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蓝舌病新疆分离株VP7蛋白编码基因序列分析及一步法RT-PCR方法的建立
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作者 马晓菁 谷文喜 +5 位作者 叶锋 刘帅 刘丽娅 谢彩云 钟旗 易新萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期253-259,共7页
【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法,为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列,登陆GenBank对序列进行同源性Blas... 【目的】分析蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,建立蓝舌病新疆分离株一步法RT-PCR方法,为新疆BTV分子流行病学调查及防控提供技术支持。【方法】采用二代测序技术获得新疆分离株S7基因序列,登陆GenBank对序列进行同源性Blast比对,用软件MEGA 5.0分析序列差异,根据蓝舌病新疆分离株编码VP7蛋白S7基因保守序列,运用软件Oligo6.0设计引物,对蓝舌病新疆分离株S7基因进行RT-PCR扩增,并验证该方法的特异性及敏感性。【结果】蓝舌病中国新疆分离株编码VP7蛋白S7基因序列与哈尔滨报道BTV分离株S7基因片段相似度较高为89.64%,与中国云南报道BTV-29型分离株、蒙古国BTV分离株S7基因片段相似度分别为87.49%和87.39%;与德国BTV分离株S7基因片段相似度为80.70%,其余均无同源性序列。中国新疆分离株S7基因片段序列与4条同源序列间存在26处核苷酸差异,9处氨基酸差异。【结论】建立的蓝舌病中国新疆分离株S7基因片段一步法RT-PCR方法具有良好的特异性,仅BTV中国新疆分离株扩增获得目的条带,该方法的敏感性为4.0×10^(3)copies/mL。 展开更多
关键词 蓝舌病 VP7蛋白 rt-pcr
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猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法的建立
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作者 于浩洋 王彩霞 +5 位作者 仇松寅 刘晓飞 景宏丽 吴绍强 冯春燕 林祥梅 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期95-101,共7页
猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方... 猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性,与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性好,对慢病毒阳性对照品的最低检出限为10~1 copies/μL,比普通RT-PCR灵敏10倍。使用该方法检测模拟病毒样品,发现最低检出限为10~1 TU/mL,与荧光定量RT-PCR方法一致。本研究首次建立了可检测猪Linda病毒的巢式RT-PCR方法,其特异性强、灵敏度高,为在口岸以及条件有限的场地对猪Linda病毒进行精准且快速的检测提供了有效技术手段,也为防范Linda病毒传入提供了有力技术支撑。 展开更多
关键词 猪Linda病毒 巢式rt-pcr 检测方法 非典型瘟病毒
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量rt-pcr 检测方法
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基于RT-PCR方法对河北省桃病毒和类病毒种类的调查鉴定
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作者 荣春蕊 李晓颍 +7 位作者 苏凯 张晨光 肖坤 李刚 武军凯 肖啸 张立彬 刘春生 《中国果树》 2024年第8期94-97,103,共5页
病毒是造成桃果实产量和品质下降的原因之一,RT-PCR是检测病毒的常用分子生物学方法。利用RT-PCR方法对河北省113份桃样品进行了13种病毒的检测,结果表明,检测到的10种病毒包括ACLSV、PBNSPaV、HSVd、NSPaV、PNRSV、PaLV、PLMVD、APCLSV... 病毒是造成桃果实产量和品质下降的原因之一,RT-PCR是检测病毒的常用分子生物学方法。利用RT-PCR方法对河北省113份桃样品进行了13种病毒的检测,结果表明,检测到的10种病毒包括ACLSV、PBNSPaV、HSVd、NSPaV、PNRSV、PaLV、PLMVD、APCLSV、PeVD和PPV,其中ACLSV检测率最高,其次是PBNSPaV和HSVd 2种病毒。病毒具有复合侵染的现象,三重侵染和四重侵染的检测率最高,没有检测到不被病毒侵染和单一侵染的样品。研究结果为河北省桃病毒脱除、无病毒苗木繁育奠定了理论基础。 展开更多
关键词 河北省 病毒 rt-pcr
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鸽微RNA病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 张靖鹏 陈翠腾 +5 位作者 林琳 付环茹 李兆龙 江斌 黄瑜 万春和 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期860-866,共7页
旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进... 旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其基因特征后,设计特异性实时荧光定量RT-PCR检测(RT-qPCR)引物组,建立检测PiMeV的RT-qPCR方法。结果显示:PiMeV-CHN001株3 C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸,和其他2株野鸽源PiMeV(MeV-B1株和MeV-B2株)核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的RT-qPCR方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强,仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为(81.69±0.22)℃],对鸽源禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸽源禽I型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1)、鸽输血传播病毒(pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAd)及鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)检测均未见特异性扩增信号;敏感性优,最低检测限为54.0拷贝·μL^(-1);重复性好,批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测,发现2份阳性样品(阳性率为4.76%)。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息;建立的RT-qPCR方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。 展开更多
