氟对成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和成骨结节形成的影响

目的 研究氟化物对成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和成骨结节形成的影响。方法 将成纤维细胞分为对照组和6个加氟组，氟质量浓度分别为0．0001、0．0010、0．1000、1．0000、10．0000、20．0000mg／L。应用RT—PCR法和ELISA法检测各组成纤维细胞Ⅰ型胶原tuRNA和蛋白的表达。同时应用茜素红染色法观察矿化诱导液对成纤维细胞成骨结节形成的作用。结果 染氟2h的0．0001、0．0010、0．1000mg／L组，染氟4h的0．1000mg／L组．染氟24h的1．0000、10．0000、20．0000mg／L组及染氟72h的10．0000、20．0000mg／L组成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平明显升高：染氟48h成纤维细胞Ⅰ型胶原tuRNA的表达增强趋势明显。染氟10d，受矿化诱导液诱导的成纤维细胞出现集中现象。并形成较多数量、大小不等的成骨结节，有明显的钙盐沉积。结论 氟化物可明显促进成纤维细胞成骨表型表达和成骨活动增强。

周期性牵张力对人牙周膜细胞中成骨样细胞表型碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达的影响

目的 :了解机械力介导的牙周膜细胞中成骨样细胞特性的改变 ,以利于深入研究正畸牙齿移动的机制。方法 :应用地高辛标记寡核苷酸探针进行细胞原位杂交 ,检测在间歇性机械牵张力作用下人牙周膜细胞中的成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶和骨钙素在mRNA转录水平的表达改变。结果 :间歇性牵张力作用增强人牙周膜细胞碱性磷酸酶和骨钙素基因的表达。结论

阿魏酸对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性及骨保护素与骨活素mRNA表达的影响

目的:观察阿魏酸对体外培养大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)及骨活素(OA)表达的影响,探讨阿魏酸在骨折后骨愈合中的作用。方法:以培养基为空白对照,MTT法检测阿魏酸200、20、2μg/L培养后0、1、2、3、4、5、6 d成骨细胞增殖的变化,给药后6 d,ELISA法检测细胞上清液ALP活性,RT-PCR检测OPG mRNA和OA mRNA表达的变化。结果:阿魏酸可剂量依赖性促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖,显著性增加ALP的活性、OPG mRNA和OA mRNA的表达(P<0.05)。结论:阿魏酸具有骨形成促进效应,其机制可能与其促进成骨细胞增殖与分化、改善骨代谢有关,适用于临床骨折的辅助治疗。

淫羊藿苷对MC3T3-E1成骨前体细胞的成骨诱导作用及意义

目的观察淫羊藿苷对MC3T3-E1成骨前体细胞的细胞毒性及成骨诱导作用,为其用于骨组织再生提供依据。方法将MC3T3-E1成骨前体细胞随机分为观察组、阴性对照组及阳性对照组。观察组分别加入终浓度为1×10^(-6)、10^(-5)、1×10^(-4)、1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L的淫羊藿苷溶液100μL,阴性对照组及阳性对照组分别加入等体积含DMSO的培养基及骨形态发生蛋白2(rh BMP-2)。采用MTT法检测各组培养第3、7天的细胞增殖率,死/活细胞荧光染色法检测细胞存活率,茜素红钙结节染色观察细胞钙化结节形成情况,细胞超声裂解法检测碱性磷酸酶(ALP)活性、钙含量及骨钙素表达。结果培养第3天,加入1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞增殖率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。培养第7天,加入1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞增殖率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。加入1×10^(-3)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞存活率明显低于阳性对照组,加入1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷溶液的观察组细胞存活率明显低于阴性对照组及阳性对照组(P均<0.05)。阴性对照组未见明显红染钙化结节,阳性对照组有明显的钙化结节,观察组随着加入淫羊藿苷浓度的升高红染钙化结节面积逐渐增大。加入不同浓度淫羊藿苷溶液的观察组细胞ALP活性、骨钙素表达均高于阴性对照组(P均<0.05)。加入1×10^(-4)、1×10^(-3)、1×10^(-2)mmol/L淫羊藿苷的观察组细胞钙含量均高于阴性对照组,加入1×10^(-6)、1×10^(-5)mmol/L淫羊藿苷的观察组细胞钙含量均低于阳性对照组(P均<0.05)。结论 1×10^(-4)mmol/L淫羊藿苷溶液对MC3T3-E1成骨前体细胞的细胞毒性较低,其成骨诱导作用与rh BMP-2接近,可作为一种骨诱导生长因子替代剂联合骨修复材料用于促进骨组织再生。

IL-1β和TNF-α对成骨样MG63细胞OPG和RANKL表达的影响

目的体外环境下,探究白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对成骨样MG63细胞的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)表达的影响。方法单独或联合使用IL-1β和(或)TNF-α刺激成骨样MG63细胞24 h,分别设为IL-1β干预组、TNF-α干预组、联合干预组(TNF-α及IL-1β联合干预),另设无任何刺激的空白组。Western blot和RT-PCR法检测RANKL和OPG蛋白及mRNA的表达。另用RANKL序列特异性小干扰RNA(siRNA)及非靶序列siRNA,经过Liopfcctamine 2000转染MG63细胞,非靶序列siRNA转染的细胞为阴性对照组,然后使用IL-1β和TNF-α联合刺激24 h,通过Western blot法检测RANKL和OPG蛋白的表达。结果与空白组相比,IL-1β干预组和联合干预组的RANKL和OPG表达量明显提升(P<0.05)。IL-1β及TNF-α联合干预24 h后,RANKL-siRNA转染后的MG63细胞RANKL和OPG蛋白和mRNA表达较非靶序列siRNA转染的阴性对照组显著下调(P<0.05)。结论 IL-1β和TNF-α通过改变RANKL/OPG影响骨代谢,RANKL沉默可以显著降低RANKL蛋白表达,进而影响RANKL/OPG。