脂肪干细胞免疫学性状的初步实验观察

目的初步研究脂肪干细胞(Adiposederivedstemcells,ADSC)表面免疫分子的表达以及体外免疫调节功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法体外培养人脂肪抽吸术中获取的脂肪干细胞,体外培养至第二代,流式细胞仪检测免疫分子HLA、HLA、B7-1、B7-2、CD40的表达。1×105个/孔ADSC细胞分别刺激单一异体淋巴细胞或混合双向淋巴细胞反应,观察淋巴细胞增殖情况。同时观察ADSC经IFN-γ作用后,免疫分子表达与淋巴细胞增殖的调节情况。结果ADSC表达HLA类分子,但未检测到HLA类分子阳性表达。B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD28、CD40未见明显阳性表达。人IFN-γ刺激48h后,HLA类分子表达明显增高,HLAI表达未见明显增高。异体或经IFN-γ作用的ADSC均未能刺激异体淋巴细胞增殖。同样数量的ADSC可明显抑制双相混合淋巴细胞增殖,经IFN-γ作用后抑制作用未见明显减弱。结论ADSC具有一定的体外调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程同种异体细胞来源。

小鼠神经干细胞免疫原性的研究

目的:探讨小鼠神经干细胞(NSCs)免疫原性,以利于解决神经干细胞移植中的免疫排斥问题。方法:(1)首先将30只C57BL/6近交系小鼠随机分成两组,以BALB/c近交系小鼠的NSCs及肝细胞(作为体细胞对照组)分别进行腹腔主动免疫,然后将NSCs及肝细胞分别与各自免疫后小鼠的T淋巴细胞进行单向混合淋巴细胞培养,通过液闪计数仪检测各自T淋巴细胞增殖程度,从而比较两者免疫原性的强弱。(2)利用异硫氰酸荧光素标记抗体(FITC)及Phycoery-thrin(PE)抗体分别标记BALB/c小鼠NSCs主要组织相容性抗原复合物Ⅰ、Ⅱ(MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ),然后通过流式细胞术(FCM)分别检测BALB/c小鼠NSCs及其肝细胞的MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ阳性细胞比例,从而推断小鼠NSCs的免疫原性。结果:(1)NSC组液闪计数仪检测所得cpm值为16592.8±2865.3,肝细胞组为27815.0±2416.3,NSC组明显低于肝细胞组,差别有统计学意义(P<0.01)。(2)小鼠NSCs实验组中,约(87.55±3.65)%的增殖期神经干细胞没有检测到MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子表达;而作为对照组的小鼠肝细胞组中,仅有约(27.45±1.86)%的肝细胞未表达MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子。且NSC组MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ阴性细胞比例明显高于肝细胞组,差别有统计学意义(P<0.01)。结论:小鼠神经干细胞具有较弱的免疫原性,且其免疫原性明显低于同一个体的肝细胞。

游离血红蛋白抑制淋巴细胞转化功能的研究

目的:研究游离血红蛋白(FHb)对淋巴细胞转化的抑制作用.方法:利用双向混合淋巴细胞反应(MLR)技术、细胞培养技术、及3H胸腺嘧啶(3HTdR)掺入法,将FHb按不同浓度比例加入MLR体系,及增加抗原提呈细胞(APC)浓度,以正常APC外周血单个核细胞(PBMC)的MLR为阴性对照,以环胞菌素A为阳性对照,计算上述因素对MLR的抑制率.结果:随着FHb浓度的增加,其抑制MLR的作用增强(P<0.01).两倍APC情况下可以明显减弱FHb对MLR的抑制作用(P<0.05).结论:FHb可通过干扰APC的提呈功能而抑制MLR,可以应用此方法来解释及证实大剂量输血致受者外周血的FHb增加从而对机体产生的免疫调节作用.

骨髓间充质干细胞对造血干细胞移植免疫的影响及其机理

骨髓间充质干细胞具有自我更新及多向分化的潜能,在骨髓中合成分泌多种细胞因子,并通过细胞间相互作用为造血干细胞的分裂、增殖与分化提供良好的微环境。有研究显示,骨髓间充质干细胞能够促进异基因造血干细胞植入,并在一定程度上减轻移植物抗宿主病的作用。这种对移植免疫的影响可能与其保护MHC相合造血干细胞逃脱抗原识别,抑制非特异性淋巴细胞活化增殖有关。本文对骨髓间充质干细胞特性、骨髓间充质干细胞影响移植免疫的表现、骨髓间充质干细胞影响移植免疫的机理进行了综述。

