SCF/c-Kit信号通路通过抑制肥大细胞增殖调控影响病理性瘢痕形成的研究

目的探讨配体干细胞因子/c-KIT原癌基因(SCF/c-kit)对肥大细胞增殖的影响,并进一步探讨其在病理性瘢痕形成中的作用。方法收集病理性瘢痕组织和正常组织,通过甲苯胺蓝染色法检测组织中肥大细胞数目,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中干细胞因子SCF的表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测组织中SCF和其受体c-Kit的表达。建立病理性瘢痕裸鼠模型,16 d后将造模成功的裸鼠随机分为模型+沉默阴性对照(si-NC)组和模型+si-SCF组,分别于裸鼠瘢痕内注射si-NC、si-SCF质粒和脂质体混合液0.25 mL,另设对照组,注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。7 d后收集标本,游标卡尺测量裸鼠瘢痕体积大小,V.G染色检测瘢痕组织Ⅰ型胶原含量,甲苯胺蓝染色评估瘢痕组织肥大细胞数目,Western blotting检测组织中SCF和c-Kit的表达。结果病理性瘢痕患者的瘢痕组织出现大量肥大细胞,同时在病理性瘢痕患者血清中发现SCF高表达,而且在其瘢痕组织中SCF和c-Kit蛋白表达也增多;在病理性瘢痕模型裸鼠体内沉默SCF,抑制了c-Kit的表达,减小了模型裸鼠的瘢痕体积,降低了瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量,还抑制了肥大细胞增殖。结论SCF/c-Kit信号通路可能是通过抑制肥大细胞增殖,来调控病理性瘢痕的形成。SCF/c-Kit的表达失控可能也是病理性瘢痕形成的一个重要诱因。

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的: 探讨c kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况。方法: 用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GISTc kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变。结果: 60例GIST中kit基因突变率为63. 3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58. 3% );其次为编码胞外区的9号外显子突变(3. 3% );偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1. 7% ),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变。11号外显子的突变位点多集中在5′端的经典热点(42. 9% ),表现为密码子第557 -560的点突变和框内缺失。第二个热点位于11号外显子的3′端,为框内串联重复。后者主要发生在胃部,女性患者多见。60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性。未见编码近膜区的12号外显子突变。结论:CD117阳性GIST主要表现为c kit突变,分布在11号外显子经典热点和3′端热点,后者与老年女性胃GIST相关。PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性。

豚鼠过敏性休克IgE和C5复合物分布及c-kit蛋白表达

【目的】探索过敏性休克法医学客观诊断标准。【方法】建立豚鼠异种血清过敏性休克模型 ,采用LSAB免疫组化方法检测模型鼠脏器IgE ,c kit蛋白以及C5复合体的分布。【结果】过敏性休克豚鼠肝 ,脾未检出IgE ,肺、肾检见大量IgE ,胃黏膜层c kit蛋白阳性细胞明显增多 ,各脏器均未检测出C5复合物。【结论】过敏性休克时 ,肺小血管壁及管周 ,肾小管内检见大量IgE ,可作为法医检案客观诊断标准。同时提示 ,肺和肾是病变最严重的脏器 ,补体C5未参与异种血清造成的过敏性休克过程。胃黏膜层c kit蛋白阳性细胞增多可作为辅助诊断指标。

内脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞C-KIT表达增加

目的检测内脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)C-KIT表达,探讨ICC在内脏高敏感中的作用。方法取出生后8～21 d的Wistar大鼠,实验组每天直肠注射0.6%的冰醋酸0.3～0.5 mL,对照组给予同样剂量的0.9%氯化钠注射液。8周龄时行直肠扩张评估内脏敏感性,记录腹部回缩反射(AWR)为3分时的注水量。取降结肠组织,行C-KIT免疫组化和Western blot检测。结果与对照组相比,实验组大鼠AWR为3分时的注水量明显减少(P<0.05);C-KIT阳性细胞数在实验组大鼠结肠中(23.37±1.88)较对照组(15.33±1.57)明显增加(P<0.05);C-KIT蛋白表达在实验组(134.5±47.5)较对照组(40.6±30.5)明显增强(P<0.01)。结论 ICC增多可能是内脏高敏感的发病机制之一。

c-kit磷酸化与哮喘气道重塑的关系及布地奈德对其的影响

目的:研究干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/c-kit通路在气道重塑中的作用及糖皮质激素影响气道重塑的可能机制。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、布地奈德干预组,每组10只;鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;免疫沉淀/蛋白质印记(IP/Wb)法测定各组小鼠肺组织中c-kit受体磷酸化程度的变化。结果:HE染色提示哮喘组与对照组相比出现黏膜下层和平滑肌增厚,气道管腔狭窄,大量炎细胞浸润的表现,布地奈德组上述改变较哮喘组为轻;IP/Wb检测发现磷酸化的c-kit受体在哮喘组表达较对照组为高(P<0.01),而布地奈德组表达量低于哮喘组(P<0.01)。结论:c-kit受体磷酸化可能在哮喘气道重塑过程中表达上调;布地奈德抑制c-kit受体磷酸化可能是其减轻气道炎症和气道重塑的机制之一。

