核因子-κB受体活化因子配体表达抑制对其促进羟基磷灰石生物骨结合的影响

目的观察核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达抑制对其成骨特性的影响。方法将大鼠BMSCs分为3组:实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组和阴性对照组分别转染相应的小干扰RNA(small in-terfering RNA,siRNA),空白对照组不做转染。转染后检测3组细胞RANKL mRNA表达情况,判断特异性siRNA是否抑制了大鼠BMSCs内RANKL的基因表达。转染1周后,对3组BMSCs进行成骨相关基因的实时定量PCR检测。将转染后和未转染的BMSCs与羟基磷灰石(hydroxyapotite,HA)材料复合后植入体内,进行扫描电镜、组织学切片观察,测试骨组织的压缩强度及拉伸强度,通过以上方法,对比HA与生物骨的结合情况。结果 siRNA转染后,特异siRNA成功下调BMSCs中RANKL的表达(P<0.05),BMSCs成骨相关基因检测结果显示,RANKL的下调会导致骨形成蛋白及核心结合蛋白因子-2(runt-related transcription factor-2,RunX-2)的下调和过氧化酶活化增生受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma,PPAR-γ)及CCAAT增强子结合蛋白-α的上调(P<0.05);扫描电镜、组织学和生物力学检测表明RANKL下调明显降低BMSCs植入体骨再生及生物骨结合能力。结论 RANKL下调会降低BMSCs成骨分化作用,进而影响其骨修复促进作用。