杜仲梦尼夜蛾CD36家族同源基因克隆与组织分布研究

[目的]揭示杜仲梦尼夜蛾CD36家族同源基因神经元膜蛋白(SNMPs)和b族清道夫受体(SRb)的序列特征和组织分布情况。[方法]设计特异性引物克隆杜仲梦尼夜蛾SNMPs和SRb基因,对这些基因编码的蛋白进行同源建模;通过荧光定量PCR分析这些基因在不同组织的表达情况。[结果]在杜仲梦尼夜蛾中鉴定得到3个CD36家族同源基因(OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1);这些基因编码的蛋白具有2个跨膜区域和1个细胞外结构域。空间结构预测发现,这些蛋白的胞外结构域包含1个主要由反向平行β-折叠构成的桶状核心和1个富含疏水性氨基酸残基的α-螺旋;荧光定量PCR结果表明,OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1均在触角中大量表达;OsonSNMP1在雄虫触角中的表达水平显著高于雌虫触角,Oson-SNMP2在雌虫触角的表达水平显著高于其他组织,OsonSRb1在雄虫触角中大量表达外,还在雌雄虫的口器中大量表达。[结论]本研究发现OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1编码的蛋白具有与脊椎动物CD36家族受体类似的空间结构,与嗅觉器官高度关联的表达模式表明这些基因可能在杜仲梦尼夜蛾嗅觉系统中发挥了功能,以上结果为探究杜仲梦尼夜蛾CD36家族同源基因的嗅觉功能提供了数据。

杜仲梦尼夜蛾幼虫肠道可培养微生物的组成研究

杜仲梦尼夜蛾是一种专门取食杜仲叶片的单食性害虫,肠道微生物在其幼虫取食利用含胶的杜仲叶片中发挥重要功能。通过传统的分离培养和稀释培养方法进行幼虫肠道微生物的分离培养和鉴定,共分离得到6株细菌、6株放线菌及8株真菌。6株细菌隶属于4个属,分别为假单胞杆菌属、甲基杆菌属、芽孢杆菌属和金黄杆菌属,假单胞杆菌属为优势菌群;6株放线菌隶属于短状杆菌属、微杆菌属、红球菌属和假诺卡氏菌属4个属,假诺卡氏菌属为优势菌;8株真菌隶属于8个属,分别为轮枝菌属、外瓶霉属、枝孢属、木霉属、曲霉属、黄囊菌属、小鬼伞属及拟鬼伞属,轮枝菌属和小鬼伞属为优势菌属。相比传统分离培养方法,稀释培养法所分离到的菌株种类更多,是一种较为理想的微生物分离培养方法,分离获得的菌株在杜仲梦尼夜蛾幼虫中潜在的功能还有待于进一步研究。

杜仲梦妮夜蛾幼虫的空间分布型及抽样技术

杜仲梦妮夜蛾是近年来严重危害杜仲的主要食叶害虫,幼虫专性取食杜仲叶片。本研究运用6种聚集度指标(m*/m、c、k、Iδ、I、Ca)和两种回归模型(Taylor幂法则和m*-m回归模型)研究分析了种植园中杜仲梦妮夜蛾幼虫种群的空间分布型,利用Blackith种群聚集均数λ解析幼虫种群的聚集成因。结果表明杜仲梦妮夜蛾幼虫种群呈均匀分布,而且这种空间分布型是由环境因素引起的。建立了杜仲梦妮夜蛾幼虫抽样数公式N=[3.8416(0.022/m-0.152)]/D2和序贯抽样模型T(n)槡=0.1n±0.053 n。本研究为杜仲梦妮夜蛾虫情调查、害虫治理决策提供参考依据。

杜仲梦尼夜蛾发育历期及取食行为研究

杜仲梦尼夜蛾是单食性食叶害虫,专性为害杜仲。本研究旨在摸清该害虫的发育及为害规律,为制定防治决策提供依据。通过野外采集越冬蛹,室内羽化并交尾、产卵,对孵化的幼虫采用单头饲养的方法精确测量幼虫各龄期的取食量,同时,观察并记述该虫各虫态的形态特征及其发育历期。结果表明,杜仲梦尼夜蛾越冬代历时213.85d,蛹期172.40d;在寄主植物生长季,其完成一个世代平均需要59.8d,其中卵期4.45d,幼虫期19.7d,蛹期28.85d,成虫期6.8d。幼虫期蜕皮7次,经历8个龄期,幼虫期存活率达98.9%。越冬代除蛹期外其他虫态历期与上述一致。幼虫全期取食,每头幼虫总取食量平均为1.65g新鲜叶片,6、7、8三个龄期幼虫总的取食量占幼虫期取食总量的79.71%。幼虫为害期约为20d,其防治工作应在5龄之前完成。