髓系白血病患者SHP-1与c-kit基因检测的临床意义

目的探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达,以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测67例髓系白血病患者(患者组)及33例正常对照组的白细胞SHP-1与c-kitmRNA表达。结果患者组中,急性髓系白血病(AML)、慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)和急变期(CML-BP)患者的SHP-1平均表达水平均低于对照组(P<0.05);CML-CP患者的c-kit平均表达水平高于对照组,CML-CP和CML-BP患者比较有统计学差异(P<0.05);34例初治AML患者中,SHP-1+的完全缓解率高于SHP-1-,而c-kit则相反。SHP-1+c-kit+的完全缓解率高于SHP-1-c-kit+。结论SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与c-kit基因参与白血病的发病,检测SHP-1与c-kit基因表达可作为判断髓系白血病患者预后的指标。

C-kit原癌基因在白血病细胞上的表达分析

目的 研究C kit(CD117)原癌基因在白血病细胞上的表达规律和意义。方法 采用CD4 5 SSC双参数 (对数 )散点图设门法进行三色流式细胞术分析。结果 急性髓细胞白血病 (AML)患者CD117表达率为 5 9 6 % ;慢性髓细胞白血病 (CML)CD117表达率为 16 7% ,且都为急变期 ;急性淋巴细胞性白血病 (ALL)极少表达 ,慢性淋巴细胞性白血病 (CLL)不表达 ;干细胞性白血病 (AUL)、双表型白血病 (BAL)高表达。结论 CD117有助于鉴别诊断髓系白血病 。

血小板第4因子抑制巨核细胞系膜结合型c-kit的表达(英文)

细胞表面受体c-kit与干细胞因子(SCF)对维持血细胞的生成起重要作用。血小板第4因子(PF4)能特异性地抑制巨核细胞生成。在本实验中研究了PF4对两个巨核细胞系HEL和Dami的c-kit表达影响。结果显示,经PF4处理的两株细胞,其c-kit mRNA表达量均下降,细胞表面受体数量降低,SCF与c-kit的结合量亦下降,两组差异有显著意义。在对细胞膜CD34表达影响方面,PF4与TGFβ1的作用相反,PF4促进CD34的表达,而TGFβ1抑制CD34的表达。研究表明,PF4抑制巨核细胞生长的机理,部分途径可能是通过抑制c-kit/SCF而产生。

原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

【目的】探讨原癌基因c-kitmRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义。【方法】建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型:42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组。6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kitmRNA的变化。【结果】在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitmRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义(P>0.05)。【结论】c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制。

小细胞肺癌组织中c-kit蛋白的表达及其原癌基因的检测

目的:探讨c-kit蛋白在小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)组织中的表达及c-kit原癌基因第9和11号外显子突变状态,及其与临床病理特点之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测13例手术切除SCLC组织标本中c-kit蛋白的表达,并用PCR扩增和基因测序的方法检测其第9和11号外显子序列。结果:c-kit蛋白的阳性表达率为69·2%(9/13)。13例SCLC组织中,1例(7·7%)c-kit基因9号外显子突变,5例(38·5%)c-kit基因11号外显子突变。突变方式有点突变和插入突变。结论:c-kit蛋白表达与SCLC发生发展密切相关,c-kit原癌基因第9和11号外显子均检测到突变,为临床靶向治疗SCLC提供依据。

c-kit原癌基因及其配体干细胞因子的造血调控功能

c-kit原癌基因及干细胞因子(SCF)是一对受体及配体,相当于小鼠W/W^v和Sl/Sl^d的缺陷,二者对造血功能十分重要,c-kit受体表达于造血干/祖细胞,因此SCF能调节骨髓细胞,淋巴细胞及肥大细胞的生成,且与造血细胞粘附于骨髓基质有关,SCF且能动员干/祖细胞。c-kit受体及SCF与一些血液病的关系甚为密切,二者有临床应用前景,可能有助于基因治疗。