关键词 信鸽 鸽微RNA病毒 3 C基因 序列分析 实时荧光定量rt-pcr方法
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赤羽病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
6
作者 李超 王素春 +5 位作者 隋金钰 潘俊慧 魏世萌 祁倩 周凯钰太 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期111-117,共7页
为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并... 为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并利用该方法与AKAV检疫行业标准推荐方法同时对临床采集的80份牛羊血液样品进行检测,以检验方法的临床应用效果。结果显示:本研究建立的检测方法敏感性较高,最低检测限为13.4 copies/μL;特异性良好,与口蹄疫病毒、牛冠状病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒、牛白血病病毒等均无交叉反应;组内试验变异系数为0.93%~2.47%,组间试验为1.25%~2.76%,重复性良好;利用建立的方法从80份临床样品中检出AKAV阳性样品21份,该检测结果与AKAV检疫行业标准推荐方法的符合率为98.75%。结果表明,本研究建立的AKAV荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高,特异性及重复性好,适用于赤羽病临床检测,为赤羽病病原学监测和诊断技术标准开发提供了技术支撑。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 实时荧光定量rt-pcr 方法建立 初步应用
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柑橘3种病毒类病原多重RT-PCR检测技术的建立及应用
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作者 袁琳凯 马崇欢 +5 位作者 李丁山 陈志炜 江宵烽 丁新伦 张洁 吴祖建 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期339-344,共6页
【目的】建立柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)、柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)和啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid,HSVd)的多重RT-PCR检测体系。【方法】设计多重RT-PCR引物,分析其特异性,确... 【目的】建立柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)、柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)和啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid,HSVd)的多重RT-PCR检测体系。【方法】设计多重RT-PCR引物,分析其特异性,确定其最佳浓度比、最适退火温度及灵敏度,在此基础上对福建地区的柑橘样品进行检测。【结果】确定了CYVCV-F/R、CTV-F/R和HSVd-F/R等3对引物的最佳浓度比例为1∶1∶2,最适退火温度为52.9℃,灵敏度结果显示该体系可检测模板稀释到10^(-2)的阳性样品。应用该体系对采自福建部分地区的157份柑橘样品进行检测,结果发现,CYVCV、CTV和HSVd的检出率分别为47.1%、56.7%和22.9%。【结论】成功建立了柑橘CYVCV、CTV和HSVd病原的多重RT-PCR检测方法,为该类病害的检测提供准确、快速的检测方法。 展开更多
关键词 柑橘黄化脉明病毒 柑橘衰退病毒 啤酒花矮化类病毒 多重rt-pcr
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山羊地方性鼻内肿瘤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 李鹏飞 高桂琴 +6 位作者 周广青 吴锦艳 颜新敏 曹小安 何继军 袁莉刚 尚佑军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2259-2266,共8页
山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor, ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在... 山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor, ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在,对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法,本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针,建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示,重组质粒标准品模板浓度为6.30×10^(2)~6.30×10^(7) copies·μL^(-1)呈现良好的线性关系,相关系数R^(2)为0.996 5,扩增效率为110%,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×10^(1) copies·μL^(-1);组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好;与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus, FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应,表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法的检出率更高。综上表明,本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法,为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。 展开更多
关键词 山羊地方性鼻内肿瘤病毒 羊内源性逆转录病毒 TAQMAN 荧光定量rt-pcr
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高致病性猪蓝耳病RT-PCR检测 被引量:2
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作者 张力超 《吉林畜牧兽医》 2024年第2期34-36,共3页
为了解当地生猪养殖场猪蓝耳病感染情况,这次调查研究和结果为高致病性猪蓝耳病的预防和控制提供了实验数据的依据。本实验就当地一些规模养猪场和一些个体养猪户猪场养的猪突然出现以食欲废绝、耳末梢发紫、体温高、发病率、死亡率高... 为了解当地生猪养殖场猪蓝耳病感染情况,这次调查研究和结果为高致病性猪蓝耳病的预防和控制提供了实验数据的依据。本实验就当地一些规模养猪场和一些个体养猪户猪场养的猪突然出现以食欲废绝、耳末梢发紫、体温高、发病率、死亡率高为特征的疾病,对病死猪进行了无菌采样,实验室检测。 展开更多