杜仲梦尼夜蛾危害的风险分级

【目的】对杜仲主要食叶害虫——杜仲梦尼夜蛾危害风险进行分级,为构建杜仲梦尼夜蛾预警技术提供依据,也为其他农林业食叶害虫危害等级划分及预警技术构建提供参考。【方法】借鉴我国民政行业推荐性标准《自然灾害风险分级方法》,以灵宝市的杜仲梦尼夜蛾-杜仲系统为研究对象,通过不同虫口密度导致的叶面积损失率和落果率为主要依据,以预期百叶虫口密度作为种群发生的可能性指标（P）,以预期叶面积损失率范围、落果率范围以及预期发生面积率和管理成本增加率范围为依据,制定相应的风险等级分值（C）。运用归一化原理对量化估算的结果进行赋值,建立杜仲梦尼夜蛾危害的风险（R）分级矩阵。同时,通过对成虫数量进行监测并结合设立标准地进行卵期、幼虫期调查,对种群数量及发生面积的预期大小对其危害等级进行预测,以危害后期实际叶面积损失率和落果率为依据对分级效果的实用性和可操作性进行评估。【结果】不同虫口密度导致的叶面积损失率和落果率差异均达到极显著水平。百叶虫口密度16头以上时可造成叶面积损失率60%以上,平均每头虫取食造成的叶面积损失率为2.8%。百叶虫口密度24头以上时落果率达到17%以上,平均每头虫取食造成的落果率为0.8%。根据2015年5月调查的卵块密度、虫口密度和有虫株率等数据,按照发生面积占总面积的权重对各项数据进行加权平均,得到预期百叶虫口密度范围在11~35头之间,P=2。在该虫口密度下的危害风险等级包括：预期发生面积率75%,C=2;预期叶面积损失率范围16%~49%,C=2;预期落果率范围6%~10%,C=3;管理成本增加率为0,C=4。根据等级C取指标分值中的最小者,即C=2。对应风险分级矩阵计算风险等级分值R=P×C=2×2=4,属高风险,发布当年第2代杜仲梦尼夜蛾发生风险的橙色预警,且不排除个别区域的极高风险。7月实测的平均叶面积损失率和平均落果率分别为17.2%和9.4%,均在预期损失范围内,其中占总面积17%的区域受害极严重,表明这种风险分级是实用的和可操作的。【结论】杜仲梦尼夜蛾危害的风险分值R可划分为4个等级并赋以4种颜色,表示杜仲梦尼夜蛾发生风险的4个等级：极高风险（R为1~2）,红色;高风险（R为3~4）,橙色;中风险（R为6~9）,黄色;低风险（R为12~16）,绿色。本分级方法适宜于短期预警,即杜仲梦尼夜蛾种群某一个世代的危害预期。下一步研究重点是将各项指标进一步细化,使之能够应用于中长期的预测。

3种生物源杀虫剂对杜仲梦尼夜蛾的毒力及防效

针对专性为害杜仲的食叶害虫杜仲梦尼夜蛾(Orthosia songi Chen et Zhang)幼虫进行室内毒力测定,比较了3种生物源杀虫剂对其3龄和5龄幼虫的杀虫活性,并进行了林间药效测定和防治示范试验。结果显示:甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)对3龄和5龄幼虫的LC50值分别为0.152 5和0.204 7μg/L,苦参碱的LC50值分别为65.306 0和124.735 8μg/L,印楝素的LC50值分别为165.871 7和257.749 0μg/L。林间药效测定结果显示5.7%甲维盐微乳剂300万倍液防治效果最好,7d后校正死亡率达91.34%。防治示范试验表明,5.7%甲维盐微乳剂75 000倍液防治效果达95.69%,显著高于0.3%苦参碱水剂750倍液的防治效果(80.28%),且药剂成本7.5元/hm2,仅为后者的1.9%。

