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2种水稻OsRhoGDIs基因在幼穗组织中的原位杂交分析 被引量:2
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作者 刘洪梅 梁卫红 毕佳佳 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第12期22-25,共4页
水稻OsRhoGDI1和OsRhoGDI2基因是通过酵母双杂交技术从幼穗中分离的新基因,其编码产物是与水稻Rho蛋白OsRacD相互作用的一类活性调控蛋白。为研究这2种OsRhoGDIs基因在幼穗组织中的表达特点,通过PCR扩增的方法制备了探针模板,并采用随... 水稻OsRhoGDI1和OsRhoGDI2基因是通过酵母双杂交技术从幼穗中分离的新基因,其编码产物是与水稻Rho蛋白OsRacD相互作用的一类活性调控蛋白。为研究这2种OsRhoGDIs基因在幼穗组织中的表达特点,通过PCR扩增的方法制备了探针模板,并采用随机引物标记的方法,以地高辛对探针进行了标记,进而利用这2种探针与水稻幼穗组织石蜡切片进行RNA原位杂交,结果表明,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2在幼穗组织中都有表达,但OsRhoGDI2基因的转录水平明显高于OsRhoGDI1基因,提示OsRhoGDI2可能是调控OsRacD活性的主要类型。 展开更多
关键词 水稻 osrhogdis基因 表达 RNA原位杂交
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两种水稻OsRhoGDIs基因启动子的克隆及分析 被引量:7
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作者 张利娟 梁卫红 +3 位作者 刘悦霞 刘肖飞 侯成千 毕佳佳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2916-2922,共7页
【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因... 【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的基础上,为深入分析OsRhoGDIs的调控机制以及与OsRacD的关系,对其上游调控序列进行克隆和分析。【方法】采用PCR方法克隆了OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的上游调控序列,并利用网络工具对启动子顺式作用元件进行预测。【结果】两种OsRhoGDIs基因具有与激素应答、光调控及胁迫诱导应答相关元件,且一些元件相同或相似;OsRhoGDIs与OsRacD启动子元件的比较显示,都具有与花粉管萌发相关的多个元件。【结论】OsRhoGDIs的表达调控方式复杂,可能受多条信号通路的共同调控;同时也提示OsRhoGDIs与OsRacD基因可能通过协同表达控制光敏核不育水稻的育性。 展开更多
关键词 水稻 OsRhoGDI RHO OsRacD 顺式作用元件
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Cloning and Analysis of the Promoters of Two OsRhoGDIs Genes from Rice
3
作者 ZHANG Li-juan LIANG Wei-hong LIU Yue-xia LIU Xiao-fei HOU Cheng-qian BI Jia-jia 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2008年第7期789-795,共7页
OsRacD, belonging to rice (Oryza sativa L. ssp. japonica) Rho family of the small GTPases, is a pivotal gene involved in rice photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genic male sterile rice which i... OsRacD, belonging to rice (Oryza sativa L. ssp. japonica) Rho family of the small GTPases, is a pivotal gene involved in rice photoperiod fertility conversion of photoperiod sensitive genic male sterile rice which influences the rice fertility via controlling the pollen tube growth. Using OsRacD as bait, two GDP dissociation inhibitor genes designated as OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were screened by yeast two-hybrid system. To further study the regulation mechanism of OsRhoGDIs, and also the relationships between OsRhoGDIs and OsRacD, the upstream regulation sequences of OsRhoGDI1 and OsRhoGDI2 were cloned by PCR, and the cis-elements in the promoters were predicted using internet tools in this study. The results showed that there were several kinds of response elements, such as phytohormone response elements, lightregulated elements and adversity induced elements in the promoters of OsRhoGDIs, some of which were similar. Comparing with the promoter of OsRacD, several pollen tube germination related elements were found. On one hand, the expression and regulation mechanism of OsRhoGDIs were complex, they may be regulated by several signaling pathways commonly, and the regulation mechanisms were similar to some extent. On the other hand, it was suggested that the fertility of photoperiod sensitive genic male sterile rice may be controlled by the cooperative expression of OsRhoGDIs and OsRacD. 展开更多
