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花生赤霉素3-β-双加氧酶(AhGA3ox)基因家族的全基因组鉴定及表达分析 被引量:1
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作者 李海芬 鲁清 +6 位作者 刘浩 温世杰 王润风 黄璐 陈小平 洪彦彬 梁炫强 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期932-943,共12页
赤霉素3-β-双加氧酶(gibberellin 3-beta-dioxygenase,GA3ox)是参与赤霉素生物合成的关键酶之一,可通过影响赤霉素的形成调控植物的生长发育,目前在花生中尚无系统研究。本研究利用生物信息学方法在花生栽培种基因组数据库中筛选花生GA... 赤霉素3-β-双加氧酶(gibberellin 3-beta-dioxygenase,GA3ox)是参与赤霉素生物合成的关键酶之一,可通过影响赤霉素的形成调控植物的生长发育,目前在花生中尚无系统研究。本研究利用生物信息学方法在花生栽培种基因组数据库中筛选花生GA3ox家族基因,对鉴定出的7个AhGA3ox在栽培种花生基因组中的分布、结构及进化特征、理化性质、启动子顺式作用元件进行分析,并利用qRT-PCR技术对其进行花生组织结构表达模式分析,同时对AhGA3ox家族基因在不同荚果大小的2个花生品系中的表达量进行分析。结果表明,7个AhGA3ox基因分布在7条染色体上,均由1个内含子和2个外显子组成。花生AhGA3ox蛋白中均包含1个DIOX_N结构域和1个2OG-FeII_Oxy结构域,系统进化分析表明与大豆的亲缘关系较近,在根、茎、叶、花、果针5个组织中呈现出不同表达模式,不仅在花生果壳不同发育时期的表达量不同,在2个荚果大小不同的花生品系果壳相同发育时期的表达量也不相同,但多数发育时期在大果品系中的表达量均显著高于小果品系,推测该家族基因的表达可能对荚果的形成具有促进作用。 展开更多
关键词 花生 GA3ox 表达分析 生物信息学 功能分析
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甘蔗赤霉素合成基因ScGA3ox的功能初步研究
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作者 范业赓 赖振光 +7 位作者 李燕娇 陈荣发 闫海锋 邓宇驰 丘立杭 周忠凤 李杨瑞 吴建明 《甘蔗糖业》 2024年第4期52-59,共8页
近年来在拟南芥、水稻等模式植物中对赤霉素生物合成途径的研究日益完善,而重要糖料作物甘蔗中的赤霉素生物合成途径尚未明确,为了进一步验证ScGA3ox的功能,开展了甘蔗赤霉素合成基因ScGA3ox的功能初步研究。本文通过构建甘蔗GA3氧化酶... 近年来在拟南芥、水稻等模式植物中对赤霉素生物合成途径的研究日益完善,而重要糖料作物甘蔗中的赤霉素生物合成途径尚未明确,为了进一步验证ScGA3ox的功能,开展了甘蔗赤霉素合成基因ScGA3ox的功能初步研究。本文通过构建甘蔗GA3氧化酶基因ScGA3ox的植物过量表达载体,并将该基因通过农杆菌介导法转化到拟南芥中来快速验证其在植株生长中的功能。结果表明:本研究成功构建了ScGA3ox过量表达载体,并转化拟南芥获得过表达转基因T2株系。ScGA3ox过量表达对拟南芥的表型产生了影响:ScGA3ox转基因拟南芥株系与野生植株(WT)在株高上存在较为明显的差异,ScGA3ox-1和ScGA3ox-2株系分别比野生植株矮5.04和2.33cm。甘蔗GA3氧化酶基因ScGA3ox对植物生长有重要影响,但其具体功能研究有待深入开展。本研究结果将为进一步解析ScGA3ox基因调控甘蔗节间长度的分子机理提供了理论支撑。 展开更多
关键词 甘蔗 赤霉素合成基因 ScGA3ox 过表达
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Overexpression of PbrGA2ox1 enhances pear drought tolerance through the regulation of GA_(3)-inhibited reactive oxygen species detoxification and abscisic acid signaling
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作者 Guoling Guo Haiyan Zhang +10 位作者 Weiyu Dong Bo Xu Youyu Wang Qingchen Zhao Lun Liu Xiaomei Tang Li Liu Zhenfeng Ye Wei Heng Liwu Zhu Bing Jia 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2024年第9期2989-3011,共23页
Drought stress is a devastating natural disaster driven by the continuing intensification of global warming,which seriously threatens the productivity and quality of several horticultural crops,including pear.Gibberel... Drought stress is a devastating natural disaster driven by the continuing intensification of global warming,which seriously threatens the productivity and quality of several horticultural crops,including pear.Gibberellins(GAs)play crucial roles in plant growth,development,and responses to drought stress.Previous studies have shown significant reductions of GA levels in plants under drought stress;however,our understanding of the intrinsic regulation mechanisms of GA-mediated drought stress in pear remains very limited.Here,we show that drought stress can impair the accumulation of bioactive GAs(BGAs),and subsequently identified PbrGA2ox1 as a chloroplast-localized GA deactivation gene.This gene was significantly induced by