肺炎球菌结合疫苗两种免疫效果评价方法的比较分析

目的研究肺炎球菌结合疫苗诱导的功能抗体滴度与总抗体浓度的相关性。方法采用调理吞噬实验(opsonophagocytic assay,OPA)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对13价肺炎球菌结合疫苗免疫后血清样本进行OPA滴度和抗体浓度检测,并就两种检测结果进行比较,分析二者相关性。结果血清型1,3,5,6A,6B,9V,14,18C,19A和23F两种检测结果的相关系数较高,为0.71~0.88。19F和4型的相关系数相对略低,分别为0.66和0.52。结论 OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价的相关性较高,二者结果具有良好的一致性。

人肺炎球菌参考血清09CS的制备及其中13个肺炎球菌结合疫苗血清型抗体的IgG含量和调理吞噬滴度

目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS。在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室(University of Alabama at Birmingham,UAB)和兰州生物制品研究所有限责任公司(Lanzhou Institute of Biological Products,LIBP)实验室,采用WHO推荐的Pn PS ELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。同时以调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay,OPA)测定针对13个血清型的调理吞噬滴度。结果制备了5 000支(0.5 ml/支)冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3%。确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P<0.05);以09CS为标准检测的89SF的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均<20%。确立了09CS中13价PCV血清型调理吞噬滴度。结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度。

评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验条件的优化

目的优化评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验(Opsonophagocytic assay,OPA)的条件。方法参考美国阿拉巴马大学的WHO指定实验室于2007年1月发布的A.02版实验规程,优化OPA的试验条件。分别以抗性和非抗性肺炎链球菌菌株作为靶细菌检测其对应型结合物受试血清的调理吞噬效价后,再与相应的ELISA效价比较,分析二者的相关性。结果 0.8%二甲基甲酰胺(DMF)诱导HL-60细胞分化4d后,细胞表面标志表达量分别为:CD11b和CD35≥55%、CD71≤15%,活细胞比例≥65%;各型肺炎链球菌工作种子批的复活率≥80%;补体的非特异性杀伤率为18%;各血清型均表现出良好的杀菌活性,且OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价比较,相关系数和斜率非常接近。结论优化的OPA条件符合该试验要求,可用于肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的效力评价。