Ikaros通过靶向c-KIT抑制B-ALL白血病细胞的增殖

Ikaros是一种重要的造血细胞分化与发育调控因子,其基因结构、蛋白质活性的改变与淋巴细胞白血病的发生密切相关。致癌基因c-KIT与白血病的发生有直接联系,但Ikaros与c-KIT之间的调控关系尚未见报道。本研究报道,在人急性B淋巴细胞白血病(B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞中,Ikaros可靶向调控c-KIT基因的转录与蛋白质表达。通过在人B-ALL细胞系Nalm6中分别高表达和shRNA干扰Ikaros后,qRT-PCR与Western印迹结果显示,Ikaros可直接抑制c-KIT基因的表达。双荧光素酶报告实验检测Ikaros及其突变体对c-KIT基因的直接靶向作用。结果显示,野生型Ikaros可明显抑制c-KIT的表达,而突变体则不能。进一步利用染色质免疫共沉淀技术(chromatin-immunoprecipitation,Ch IP),检测Ikaros对c-KIT上游启动子序列的结合活力。结果显示,Ikaros蛋白在c-KIT的上游调控区约-500 bp处有明显的结合。Ikaros通过靶向cKIT上游启动子,抑制c-KIT表达,抑制B-ALL细胞的增殖,为临床治疗白血病提供了新思路。

类c-kit原癌蛋白在多伊棺头蟋胚后精子发生中的表达和定位

为了了解类c-kit原癌蛋白在多伊棺头蟋Loxoblemmus doenitzi Stein胚后精子发生中的表达、定位及可能的调控作用,采用常规免疫组织化学方法进行了相关研究。结果表明:处于减数分裂中期Ⅰ至末期Ⅱ的初级精母细胞的细胞膜上有类c-kit原癌蛋白阳性颗粒;精巢或受精囊内成熟精子头部也具有类c-kit原癌蛋白阳性颗粒。结果反映了类c-kit蛋白对于维持动物精子发生过程中减数分裂、精子成熟及受精能力具有特殊功能。

三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸组织雄激素受体和c-kit表达的影响

目的通过检测三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸生精小管的形态学变化和睾丸组织雄激素受体(AR)和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达,验证三七复方合剂对慢性甲醛熏染的疗效。方法将18只SD雄性大鼠随机均分为对照组、甲醛组和治疗组,其中甲醛组和治疗组在甲醛熏染箱内熏染8周(8h/d),治疗组自第5周起每天给予三七复方合剂灌胃治疗,持续4周。实验结束时,所有大鼠称量体重和睾丸重量,组织切片行HE染色和免疫组织化学检测,观察睾丸生精小管的形态学变化及睾丸组织AR和c-kit的表达。结果甲醛组鼠重和睾丸重量明显下降;经三七复方合剂治疗后,鼠重和睾丸重量较甲醛组明显增加(P<0.05)。甲醛组大鼠的睾丸生精小管萎缩,小管上皮层细胞排列紊乱,精子明显减少;三七复方治疗4周后基本恢复正常,管腔内可见大量精子。甲醛组睾丸组织AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显减弱,治疗组生精上皮细胞的雄激素受体和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显增强(P<0.05),达到正常水平。结论较长时间甲醛熏染可使大鼠的体重和睾丸重量下降,生精小管损伤,睾丸组织中多种细胞AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达下降,三七复方合剂的应用有较明显治疗效果。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变多态性分析

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stomal tumors,GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突变多态性。方法对93例GIST标本采用PCR扩增和基因测序的方法检测c-kit基因9、11、13、17号外显子和PDGFRA基因12、18号外显子序列。结果在93例GIST中共检测到c-kit基因突变64例(68.82%),其中11号外显子突变56例,占全部病例的60.22%(56/93);9号外显子突变4例,占全部病例的4.30%(4/93);13号外显子突变3例,占全部病例的3.23%(3/93);17号外显子突变1例,为与11号外显子共突变,占全部病例的1.08%(1/93)。11号外显子突变方式以缺失突变最常见,占55.36%(31/56),其次是点突变(26.79%,15/56)和插入突变(串联重复)(14.29%,8/56),再次是伴点突变的缺失突变(3.57%,2/56);突变绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。突变位点多集中在5'端的经典热点,其次为3'端的框内串联重复。PDGFRA基因突变共检测到4例,其中1例为与c-kit共突变,其余3例占无c-kit突变病例的10.34%(3/29),占CD117阴性病例的37.5%(3/8),且均为18号外显子突变。结论大部分GIST中存在c-kit或PDGFRA基因的突变,少部分病例存在c-kit基因不同外显子双突变或c-kit基因和PDGFRA基因双突变共存型,其基因突变分型能指导伊马替尼的肿瘤靶向治疗。

