siRNA靶向抑制铜绿假单胞菌oprM基因表达

目的探讨siRNA能否抑制铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)主动外排系统oprM基因的表达。方法针对oprM基因序列设计合成3对siRNA片段,分别转化耐药PA,采用抗菌素药物敏感试验筛选出能抑制PA耐药的siRNA片段及其最佳转化剂量,再构建siRNA质粒表达载体,转化PA标准菌株,应用western blot技术检测OprM蛋白表达量的变化。结果筛选出一对能抑制PA耐药的siRNA片段,确定其最佳转化剂量为25μL(20μm/L)/100μL PA菌液。成功构建了靶向oprM基因的siRNA质粒表达载体。Western Blot检测结果显示,转化siRNA质粒载体的PA其OprM蛋白的表达量明显降低。结论靶向oprM基因的siRNA能够抑制PA oprM基因的表达。

嗜水气单胞菌OprM蛋白的克隆表达与免疫保护作用评价

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种常见的条件致病菌,控制该菌在水产养殖业中的危害是当前亟待解决的问题。利用克隆表达等分子生物学手段,获得嗜水气单胞菌 ATCC 7966 OprM 纯化蛋白,肌肉注射斑马鱼后对其免疫相关基因的转录水平进行检测,探索其免疫应答效果。结果显示大多数免疫相关基因表达上调,表明 OprM 蛋白在斑马鱼体内能够产生较好的免疫应答。进一步利用嗜水气单胞菌强毒株 LP-2 对免疫后斑马鱼进行攻毒实验,发现注射 OprM 蛋白后相对免疫保护率达89.47%,以上结果表明嗜水气单胞菌外膜蛋白 OprM 对斑马鱼具有较高的免疫保护性,是一种潜在的嗜水气单胞菌候选疫苗。