立地条件和人为干扰对杜仲梦尼夜蛾种群数量的影响

在河南省灵宝市两处种植模式和管理措施截然不同的杜仲种植基地,以杜仲梦尼夜蛾为研究对象,采用回归分析和T检验方法,研究立地条件、林分特征和人为干扰因素对杜仲梦尼夜蛾种群数量的影响。结果表明:在不同栽培和管理措施条件下,影响杜仲梦尼夜蛾种群密度的主要因素是坡向和海拔高度,虫口密度均随着坡向值的增加和海拔的增高而降低。人为干扰较少的庄科基地的林分郁闭度成为继坡向及海拔后影响虫口密度最重要的因素,这一点是两种管理模式下的最大的区别。闫驮基地7月份的叶面积损失率与5月的差异不显著(F=1.005,P=0.317),但极显著低于同期庄科基地的叶面积损失率(F=33.268,P<0.001),表明闫驮基地采取的以抚育管理为主的生态调控措施在控制杜仲梦尼夜蛾种群密度方面取得了良好的效果。本研究结论可用于指导划分关键防控区域和以抚育管理为主的杜仲梦尼夜蛾生态调控技术的实施。

莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)固液双相发酵配方研究

莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)通过基础培养基基质、碳、氮、维生素筛选,玉米(50 g)、葡萄糖(1.5 g)、水解酪蛋白(1.5 g)、抗坏血酸(0.5 mg)、水50 m L为最佳固体培养基质(培养10 d),产孢量达4.78×1010cfu·m L-1。以SMY为液体培养基质,莱氏野村菌最适发酵条件:1.0×108cfu·m L-1接种浓度,25℃、p H=6、全天光照、180 r·min-1振荡培养7 d,菌丝干重为690.2 mg。固体发酵为复合粉炮生产提供基础配方,液体发酵缩短时间后可作为固体培养生产莱氏野村菌菌粉的二级种子,发酵产品为杜仲梦尼夜蛾粉炮防治重要生物制剂。

四川省杜仲有害生物调查及主要种类危害特点

2016—2017年调查了四川省杜仲Eucommia ulmoides Oliver有害生物种类及发生情况,发现有害生物14种,其中病害3种、有害植物两种、有害昆虫9种。重度发生的有害生物有杜仲梦尼夜蛾Orthosia songi Chen et Zhang、中度发生的有害生物为杜仲角斑病Mycospaerella sp.,其它有害生物发生程度均为轻度。本研究对杜仲梦尼夜蛾、杜仲角斑病的危害做了简要描述,首次发现有害植物葛藤和苔藓危害。

温度对杜仲梦尼夜蛾生长发育及取食量和排粪量的影响

为了明确温度对杜仲梦尼夜蛾生长发育的影响,采用室内人工恒温饲养方法,设置18、22、26、28℃和30℃5个温度处理,研究温度对杜仲梦尼夜蛾各虫态发育历期、头宽、体长、体重及取食量和排粪量的影响。结果表明,在18-30℃范围内,杜仲梦尼夜蛾各虫态的发育历期随温度的升高而缩短,其世代发育历期在30℃时最短,为17d;该虫完成1个世代的发育起点温度和有效积温分别为10.72℃和670.37日·度;随温度的变化,同龄幼虫的头宽、体长及体重的差异性不大,但随龄期的变化,这些参数的差异均达到显著水平;温度和龄期对幼虫的取排量均存在显著影响,随龄期的增加,幼虫的取排量显著增多,末龄幼虫取排量达到最大,占整个取排量的70%左右。

杜仲梦尼夜蛾短期预警技术

森林食叶害虫的世代重叠会给防治造成巨大的困难。本文以杜仲梦尼夜蛾为研究对象,在灵宝市杜仲果园设立标准样地和样株,通过调查虫口密度,评估其危害,定期发布预警。经过2016-2017连续2年的研究发现,杜仲梦尼夜蛾世代重叠严重。2016年种群爆发,8月上旬叶面积损失率平均达21%,个别区域达100%;叶面积损失率与之前相隔20 d的虫口密度呈极显著的正相关关系。杜仲在5月初至6月初受害会严重影响果实正常发育,并造成种仁败育、果实提早脱落,最高落果率达50%。因此,5月初至6月中旬是杜仲梦尼夜蛾防治的最关键时期。2016年根据林间调查的虫口密度发布的短期预警,经叶面积损失率和落果率评判,准确率均在90%以上,说明短期预警具有良好可操作性。2017年将预警发布指标调整为株虫口密度≥3头/株,预警发布5 d内完成防治,并优先对发布灾害预警的区域开展防治。后期调查发现,在示范区和对照区,叶面积损失率均维持在1%以下。对世代重叠严重的食叶害虫,短期预警对及时采取应对措施可以起到关键作用。

