OsmC基因在豌豆根瘤菌抗氧化和共生中的功能

为研究OsmC基因在豌豆根瘤菌抗氧化和共生固氮中的功能,以豌豆根瘤菌RL3841的OsmC基因为研究对象,通过同源重组获得了OsmC基因突变株RLOsmC.结果表明:OsmC基因突变不影响豌豆根瘤菌的自生生长能力,但对无机氧化物H_2O_2和低浓度有机氧化物氢过氧化枯烯(CuOOH)都十分敏感.突变株RLOsmC感染豌豆宿主能形成红色有效根瘤,但是其固氮酶活降低了18.3%.OsmC基因的表达不受H_2O_2的诱导,但在7 d根瘤类菌体中表达量显著上调.表明根瘤菌OsmC基因在共生和抗氧化功能中发挥了重要的作用.

耐辐射异常球菌渗透诱导蛋白基因osmC的克隆表达纯化及生物信息学分析

耐辐射异常球菌(D.radiodurans R1)osmC基因(DR_1538)编码的渗透诱导胁迫蛋白是一种在氧化胁迫中起重要作用的过氧化物酶.用PCR方法从耐辐射异常球菌中扩增出osmC基因的全长序列(441bp),采用原核表达系统对其进行表达纯化,获得了分子量大小约为18.7 kDa的带有His标签的融合蛋白.利用在线网站对OsmC蛋白的生物信息学分析,结果表明:OsmC蛋白由146个氨基酸组成,理论等电点为5.81,为亲水性蛋白;二级结构主要是由α-螺旋及不规则卷曲组成.OsmC蛋白的纯化及生物信息学分析为后续深入研究其功能奠定了基础.

耐辐射异常球菌osmC与ohr基因突变株的构建及功能研究

渗透胁迫诱导蛋白OsmC与有机氢过氧化物抗性蛋白Ohr都属于OsmC超家族抗氧化物酶,在细菌抵御有机或无机过氧化反应的过程中起重要作用。耐辐射异常球菌(D. radiodurans R1)中osmC基因(DR_1538)与ohr基因(DR_1857)分别编码了OsmC超家族中的这两种抗氧化物酶。运用体外三段融合PCR方法和线性转化方法,首次构建了壮观霉素抗性完全缺失突变株ΔosmC和卡那霉素抗性完全缺失突变株Δohr。对ΔosmC、Δohr突变株和野生型菌株分别都进行CHP(异丙苯基过氧化氢)、H2O2 和NaCl胁迫处理,结果显示,与野生型相比,ΔosmC突变株对H2O2异常敏感,而Δohr突变株对CHP更敏感,两个突变株对NaCl胁迫都没有大的变化。QRT-PCR结果显示在H2O2和NaCl胁迫下野生型菌株中osmC基因都上调,其中H2O2胁迫下基因上调水平显著;在CHP和NaCl胁迫下野生型菌株中ohr基因基因上调大约2倍左右。根据结果推测同属于OsmC超家族的两个过氧化物酶选择底物的偏好性与作用方式可能并不一样,OsmC蛋白可能主要是以无机过氧化物作为底物,而Ohr蛋白可能主要是以有机过氧化物为底物。

肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达及活性分析

目的表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)渗透压诱导蛋白C(OsmC)并测定其活性。方法在Mp中找出编码OsmC蛋白的基因,根据Mp OsmC基因序列设计特定引物,PCR扩增OsmC基因。利用EcoRI和XhoI对其进行双酶切,然后连接到表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-MpOsmC,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析对重组OsmC蛋白进行纯化,利用氧化铁二甲酚橙试剂(FOX)测定OsmC蛋白的活性。结果肺炎支原体Mpn625基因编码OsmC蛋白。PCR扩增OsmC基因片段大小为426bp,连接到原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-MpOsmC。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为19.4ku的重组Mp OsmC蛋白,与理论值相符。通过亲和层析,得到高纯度的目的蛋白。FOX试剂法测定Mp OsmC具有分解H_2O_2活性。结论重组Mp OsmC蛋白具有氧化酶活性,为探讨肺炎支原体的抗氧化机制提供了理论依据。

香港海鸥菌OsmC蛋白的原核表达、纯化及活性研究

[目的]原核表达纯化香港海鸥菌OsmC蛋白,并检测其抗氧化功能。[方法]通过PCR法扩增香港海鸥菌OsmC基因,将目的片段进行双酶切后连接到pET28a,构建重组质粒pET28a-OsmC并转化大肠杆菌,诱导OsmC蛋白表达,亲和层析纯化目的蛋白并利用氧化铁二甲酚橙实验检测其过氧化物酶活性。[结果]克隆得到全长基因,大小为441bp,编码147个氨基酸。得到重组表达质粒pET28a-OsmC,表达并纯化获得重组OsmC蛋白,OsmC蛋白能够降解H2O2。[结论]Osm C蛋白具有过氧化物酶活性,为研究香港海鸥菌的抗氧化机制奠定了基础。

桥式起重机分布式质量吊重系统双摆滑模控制

随着吊装作业的多元化发展,起重机吊装对象也从传统的质点式吊重向分布式质量吊重方向发展。针对桥式起重机在吊装分布式质量吊重时吊重的大摆角抑制和小车定位控制问题,提出了两种基于滑模控制理论的、用于吊重消摆和小车快速定位的方法。首先,综合考虑了桥式起重机吊装对象的结构特征、小车电机的驱动特性、摩擦阻力以及环境中的随机扰动对吊装作业的影响,建立了桥式起重机分布式质量吊重系统的非线性双摆动力学模型;然后,设计了桥式起重机分布式质量吊重系统的非线性双摆动力学普通滑模控制器(OSMC)和分层滑模控制器(HSMC),采用Lyapunov函数和Barbalat引理证明了闭环系统的稳定性;最后,利用数值仿真研究了OSMC和HSMC在分布式质量吊重减摆控制方面的性能差异。仿真及研究结果表明:与OSMC相比,采用HSMC不仅可以在12 s内实现小车精确定位目的,而且可以实现对分布式质量吊重在5°~9°摆动范围下的快速抑制目的,完成了对系统状态变量的有效控制;同时,对比结果表明HSMC对起重机系统内部和外部扰动变化有很强的鲁棒性和抗干扰性。

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因，其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物，以ｃＤＮＡ作模板，通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ，编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高，在根中有少量表达，而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．

肺炎支原体渗透压诱导蛋白C的原核表达、纯化及活性分析

肺炎支原体是最小的原核细胞型微生物,缺乏细胞壁,渗透压的变化对其产生重要的影响。肺炎支原体渗透压诱导蛋白C(OsmC)是针对渗透压的变化而产生的一种蛋白质。本文通过分析肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达、纯化及活性,发现肺炎支原体OsmC蛋白通过降解过氧化氢从而产生抗氧化的作用,进而影响人体的免疫平衡,造成机体的损伤。本文为阐明肺炎支原体抗氧化作用奠定机制基础,为其治疗奠定理论基础。