抗c-kit特异性siRNA对肺泡巨噬细胞介导的炎性因子生成的影响

目的:通过RNA干扰的方法抑制c-kit基因的表达,观察其对由螨变应原活化的肺泡巨噬细胞所介导的炎性因子生成的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,密度梯度离心法及免疫磁珠分离出血液CD4+T细胞。经螨变应原活化后的肺泡巨噬细胞与CD4+T细胞共培养。采用抗c-kit特异性siRNA抑制其表达,流式细胞术及Weatern blot检测沉默效果,酶联免疫吸附法测定培养上清炎性因子。结果:siRNA在转染剂的介导下可有效转入肺泡巨噬细胞内,明显抑制了c-kit蛋白的表达,同时减少了肺泡巨噬细胞介导的炎性因子的生成。结论:抗c-kit特异性siRNA可有效抑制肺泡巨噬细胞介导的炎性因子的生成。

恶性上皮性肿瘤中c-kit基因蛋白表达意义探讨

目的：了解恶性上皮性肿瘤c-kit基因蛋白表达分布及其意义。方法：回顾我院及南京军区福州总医院2005-08～2006-08共634例外科手术切除病检标本，免疫组化检测CD117在恶性上皮性肿瘤表达。结果：CD117阳性癌症患者共16例。胃肠道癌8例，其中1例为复发性癌，乳腺癌6例，肺癌2例。结论：少数恶性上皮性肿瘤c-kit基因蛋白表达，可能提示部分恶性上皮性肿瘤的格列卫用药指征。

原癌基因c-kit在免疫性生精障碍模型中的表达研究

目的:探讨原癌基因c-kit在免疫性生精障碍模型中的表达及意义。方法:建立免疫性生精障碍模型,在建模过程中对模型进行分析:在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取1组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kit mRNA的变化,用免疫组化法检测其蛋白的变化。结果:在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kit mRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果提示随着建模时间的推移,管腔内c-kit阳性细胞的数目有减少的趋势。结论:c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因的低表达可能参与免疫性生精障碍导致不育的发病机制。

c-kit原癌基因两个相邻EcoRI片段的核苷酸序列和结构特点

c-kit原癌基因(Proto-oncogene)是猫逆转录病毒HZ4 FeSV v-kit癌基因的类似物,其结构与CSF-1R和PDGFR十分相似,基因产物是一种跨膜糖蛋白,具有酪氨酸蛋白激酶活性,细胞外部分则可能是一种受体,可接受细胞外信号的调节。 本文报道人c-kit原癌基因两个相邻片段的核苷酸序列及其结构特点。

过表达Notch1胞内域对c-Kit^+骨髓间充质干细胞分化的影响

背景:Notch信号活化对干细胞分化有重要的影响,其效应具有细胞特异性,但有关Notch信号与c-Kit^+骨髓间充质干细胞分化的相关报道较少。目的:分析Notch1信号活化对c-Kit^+骨髓间充质干细胞分化的影响。方法:应用PCR从c DNA文库中调取Notch1受体胞内域(N1-ICD)序列,定向克隆入腺病毒穿梭质粒GV314构建重组质粒,与腺病毒辅助包装质粒p BHGlox?E1,3 Cre在HEK293T细胞进行同源重组,获得N1-ICD过表达腺病毒颗粒(N1-ICD-Ad)。分离SD大鼠股骨骨髓间充质干细胞,应用磁激活细胞分选法分选出c-Kit^+亚群并用流式鉴定其纯度。将N1-ICD-Ad腺病毒感染c-Kit^+骨髓间充质干细胞,8 d后定量RT-PCR或免疫荧光分析c-Kit^+骨髓间充质干细胞中Notch1信号的活化及细胞的分化。结果与结论:(1)从c DNA文库中成功获得N1-ICD序列,将此序列成功克隆入线性化GV314载体,抗性克隆经测序证实无误;(2)在辅助包装质粒p BHGloxΔE1,3 Cre的协助下,成功获得滴度为2×10^(12)PFU/L重组腺病毒颗粒N1-ICD-Ad;(3)成功从SD大鼠骨髓间充质干细胞获得c-Kit^+细胞亚群,纯度达91.6%。包装的腺病毒能有效感染c-Kit^+骨髓间充质干细胞;(4)与空白对照组和阴性对照病毒组相比,N1-ICD-Ad感染c-Kit^+骨髓间充质干细胞后N1-ICD在胞质与胞核聚集,显著上调了Notch下游基因Hes1的表达,显著诱导心肌细胞分化基因Nkx2.5和c Tn T的表达,显著上调内皮细胞分化基因v WF的表达,轻微上调平滑肌细胞分化基因SM22α的表达。(5)实验结果提示Notch1信号的活化有助于c-Kit^+骨髓间充质干细胞的多向分化,N1-ICD过表达载体构建及腺病毒的包装并转染成功,为进一步研究Notch1信号活化对于干细胞生物学功能的影响奠定了基础。