨细胞,采用碱性磷酸酶(AKP)及茜素红进行鉴定。诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化,采用间接免疫荧光染色和RT-PCR法观察Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的表达情况,甲基化特异性PCR检测Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的甲基化状态。结果分离培养的小鼠BMSCs在体外能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,培养细胞的CD29、c-Kit和CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。诱导10d后的细胞及从小鼠颅骨中分离、培养出的成骨细胞,AKP及茜素红染色呈阳性。间接免疫荧光染色和RT-PCR结果显示,Oct-4在小鼠BMSCs定向诱导分化中表达下调。小鼠BMSCs定向诱导分化中Oct-4基因启动子区的CpG岛出现了甲基化。结论成功在体外培养了小鼠BMSCs及小鼠成骨细胞,Oct-4基因可能参与了成体干细胞多潜能性的维持,Oct-4基因在小鼠BMSCs定向诱导分化中的表达下调可能是其启动子区CpG岛甲基化的缘故。

Oct-4和人端粒酶逆转录酶在不同胎龄人胚原始生殖细胞的表达变化

目的检测不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4、人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达变化。方法取人胚胎生殖嵴,通过RT-PCR检测5-13周龄人胚生殖嵴中Oct-4、hTERT的表达变化;同时,取人胚胎生殖嵴,经石蜡切片,HE染色、免疫组织化学染色等技术,观察不同胎龄人胚原始生殖细胞的形态,检测Oct-4、hTERT的表达情况。结果胎龄6-7周时,生殖嵴中可见少量原始生殖细胞,且表达Oct-4及hTERT;胎龄8~12周时,生殖嵴中原始生殖细胞数量增多,Oct-4及hTERT表达增强（P〈0.05）;胎龄13周以后,生殖嵴中Oct-4阳性的原始生殖细胞数量逐渐减少,Oct-4表达减弱,但hTERT仍然高表达。结论不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4的表达呈动态变化,胎龄8-12周时表达较强,但hTERT的表达量始终维持在较高水平,没有明显变化。

Oct-4/Sox-2协同调控下游基因表达的分子机制

Oct-4属POU家族蛋白,是一类在动物早期胚胎发育过程中起重要作用的转录因子,参与维持细胞的全能性及未分化状态。Oct-4蛋白的主要结构特征为具有POU家族特有的保守结构域(POUS)和POU同源异型结构域(POUHD),这两个结构域可与DNA上特定区域形成双向结合,进而对基因转录进行调控。Sox-2是另一种转录因子,其HMG结构域可结合在DNA的特定序列上,并可通过与Oct-4的POUs结构域之间的蛋白质-蛋白质相互作用形成POU/HMG/DNA三元复合体以调控下游靶基因的表达。文章就POU家族成员Oct-4和HMG-box家族成员Sox-2在动物早期胚胎发育中调控部分下游基因表达的分子机制进行了概述。

SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达

分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体外培养得到的细胞或细胞集落均阳性表达SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT,说明组织块体外培养获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。

SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达

目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.

转录因子OCT-4对靶基因AP-2γ表达调控的研究

OCT-4和AP-2γ是近年来睾丸生殖细胞瘤诊断过程中研究的热点基因.作为一个在胚胎发育中起着重要作用的转录因子,OCT-4基因在发育的不同时期、不同分化过程中发挥着多种生物学功能,其作用是通过对靶基因的调控来实现的.本研究运用多种软件分析,发现AP-2γ启动子区域的序列部分有OCT-4的结合位点.利用CHIP-PCR方法鉴定AP-2γ是OCT-4调控的靶基因.应用Luciferase assay、免疫荧光实验、小鼠隐睾模型等实验进行验证,OCT-4基因抑制AP-2γ转录活性和影响其蛋白质水平的表达.这一新发现,有利于从分子水平上研究睾丸生殖细胞瘤的发生机制.

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的:建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法:使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果:经过30～34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC50值分别为(2.33±0.12)和(21.46±0.97)μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC50值从(22.04±1.84)μmol/L减小到(6.15±0.53)μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。