关键词 RICE osrhogdis RHO OsRacD cis-acting elements
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水稻OsRhoGDI2蛋白生物信息学分析及亚细胞定位研究 被引量:3
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作者 彭威风 梁卫红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期82-86,92,共6页
水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白... 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白的理化性质、修饰位点和亚细胞定位特点,并进一步构建了受控于CaMV35S启动子的与绿色荧光蛋白融合表达的OsRhoGDI2基因的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布特点。OsRhoGDI2和OsRacD具有一些相似的理化特性和翻译后修饰位点,在洋葱表皮细胞中,OsRhoGDI2主要分布在细胞质、细胞膜和细胞核。OsRhoGDI2与OsRacD在蛋白理化特性和胞内分布上存在一定的相关性,OsRhoGDI2蛋白可能在调控OsRacD的胞内分布和活性中发挥重要作用。 展开更多
关键词 OsRhoGDI2 蛋白互作 植物表达载体 亚细胞定位
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水稻OsRhoGDI2基因RNA干扰载体的构建
5
作者 彭威风 梁卫红 李莉 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-153,共4页
水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以... 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以正向和反向插入中间载体pKANNIBAL中,并亚克隆到受控于CaMV 35S启动子的植物表达载体pART27上,获得了OsRhoGDI2基因的RNA干扰载体,为利用水稻转基因技术鉴定该基因在水稻发育中的功能,以及与OsRacD基因的功能联系奠定基础. 展开更多
关键词 水稻 OsRhoGDI2基因 RNA干扰载体
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OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析 被引量:1
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作者 杜京尧 尚飞 +1 位作者 王高华 梁卫红 《江苏农业科学》 2019年第14期50-54,共5页
水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采... 水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69~13.35倍.为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础. 展开更多
关键词 OsRhoGDI2 转基因水稻 表达分析 拷贝数 外源基因
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水稻OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体的构建
7
作者 石宏浩 靳萍 +1 位作者 王利娜 梁卫红 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期113-115,共3页
水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRac... 水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体,为采用免疫共沉淀验证二者在体内的相互作用,解析OsRacD与OsRhoGDI2基因参与水稻育性控制的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 水稻 OsRacD基因 OsRhoGDI2基因 共表达载体
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CRISPR/Cas9技术编辑OsRhoGDI2基因导致水稻半矮化 被引量:3
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作者 王凯婕 安文静 +6 位作者 刘亚菲 刘迪 冯连杰 王俊杰 黄俊骏 刘肖飞 梁卫红 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期707-715,共9页
OsRhoGDI2是通过酵母双杂交从水稻幼穗中分离的一个与Rho蛋白家族成员OsRacD相互作用蛋白的编码基因,但功能尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制水稻OsRhoGDI2基因敲除突变体。检测结果表明,转基因水稻T0代获得2种纯合突变体,T1代... OsRhoGDI2是通过酵母双杂交从水稻幼穗中分离的一个与Rho蛋白家族成员OsRacD相互作用蛋白的编码基因,但功能尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制水稻OsRhoGDI2基因敲除突变体。检测结果表明,转基因水稻T0代获得2种纯合突变体,T1代获得8种纯合突变体。序列分析显示,在敲除水稻中,该基因的编辑靶点附近发生了碱基的替换或缺失,预期生成丧失RhoGDI保守结构域的截短蛋白。表型比对分析发现,敲除水稻与对照相比,株高显著降低,统计学分析结果显示,敲除水稻株高降低源于第Ⅱ和第Ⅲ茎节的缩短,提示OsRhoGDI2基因可能与水稻株高控制相关。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9技术 水稻 OsRhoGDI2 株高
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