关键词 引物 rt-pcr 蓝耳病
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基于TeamSTEPPS理论的案例情景教学法在急诊护理团队培训中的应用
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作者 陈清清 黄赣英 +1 位作者 凡欣欣 沈小玲 《全科医学临床与教育》 2024年第1期85-87,共3页
急诊科具有危重患者多,突发状况多,医疗风险高等特点,目前国内大多数医院急诊科护士以团队形式开展工作,但临床工作中易出现职责分工不明确、配合不协调、组织抢救混乱等问题^([1])。团队培训是增强团队优质高效协作的重要途径^([2]),... 急诊科具有危重患者多,突发状况多,医疗风险高等特点,目前国内大多数医院急诊科护士以团队形式开展工作,但临床工作中易出现职责分工不明确、配合不协调、组织抢救混乱等问题^([1])。团队培训是增强团队优质高效协作的重要途径^([2]),为进一步提升急诊护理团队协作,保障患者安全,本次研究将前期基于提高医疗质量和患者安全的团队策略与工具(team strategies and tools to enhance performance and patient safety,TeamSTEPPS)理论构建的急诊护理团队培训方案^([3])进行临床应用,取得了较好的效果。现报道如下。 展开更多
关键词 急诊护理 急诊科护士 医疗风险 团队培训 step 团队协作 团队策略 患者安全
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"Five steps four quadrants" modularized en bloc dissection technique for accessing hepatic hilum lymph nodes in laparoscopic pancreaticoduodenectomy 被引量:1
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作者 Xiao-Si Hu Yong Wang +5 位作者 Hong-Tao Pan Chao Zhu Shi-Lei Chen Hui-Chun Liu Qing Pang Hao Jin 《World Journal of Gastrointestinal Surgery》 SCIE 2024年第2期503-510,共8页
BACKGROUND Although en bloc dissection of hepatic hilum lymph nodes has many advantages in radical tumor treatment,the feasibility and safety of this approach for laparo-scopic pancreaticoduodenectomy(LPD)require furt... BACKGROUND Although en bloc dissection of hepatic hilum lymph nodes has many advantages in radical tumor treatment,the feasibility and safety of this approach for laparo-scopic pancreaticoduodenectomy(LPD)require further clinical evaluation and investigation.AIM To explore the application value of the"five steps four quadrants"modularized en bloc dissection technique for accessing hepatic hilum lymph nodes in LPD patients.METHODS A total of 52 patients who underwent LPD via the"five steps four quadrants"modularized en bloc dissection technique for hepatic hilum lymph nodes from April 2021 to July 2023 in our department were analyzed retrospectively.The patients'body mass index(BMI),preoperative laboratory indices,intraoperative variables and postoperative complications were recorded.The relationships between preoperative data and intraoperative lymph node dissection time and blood loss were also analyzed.RESULTS Among the 52 patients,36 were males and 16 were females,and the average age was 62.2±11.0 years.There were 26 patients with pancreatic head cancer,16 patients with periampullary cancer,and 10 patients with distal bile duct cancer.The BMI was 22.3±3.3 kg/m²,and the median total bilirubin(TBIL)concentration was 57.7(16.0-155.7)µmol/L.All patients successfully underwent the"five steps four quadrants"modularized en bloc dissection technique without lymph node clearance-related complications such as postoperative bleeding or lymphatic leakage.Correlation analysis revealed significant associations between preoperative BMI(r=0.3581,P=0.0091),TBIL level(r=0.2988,P=0.0341),prothrombin time(r=0.3018,P=0.0297)and lymph node dissection time.Moreover,dissection time was significantly correlated with intraoperative blood loss(r=0.7744,P<0.0001).Further stratified analysis demonstrated that patients with a preoperative BMI≥21.9 kg/m²and a TIBL concentration≥57.7μmol/L had significantly longer lymph node dissection times(both P<0.05).CONCLUSION The"five steps four quadrants"modularized en bloc dissection technique for accessing the hepatic hilum lymph node is safe and feasible for LPD.This technique is expected to improve the efficiency of hepatic hilum lymph node dissection and shorten the learning curve;thus,it is worthy of further clinical promotion and application. 展开更多
