福建省猪副猪嗜血杆菌病血清学调查及菌株ompP5基因序列分析

应用血清抗体间接ELISA方法对福建省8个地市的23个猪场采集的378份血清进行Hps抗体检测;采集疑似副猪嗜血杆菌感染病例的病料,用脱纤马血TSA平板对Hps进行分离与鉴定;用琼扩试验对分离株进行血清型鉴定;根据GenBank登录的HS0165株的ompP5基因序列合成1对特异性引物,提取分离菌株的基因组DNA进行PCR扩增,回收目的片断并进行克隆、测序和同源性分析。结果显示,福建省23个猪场的Hps场阳性率为100%,猪群阳性率为36.78%;从疑似感染Hps的猪只中共分离到52株Hps,分别为血清2型、4型、5型、13型和未定型,其中血清13型Hps分离最多;3株Hps分离株的外膜蛋白P5基因(ompP5)序列与GenBank中提交序列的同源性达到了93%以上。

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其OmpP5基因序列分析

为研究辽宁省副猪嗜血杆菌(Hps)OmpP5基因的遗传变异规律,从辽宁省阜新市某猪场疑似患有副猪嗜血杆菌病的患猪肺部采取组织病料进行细菌分离,通过革兰染色、生化鉴定、卫星现象及Hps 16S rRNA PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌。根据已发表的Hps OmpP5基因设计1对特异性引物,对分离株OmpP5基因进行扩增、克隆及测序,得到长度为1 116bp的OmpP5基因序列。将该序列与已发表Hps参考株的OmpP5基因进行同源性比对及系统发育树分析,发现核苷酸同源性为89.8%~99.5%,分离株与参考菌株№4在同一分支,表明OmpP5基因具有一定的保守性,分离株和№4亲缘关系较近。研究结果为阐明辽宁省Hps毒力基因及致病机理提供了参考依据。

福建地区副猪嗜血杆菌的主要生物学特性

为明确福建地区副猪嗜血杆菌的耐药性、血清型及其外膜蛋白P5(OmpP5)的同源性,对来自福建地区的患病猪进行了副猪嗜血杆菌的分离与鉴定,并采用琼脂扩散试验对其进行血清型鉴定和药敏试验;选取10株不同血清型代表株进行致病性试验;测定5株不同血清型菌株的OmpP5基因序列,比较相互间的同源性及与其他生物学特性的关系。结果显示,分离株的生化特性基本一致,代表株对小鼠有一定的致病性;所有分离菌株具有一种以上的耐药性,100%的菌株对青霉素、氨苄青霉素、新霉素和洁霉素敏感,93%和87%的菌株分别对链霉素和杆菌肽耐药;分离获得的52株菌株分属于5种血清型,其中24株为血清13型,12株为血清4型,11株为血清5型,2株为血清2型,3株未定型;5株代表菌株中OmpP5基因序列的同源性在93%以上,氨基酸序列同源性在91%以上。研究表明,该外膜蛋白P5基因与菌株的血清型和菌株的致病性无直接关系。