Oct-4在子宫颈癌中表达的意义及其与高危型HPV感染的关系

目的：研究Oct-4在子宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及其与高危型HPV感染的关系,以探讨Oct-4和高危型HPV在子宫颈癌发生发展中的意义。方法：采用免疫组化法检测42例低级别上皮内瘤变（CIN I）、42例高级别上皮内瘤变（CINⅡ~Ⅲ）、42例宫颈癌以及20例正常子宫颈组织中Oct-4的表达,同时采用PCR（DH2法）检测各组病例中高危型HPV的表达。结果：Oct-4在宫颈癌组织和高级别上皮内瘤变中表达分别为36例（85.71%）和33例（78.57%）,显著高于正常宫颈组的2例（10.00%）和低级别上皮内瘤变组10例（23.80%）,差异有统计学意义（P〈0.01）;而高级别上皮内瘤变组和宫颈癌组差异无统计学意义（P〉0.05）;HPV阳性患者Oct-4呈高表达,而HPV阴性患者Oct-4几乎不表达,两者呈正相关（r=0.532,P〈0.01）。结论：Oct-4可能促进子宫颈癌的发生发展,且Oct-4高表达与高危型HPV的感染相关,高危型HPV可能协同Oct-4参与宫颈癌发生发展。这可能为宫颈癌的诊断及治疗提供了一个新的靶点。

Oct-4和Nestin在肺癌中共表达的临床意义

目的研究Oct-4和Nestin共表达在肺癌中的临床意义。方法收集320例确诊肺癌患者的肿瘤组织标本,采用PCR和免疫组织化学法检测肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中干细胞相关基因的表达差异。结果体外实验显示,与非肿瘤干细胞相比,肿瘤干细胞,尤其是高表达Oct-4和Nestin的肿瘤干细胞致瘤性明显增强。更重要的是,320例中的42例(13.13%)肿瘤组织呈Oct-4和Nestin表达阳性。单因素分析和多因素分析提示,Oct-4和Nestin的表达与起病年龄、淋巴结转移情况密切相关(P<0.05)。结论 Oct-4和Nestin在肺癌的发展中起到重要的调节作用,Oct-4和Nestin或许可作为判断肺癌预后的重要指标。

肺癌干细胞基因Oct-4表达的临床意义

目的研究肺癌干细胞的基因表达与临床特征、病理特征、预后间的关系。方法应用流式细胞仪分选出肺癌干细胞,并应用RT2ProfilerTMPCR仪检测肺癌干细胞与非肺癌干细胞间的差异性基因表达。应用免疫组化分析干细胞基因Octamer-4(Oct-4)的表达与临床病理特征之间的关系。应用Western-blot检测肺癌干细胞中Oct-4蛋白的表达情况。结果肺癌干细胞与非肺癌干细胞间显著差异性表达的基因共7种,包括干细胞分化相关因子(CD44、Oct-4和nestin)、细胞周期调节因子(APC和CDC2)以及生长因子(HGF和TGF)。其中,Oct-4蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P=0.001)。经过生存分析,Oct-4蛋白高表达病例的术后无病生存期明显短于Oct-4低表达或无表达的病例(P=0.001)。在Cox回归模型中,肿瘤大小、淋巴结转移和Oct-4的表达为独立预后因子(分别为P=0.031、0.002和0.003)。结论 Oct-4在肺癌干细胞中高表达,并可作为肺癌发生、进展及分化的潜在生物标志。

Oct-4及生殖细胞核因子在精原干细胞体外分化前后的表达

目的：检测Oct-4和生殖细胞核因子（GCNF）在小鼠精原干细胞（SSCs）诱导分化前后的表达。方法：体外分离培养小鼠SSCs，用干细胞因子（SCF）诱导其向精母细胞方向分化，通过间接免疫荧光显色和RT-PCR，检测Oct-4和GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。结果：Oct-4在小鼠SaCs诱导前有表达，诱导2d后表达下降；而GCNF在小鼠SaCs诱导前呈阴性表达，向精母细胞诱导2d后呈阳性表达。结论：GCNF可能通过抑制Oct-4的表达促使SSCs分化。

胰腺导管癌干细胞抗原PSCA和Oct-4表达及意义

目的研究胰腺导管癌、癌旁上皮及慢性胰腺炎组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)和Oct-4表达及探讨其临床病理意义。方法51例胰腺导管癌、20例癌旁上皮及10例慢性胰腺炎手术切除标本常规石蜡包埋切片,PSCA和Oct-4染色方法为EnVision两步法。结果胰腺导管癌PSCA和Oct-4阳性表达率(52.9%,47.1%)明显高于癌旁上皮(25.0%,20.0%)和慢性胰腺炎(10.0%,10.0%),差异均有显著性意义(P<0.05)。高分化腺癌和无转移胰腺导管癌PSCA和Oct-4表达阳性率明显低于低分化腺癌和转移病例(P<0.05)。结论PSCA和Oct-4表达可能是反映胰腺导管癌发生、进展及预后的重要癌干细胞抗原。