关键词 Five steps four quadrants Hepatic hilum lymph node Modularized en bloc clearance Laparoscopic pancreaticoduodenectomy
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一步RT-PCR法检测苹果锈果类病毒和苹果凹果类病毒
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作者 马宁 孔令荣 +3 位作者 张学勇 赵玲玲 由春香 张振鲁 《落叶果树》 2024年第3期10-13,共4页
由类病毒引起的苹果病害在中国苹果主产区普遍发生,严重制约苹果产业的健康发展。对采自不同地区的带有典型症状的弘前富士、南方脆及惠民短枝富士果实,进行苹果锈果类病毒(ASSVd)和凹果类病毒(ADFVd)检测,发现两种病毒能够共侵染。根据... 由类病毒引起的苹果病害在中国苹果主产区普遍发生,严重制约苹果产业的健康发展。对采自不同地区的带有典型症状的弘前富士、南方脆及惠民短枝富士果实,进行苹果锈果类病毒(ASSVd)和凹果类病毒(ADFVd)检测,发现两种病毒能够共侵染。根据ASSVd和ADFVd保守序列设计通用引物,建立了能快速、同时检测两种类病毒的RT-PCR方法。 展开更多
关键词 苹果锈果类病毒 苹果凹果类病毒 rt-pcr检测
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Performance improvement in stepped solar still modified by sponge layer
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作者 Mahtab TARAHOMI Saman RASHIDI +1 位作者 Faramarz HORMOZI Shahabeddin ASHTIANI 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第6期1973-1982,共10页
In this paper,the experimental investigation on the performance improvement of conventional stepped solar still is conducted.The steps are covered by the porous material to improve the performance of the conventional ... In this paper,the experimental investigation on the performance improvement of conventional stepped solar still is conducted.The steps are covered by the porous material to improve the performance of the conventional device and increase the evaporation rate.All the parameters,including the temperature on the glass surface,the water temperature inside the evaporation zone,and the amount of water produced in both conventional and modified stepped solar stills are measured and compared.The efficiency of two devices and their exergy efficiency have been calculated.Finally,the economic analysis of both devices has been done to check the economic feasibility of the modified device.The amount of freshwater generated during one day was 2244.4 and 3076.2 mL/m^(2),respectively for the conventional and modified stepped solar stills.As a result,the amount of water produced in one day by modified stepped solar still is 35.5% more than the conventional one.Also,the costs for the conventional and modified stepped solar stills have been calculated as 0.0359 and 0.029$/(L·m^(-2)),respectively. 展开更多
关键词 stepped solar still black sponge EFFICIENCY EXERGY economic analysis
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Controllable step-flow growth of GaN on patterned freestanding substrate
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作者 Peng Wu Jianping Liu +7 位作者 Lei Hu Xiaoyu Ren Aiqin Tian Wei Zhou Fan Zhang Xuan Li Masao Ikeda Hui Yang 《Journal of Semiconductors》 EI CAS CSCD 2024年第2期46-50,共5页
A new kind of step-flow growth mode is proposed,which adopts sidewall as step source on patterned GaN substrate.The terrace width of steps originated from the sidewall was found to change with the growth temperature a... A new kind of step-flow growth mode is proposed,which adopts sidewall as step source on patterned GaN substrate.The terrace width of steps originated from the sidewall was found to change with the growth temperature and ammonia flux.The growth mechanism is explained and simulated based on step motion model.This work helps better understand the behaviors of step advancement and puts forward a method of precisely modulating atomic steps. 展开更多