杜仲梦尼夜蛾幼虫肠道可培养细菌的组成及其功能

【目的】研究杜仲梦尼夜蛾幼虫肠道可培养细菌的种类组成及其功能,揭示其对宿主昆虫生长发育、食物消化和营养利用方面的影响。【方法】采用传统的微生物分离培养方法和16S rRNA序列分析进行幼虫肠道细菌的分离和鉴定,采用二硝基水杨酸法(DNS法)结合高效液相色谱法(HPLC)研究肠道菌对生物大分子(纤维素、果胶和淀粉)及杜仲叶成分的降解作用,最后通过抗生素处理,研究肠道菌对幼虫生长发育和营养指标的影响。【结果】利用传统微生物分离培养方法从幼虫肠道分离鉴定出10株不同的细菌,DNA序列显示它们分别为变形菌门、厚壁菌门和放线菌门的10个属的细菌,包括短波单胞菌属、肠球菌属、假单胞菌属、鞘氨醇单胞菌属、克吕沃尔菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、土壤杆菌属、微杆菌属和节杆菌属。这些菌株对生物大分子(纤维素、果胶和淀粉)均有不同程度的降解作用,并影响杜仲叶中物质的变化。饲喂抗生素(1μg•mL^-1氯霉素)消除肠道菌后可影响幼虫的生长发育,显著降低幼虫的化蛹率和低龄幼虫的取食和消化能力。【结论】从杜仲梦尼夜蛾幼虫肠道分离获得10株不同的细菌,它们在杜仲梦尼夜蛾幼虫的生长发育、食物消化、营养物质利用等方面发挥着重要作用。初步确定了杜仲梦尼夜蛾幼虫能够取食和利用含胶的杜仲叶片,为自身生长发育提供营养物质,与其肠道微生物有着密不可分的关系。

杜仲梦尼夜蛾生物学特性及防治研究

杜仲梦尼夜蛾（ＯｒｔｈｏｓｉａｓｏｎｇｉＣｈｅｎｅｔＺｈａｎｇｓｐ．ｎｏｖ）是为害杜仲重要食叶害虫之一。经过对杜仲梦尼夜蛾生物学特性进行观察，该夜蛾食性单一，在慈利县一年发生三代。天敌致死率为３３．５７％～４５．１８％。用Ｂ．ｔ乳剂和灭幼脲进行防治试验。

杜仲梦尼夜蛾幼虫营养成分分析及评价

害虫资源化利用是生物质能源开发利用的重要途径,本文以取食杜仲叶片的重要害虫杜仲梦尼夜蛾(Orthosia songi)幼虫为研究对象,进行了水分和主要营养成分的测定及利用评价。结果表明:杜仲梦尼夜蛾幼虫中水分、粗脂肪、粗蛋白质的含量分别为58.2%、17.9%和10.9%;含有7种人体必需氨基酸,占总氨基酸含量的40%,必需氨基酸指数为0.963;不饱和脂肪酸和必需脂肪酸分别占总脂肪含量的75.1%和25.8%,特别是油酸和亚麻酸含量较高,分别达43%和28.1%;此外,还含有丰富的K、Ca、Zn、Fe等矿物质元素。因此,杜仲梦尼夜蛾幼虫是一种高蛋白、低脂肪、氨基酸含量丰富且种类较全面、富含矿物质元素的优质昆虫资源,具有进一步开发利用的潜力。

保幼激素类似物ZR-515对杜仲梦尼夜蛾幼虫生长发育的影响

【目的】为了解保幼激素对杜仲梦尼夜蛾Orthosia songi Chen et Zhang幼虫生长发育的影响。【方法】本研究采用不同浓度的保幼激素类似物ZR-515处理其4龄、5龄和6龄幼虫,测定了幼虫的发育历期、取食量、排粪量以及后期的化蛹率和羽化率。【结果】(1)保幼激素类似物ZR-515处理可延长杜仲梦尼夜蛾幼虫的发育历期,增加体重,提高取食量和排粪量;但是对后期的化蛹率和成虫羽化率影响较大,导致幼虫和蛹的死亡率较高,且处理浓度越大,影响越显著。(2)处理4龄或5龄幼虫,对其后的各龄期的生长发育产生很大的影响。(3)综合考虑激素处理对幼虫生长产生的有利影响及后期的不利影响,认为1 000 ng/μL为最适处理浓度,5龄为最佳处理龄期。【结论】研究结果可为后续杜仲梦尼夜蛾的规模化人工饲养和开发利用提供理论依据。