口服抗原对同种异体移植免疫反应的影响

将Wistar大鼠预先喂养同种异基因SD大鼠脾细胞7天,然后接受SD大鼠的皮肤移植。7天后,再接受SD大鼠的心脏移植,观察口服抗原后体外混合淋巴细胞培养（MLC）、体内迟发型超敏反应（DTH）以及心脏存活时间。口服抗原后,体外MLC及体内DTH反应均出现明显的抗原特异性降低;口服抗原组大鼠并接受供者皮肤致敏后的心脏移植存活时间达到7天,与时照组未致敏鼠的心脏移植存活时间一致;而未口服抗原组接受皮肤致敏后的心脏移植存活时间不超过2天。提示口服抗原可以使异基因抗原的特异性免疫应答降低,延长移植物存活时间,阻止皮肤移植物的事先致敏反应的发生,并使加速性排斥反应时间明显延迟。

氩氦刀治疗前列腺癌对特异性细胞免疫功能的影响

研究氩氦刀治疗前列腺癌后,血清前列腺特异性膜抗原(PSMA)水平变化及特异性激活细胞毒性T淋巴细胞的效应。12例确诊前列腺癌患者,氩氦刀治疗前后EIA法检测PSMA,混合淋巴细胞反应检测特异性细胞毒性T淋巴细胞的增殖。结果表明:氩氦刀治疗后,血清PSMA升高,并可显著刺激特异性T淋巴细胞增殖,与对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。说明氩氦刀治疗可有效激活机体PSMA特异性的T细胞。

口服供者脾细胞诱导成年大鼠皮肤移植物存活期延长

目的 :观测口服供者脾细胞后受者大鼠皮肤移植物的存活时间 ,并探讨口服耐受的形成机制 .方法 :以纯系SD大鼠为供者 ,纯系Wistar大鼠为受者 ,行异体皮肤移植 ,将 2 0只受者大鼠随机分成 2组 :A组为对照组 ,单纯作皮肤移植 ;B组为口服抗原组 ,本组于皮肤移植前 7d始每日接受供者脾细胞 5× 10 7个 ,导管灌胃 ,7d后观察体外混合淋巴细胞培养(MLC)、体内的迟发型超敏反应 (DTH) ,并行皮肤移植 ,观察移植皮肤的存活时间 .结果 :口服抗原后 ,体外混合淋巴细胞培养及体内的DTH反应均出现明显的抗原反应性降低 ,口服抗原组的移植皮肤存活时间达到 (15 8± 1 3 )d ,而对照组为(4 9± 0 1)d ,两组差异显著 (P <0 0 1,n =10 ) .结论 :口服抗原可以引起受者对异基因抗原的特异性免疫反应降低 。

亲缘关系对猪白细胞Ⅱ类抗原免疫应答强度影响的初步研究

采集二花脸猪、大约克夏猪和大二杂种猪的外周血，分离淋巴细胞，取其中一部分经丝裂霉素Ｃ处理后作为刺激细胞，另一部分为反应细胞，以３Ｈ标记的胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）作标记，进行单相混合淋巴细胞培养（ｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｃｕｌｔｕｒｅ，ＭＬＣ）。结果表明：对于猪白细胞Ⅱ类抗原（ｓｗｉｎｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎⅡ，ＳＬＡⅡ）经自身、有血缘关系和无血缘关系个体的淋巴细胞间相互刺激后，所得放射性脉冲频率（脉冲数／分钟，ＣＰＭ）及刺激指数（ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＳＩ）存在显著性差异。

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及其对混合淋巴细胞反应的影响(英文)

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析CD80和CD86 mRNA表达情况;MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,用75 Gy Co-60照射HL-60细胞,杀死HL-60细胞,保留抗原性作为刺激细胞,用健康人外周血单个核细胞作为反应细胞,用不同浓度HL-60细胞刺激健康人单个核细胞,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:MG132上调HL-60细胞表达CD86,MG132诱导HL-60细胞的凋亡率呈浓度依耐性和时间依耐性。结论:高浓度的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,低浓度MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,对健康人单个核细胞有增殖作用。MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,能促进健康人单个核细胞的增殖。

环孢素对小鼠树突细胞体外成熟及同种免疫刺激活性的影响

目的:观察环孢素(cyclosprine A,CSA)对小鼠树突状细胞(dendritic ce ll,DC)体外成熟和免疫学功能的影响,以期进一步探讨CSA免疫抑制作用机理。方法:在小鼠DC体外培养时加入两种剂量(0.5μg/m l和1.0μg/m l)的CSA处理,观察DC的生成情况,以流式细胞仪分析各处理组细胞的免疫表型,并作体外混合淋巴细胞反应观察其对同种T细胞的刺激增殖能力。结果:经CSA培养后,DC的生成和形态没有影响,表达低水平的共刺激分子CD 40,CD 80,DC的抗原呈递功能和刺激同种T细胞的功能显著下降。结论:CSA在早期阶段干扰免疫应答是通过影响DC的活化而实现,DC是CSA最初的作用位点。