关键词 step-flow growth GAN terrace width step motion
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猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法的建立和应用 被引量:1
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作者 汪志恒 王景成 +1 位作者 佘志成 王凯 《现代畜牧科技》 2024年第1期6-9,共4页
目的:建立一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法。方法:选择云南省大理地区患有猪支原体肺炎疾病的60只猪作为研究对象,针对猪肺炎支原体的保守序列p36基因设计了引物和探针,建立猪支原体肺炎RT-PCR检测反应体系,并对其灵敏度、特异性、重复... 目的:建立一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法。方法:选择云南省大理地区患有猪支原体肺炎疾病的60只猪作为研究对象,针对猪肺炎支原体的保守序列p36基因设计了引物和探针,建立猪支原体肺炎RT-PCR检测反应体系,并对其灵敏度、特异性、重复性进行分析及临床样本验证。结果:RT-PCR检测灵敏度为10^(2)拷贝、与PRRSV、PPV、FMDV、PCV、CSFV、APP等无交叉反应,批内和批间变异系数均小于2.00%,肺组织样本检出阳性数26例(86.67%),鼻拭子样本检出阳性数19例(63.33%)。结论:该研究成功建立了一种猪支原体肺炎RT-PCR诊断方法,具有较高的检测灵敏度和特异性,重复性能良好,这为后期MPS的临床精准诊断和疫病科学防控提供试验依据。 展开更多
关键词 猪支原体肺炎 rt-pcr 灵敏度 特异性
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Half-integer Shapiro steps in MgB_(2) focused He ion beam Josephson junctions
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作者 殷大利 蔡欣炜 +5 位作者 徐铁权 孙瑞宁 韩颖 张焱 王越 甘子钊 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第8期483-489,共7页
Half-integer microwave induced steps(Shapiro steps)have been observed in many different Josephson junction systems,which have attracted a lot of attention because they signify the deviation of current phase relation(C... Half-integer microwave induced steps(Shapiro steps)have been observed in many different Josephson junction systems,which have attracted a lot of attention because they signify the deviation of current phase relation(CPR)and uncover many unconventional physical properties.In this article,we first report the discovery of half-integer Shapiro steps in MgB_(2)focused He ion beam(He-FIB)Josephson junctions.The half-integer steps'dependence on microwave frequency,temperature,microwave power,and magnetic field is also analyzed.We find that the existence of half-integer steps can be controlled by the magnetic field periodically,which is similar to that of high temperature superconductor(HTS)grain boundary junctions,and the similarity of the microstructures between gain boundary junctions and He-FIB junctions is discussed.As a consequence,we mainly attribute the physical origin of half-integer steps in MgB_(2)He-FIB junctions to the model that a He-FIB junction is analogous to a parallel junctions'array.Our results show that He-FIB technology is a promising platform for researching CPR in junctions made of different superconductors. 展开更多
关键词 Josephson junction half-integer Shapiro steps MgB_(2) focused helium ion beam
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Stability analysis of intermittently jointed rock slopes based on the stepped failure mode
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作者 LI Dejian FU Junwen +4 位作者 LI Hekai CHENG Xiao ZHAO Lianheng ZHANG Yingbin PENG Xinyan 《Journal of Mountain Science》 SCIE CSCD 2024年第3期1019-1035,共17页
In practical engineering,due to the noncontinuity characteristics of joints in rock slopes,in addition to plane failure,stepped sliding failure may occur for intermittently jointed rock slopes.Especially for intermitt... In practical engineering,due to the noncontinuity characteristics of joints in rock slopes,in addition to plane failure,stepped sliding failure may occur for intermittently jointed rock slopes.Especially for intermittently bedding jointed rock slopes,the correlation and difference in strength parameters between joints and rock bridges,along with the various failure modes and intermittency of rock bridges,contribute to the complexity of stepped failure modes and the unpredictability of failure regions.Based on the upper-bound limit analysis method and multi-sliders step-path failure mode,considering the shear and tensile failure of rock bridges and the weakened relationship between the strength parameters of rock bridges and jointed surfaces,by introducing the modified M-C failure criterion and the formula for calculating the energy consumption of tensile failure of rock bridges,two failure mechanisms are constructed to obtain the safety factor(F_(s))of intermittently jointed rock slopes.The sequential quadratic programming method is used to obtain the optimal upper-bound solution for F_(s).The influence of multiple key parameters(slope height H,horizontal distance L,Slope angleβ,shear strength parameters of the rock bridgeφr and cr,Dimensionless parameter u,weakening coefficients of the internal friction angle and cohesion between the rock bridges and joint surfaces Kφand Kc)on the stability analysis of intermittently jointed rock slopes under the shear failure mode of rock bridges as well as under the tensile failure mode is also explored.The reliability of the failure mechanisms is verified by comparative analysis with theoretical results,numerical results,and landslide cases,and the variation rules of F_(s)with each key parameter are obtained.The results show that F_(s) varies linearly withφr and cr of the rock bridge and with K_(φ)and K_(c),whereas F_(s)changes nonlinearly with H and L.In particular,with the increase in Kφand Kc,Fs increases by approximately 52.78%and 171.02%on average,respectively.For rock bridge tensile failure,F_(s) shows a nonlinearly positive correlation withφr,cr,Kφand Kc.In particular,with the increase in Kφand Kc,Fs increases by approximately 13%and 61.69%on average,respectively.Fs decreases rapidly with increasing slope gradientβand decreasing dimensionless parameterμ.When Kφand Kc are both less than 1.0,the stepped sliding surface occurs more easily than the plane failure surface,especially in the case of tensile failure of the rock bridge.In addition,rock slopes with higher strength parameters,taller heights,and greater weakening coefficients are prone to rock bridge tension failure with lower Fs,and more attention should be given to the occurrence of such accidents in actual engineering. 展开更多
关键词 Jointed rock slopes stepped sliding failure Weakening characteristics Modified M‒C failure criterion
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Transfer matrix method for free and forced vibrations of multi-level functionally graded material stepped beams with different boundary conditions
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作者 Xiaoyang SU Tong HU +3 位作者 Wei ZHANG Houjun KANG Yunyue CONG Quan YUAN 《Applied Mathematics and Mechanics(English Edition)》 SCIE EI CSCD 2024年第6期983-1000,共18页