反复自然流产单向混合淋巴细胞培养

为了探讨原因不明的习惯性流产（ＲＳＡ）的发病机制，作者采用检测器官移植供、受者间ＨＬＡ－Ｄ位点抗原组织相容性程度的方法──单向混合淋巴细胞培养￣［１］（单向ＭＬＣ），分别测定３５例ＲＳＡ夫妇间和２０例正常妊娠夫妇间的ＨＬＡ－Ｄ抗原相容性，并观察了ＲＳＡ和正常孕妇血浆对单向ＭＩＣ的不同影响。结果发现，ＲＳＡ夫妇单向ＭＬＣ与正常妊娠夫妇单向ＭＬＣ相对呈免疫低反应性；ＲＳＡ血浆对ＲＳＡ和正常妊娠夫妇单向ＭＬＣ有刺激作用；正常孕妇血浆对ＲＳＡ和正常妊娠夫妇单向ＭＬＣ有抑制作用。

脂肪干细胞HLA分子表达与体外抑制淋巴细胞增殖的实验研究

目的研究脂肪干细胞(adiposederivedstemcells,ADSCs)表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法从临床脂肪抽吸术丢弃脂肪组织中分离获取脂肪干细胞(共3例),体外培养至第2代,流式细胞仪检测免疫分子HLAI、HLAII的表达。1×105个/孔ADSC细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2μg/ml)刺激淋巴细胞后,分别以(1×102、1×103、1×104、1×105)细胞/孔数量的异体脂肪干细胞加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况;另一组在刺激同时加入白介素2(IL2,0.5ng/ml),检测脂肪干细胞抑制作用的逆转。分别以1×102～5细胞/孔数量的“第三者”脂肪干细胞或经IFNγ作用后脂肪干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果脂肪干细胞表达HLAI类分子,但未检测到HLAII类分子阳性表达。人IFNγ刺激48h后,HLAI表达未见明显增高,HLAII类分子表达明显增高。异体或经IFNγ作用的脂肪干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖。脂肪干细胞可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖,IL2可逆转脂肪干细胞的抑制作用。脂肪干细胞可明显抑制双相混合淋巴细胞反应,抑制作用呈脂肪干细胞细胞数量依赖性;经IFNγ作用后抑制作用未见明显减弱。结论ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及对混合淋巴细胞反应的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析 CD80和 CD86 mRNA 表达情况;75 Gy照射 MG132诱导的 HL-60细胞后,用 CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果 MG132上调 HL-60细胞表达 CD86,高浓度的 MG132对 HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。结论 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86,促进对健康人单个核细胞的增殖作用。

可诱导共刺激分子与人IgGFc融合蛋白诱导同种免疫低应答的体内外实验

目的探讨真核表达人可诱导共刺激分子（ICOS）与人IgGFc融合蛋白（ICOS-Ig融合蛋白）在体内外对同种免疫应答的影响。方法构建ICOS-Ig融合蛋白表达载体，在CHO细胞中表达并纯化ICOS-Ig融合蛋白。以Balb／c小鼠脾细胞为反应细胞，经CO^60照射灭活的C57BL／6小鼠脾细胞为刺激细胞，进行初次混合淋巴细胞反应（MLR），MLR体系中分别加入50μg／ml ICOS-Ig融合蛋白（ICOS-Ig组）或对照IgG（IgG组），采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR）掺入法检测反应细胞的增殖情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中白细胞介素（IL）2、4、10以及γ干扰素（IFN-γ）的含量。收集初次MLR细胞，与灭活的C57BL／6小鼠脾细胞或C3H小鼠脾细胞共培养，进行再次MLR，检测指标同初次MLR。以Co^60照射Balb／c小鼠，经尾静脉输注用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记的C578126小鼠脾细胞，每天腹腔注射ICOS-Ig融合蛋白0．2mg（ICOS-Ig组）、IgG（对照IgG组）或环孢素A（CsA组），3d后取Balb／c小鼠脾细胞，流式细胞仪测定CFSE荧光强度以判断同种T淋巴细胞的体内增殖情况。结果初次MLR显示，ICOS-Ig组同种T淋巴细胞活化增殖的抑制率为（58±8）％，其培养上清液中IFN-γ的水平明显高于IgG组（P〈0．05）。再次MLR显示，ICOS-Ig融合蛋白能特异性抑制C57BL／6小鼠脾细胞所致的细胞增殖，抑制率为（42±8）％，IL-4和IL-10的分泌受到抑制，而IFN-γ的分泌增加；ICOS-Ig融合蛋白并不抑制第三方细胞所致的细胞增殖。体内实验显示，ICOS-Ig组和CsA组的CFSE荧光强度明显强于空白对照组和对照IgG组（P〈0．05），而联合处理组CFSE荧光强度强于ICOS-Ig组和CsA组（P〈0．05）。结论ICOS-Ig融合蛋白在体内外均可抑制同种T淋巴细胞的活化增殖，且这种作用具有特异性。