Functionally graded materials(FGMs)are a novel class of composite materials that have attracted significant attention in the field of engineering due to their unique mechanical properties.This study aims to explore th... Functionally graded materials(FGMs)are a novel class of composite materials that have attracted significant attention in the field of engineering due to their unique mechanical properties.This study aims to explore the dynamic behaviors of an FGM stepped beam with different boundary conditions based on an efficient solving method.Under the assumptions of the Euler-Bernoulli beam theory,the governing differential equations of an individual FGM beam are derived with Hamilton’s principle and decoupled via the separation-of-variable approach.Then,the free and forced vibrations of the FGM stepped beam are solved with the transfer matrix method(TMM).Two models,i.e.,a three-level FGM stepped beam and a five-level FGM stepped beam,are considered,and their natural frequencies and mode shapes are presented.To demonstrate the validity of the method in this paper,the simulation results by ABAQUS are also given.On this basis,the detailed parametric analyses on the frequencies and dynamic responses of the three-level FGM stepped beam are carried out.The results show the accuracy and efficiency of the TMM. 展开更多
关键词 transfer matrix method(TMM) free vibration forced vibration functionally graded material(FGM) stepped beam
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马病毒性动脉炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 梁歆歆 王科珂 +6 位作者 蒋刚强 徐军 陈凯云 王艳 肖媛媛 白梅花 刘东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期159-163,共5页
为建立检测马病毒性动脉炎病毒(EAV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对EAV ORF7基因序列设计引物及探针,并对其反应体系进行优化,建立标准曲线,结果显示,EAV荧光定量RT-PCR方法在退火温度为61℃、引物和探针终浓度均为0.6μmol/L的... 为建立检测马病毒性动脉炎病毒(EAV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对EAV ORF7基因序列设计引物及探针,并对其反应体系进行优化,建立标准曲线,结果显示,EAV荧光定量RT-PCR方法在退火温度为61℃、引物和探针终浓度均为0.6μmol/L的反应条件下效果最优;质粒标准品体外转录的cRNA在1.6×10^(7)拷贝/μL~1.6×10^(2)拷贝/μL时与Ct值之间呈现良好的线性关系,标准曲线方程为y=-2.68x+32.88,R^(2)=0.9927,初步建立了EAV荧光定量RT-PCR方法。采用该方法检测EAV、马焦虫、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马流感病毒,结果显示,该方法仅能特异性检测到EAV,其他病原检测均为阴性,该方法特异性强;将体外转录合成的质粒标准品cRNA 10倍倍比稀释后利用该方法检测,结果显示该方法最低检测限为1.6×10^(2)拷贝/μL,灵敏性高;重复性试验结果显示,该方法组内及组间变异系数均小于2.0%,重复性好。采用本实验建立的荧光定量RT-PCR方法和文献发表的EAV荧光定量RT-PCR方法分别对234份临床样品进行检测,两者的阳性检出率均为14.1%(33/234),两种方法的符合率为100%。本研究建立的荧光定量RT-PCR检测方法为马病毒性动脉炎的防控提供了新的技术手段和思路。 展开更多
关键词 马病毒性动脉炎 ORF7基因 荧光定量rt-pcr
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牛病毒性腹泻病毒TaqMan探针荧光RT-PCR方法的建立和临床应用
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作者 袁野 董雅琴 +9 位作者 张慧 刘爽 崔进 尼博 魏荣 顾丛丛 段纲 张锋 李晓成 代飞燕 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期139-145,共7页
为建立一种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的快速检测方法,本研究根据国内BVDV流行毒株5'-UTR序列保守区域设计1对特异性引物和TaqMan探针,并优化了反应条件,最终建立了一种检测BVDV基因1型(BVDV-1)的TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法,并开展... 为建立一种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的快速检测方法,本研究根据国内BVDV流行毒株5'-UTR序列保守区域设计1对特异性引物和TaqMan探针,并优化了反应条件,最终建立了一种检测BVDV基因1型(BVDV-1)的TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法,并开展7省份BVDV-1型检测和流行情况分析。结果显示:所建立方法能够特异性检测出BVDV-1,与基因2型BVDV、猪瘟病毒、边界病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒等病原无交叉反应;灵敏度高,最低检测下限为4.3 copies/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性良好。7省份规模化牛养殖场BVDV-1型平均阳性率为17.40%(161/925),序列分析表明我国主要流行的为BVDV-1a,BVDV-1c亚型。本研究成功建立了一种良好的诊断BVDV的方法,监测地区优势流行毒株为BVDV-1a与1c亚型,为临床中BVDV早期诊断和流行病学调查监测提供了技术和数据支持。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 荧光rt-pcr 诊断 流行病学调查
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