drought stress and abscisic acid(ABA)treatment,but was suppressed by GA_(3)treatment.PbrGA2ox1-overexpressing transgenic tobacco plants(Nicotiana benthamiana)exhibited enhanced tolerance to dehydration and drought stresses,whereas knock-down of PbrGA2ox1 in pear(Pyrus betulaefolia)by virus-induced gene silencing led to elevated drought sensitivity.Transgenic plants were hypersensitive to ABA,and had a lower BGAs content,enhanced reactive oxygen species(ROS)scavenging ability,and augmented ABA accumulation and signaling under drought stress compared to wild-type plants.However,the opposite effects were observed with PbrGA2ox1 silencing in pear.Moreover,exogenous GA_(3)treatment aggravated the ROS toxic effect and restrained ABA synthesis and signaling,resulting in the compromised drought tolerance of pear.In summary,our results shed light on the mechanism by which BGAs are eliminated in pear leaves under drought stress,providing further insights into the mechanism regulating the effects of GA on the drought tolerance of plants. 展开更多
关键词 PEAR GIBBERELLIN drought stress PbrGA2ox1 reactive oxygen species abscisic acid
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小麦OXS3基因家族的鉴定及表达模式分析 被引量:1
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作者 李杰 冯永佳 +6 位作者 李培华 刁邓超 李云丽 孙玉晨 孟祥宇 韩德俊 郑炜君 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期846-854,共9页
氧化应激3蛋白(OXS3)是一种植物特异性蛋白,在植物逆境耐受性中发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法,在全基因组水平对小麦中的OXS3基因家族成员进行了鉴定,并对所有成员进行了高温胁迫下的表达模式分析以及4个小麦OXS3基因的酵母... 氧化应激3蛋白(OXS3)是一种植物特异性蛋白,在植物逆境耐受性中发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法,在全基因组水平对小麦中的OXS3基因家族成员进行了鉴定,并对所有成员进行了高温胁迫下的表达模式分析以及4个小麦OXS3基因的酵母转化验证试验。结果表明,小麦具有9个OXS3基因,分布于8条染色体上,聚类为三个亚家族,主要定位于细胞核;小麦OXS3基因家族成员的启动子区具有多个激素响应和逆境响应顺式作用元件,暗示该家族成员在植物逆境响应中可能承担重要角色。共线性分析表明OXS3基因家族在单/双子叶植物间存在较大差异。qRT-PCR分析表明,小麦OXS3家族基因在高温胁迫下均上调表达。转化酵母的耐热功能验证表明,小麦基因TaOXS3-1D、TaOXS3-2A可以提高酵母的耐热性。本研究结果为系统研究OXS3的耐热功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 oxS3蛋白 基因家族 高温胁迫
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2型糖尿病患者血清可溶性OX40配体、细胞因子信号转导抑制因子3与糖尿病肾病的相关性分析
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作者 刘媛 张红瑾 刘佳 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2024年第3期410-415,共6页
目的:探究血清可溶性OX40配体(sOX40L)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)水平及其与2型糖尿病并发糖尿病肾病的相关性。方法:选取本院2021年1月至2022年6月收治的2型糖尿病患者116例进行研究,根据尿白蛋白排泄率(UAER)将患者分为一般... 目的:探究血清可溶性OX40配体(sOX40L)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)水平及其与2型糖尿病并发糖尿病肾病的相关性。方法:选取本院2021年1月至2022年6月收治的2型糖尿病患者116例进行研究,根据尿白蛋白排泄率(UAER)将患者分为一般2型糖尿病组(n=65)和糖尿病肾病组(n=51)。另选取60例同期体检的健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清sOX40L和SOCS-3水平;Pearson法分析2型糖尿病并发糖尿病肾病患者血清sOX40L水平与SOCS-3水平的关系;Logistic回归分析2型糖尿病并发糖尿病肾病的影响因素;使用二元Logistics回归,将血清sOX40L和SOCS-3水平作为X,是否发生为Y,通过形成的预测概率为“二者联合”指标,然后将该指标纳入X,建立受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清sOX40L和SOCS-3及二者联合对2型糖尿病患者并发糖尿病肾病的诊断价值。结果:与对照组相比,一般2型糖尿病组和糖尿病肾病组患者血清sOX40L、SOCS-3水平显著升高(P<0.05);与一般2型糖尿病组相比,糖尿病肾病组患者血清sOX40L、SOCS-3水平显著升高。2型糖尿病并发糖尿病肾病患者血清sOX40L水平与SOCS-3水平呈正相关(r=0.601,P<0.001);血清sOX40L和SOCS-3水平为2型糖尿病并发糖尿病肾病的独立影响因素(P<0.05)。血清sOX40L和SOCS-3单独诊断2型糖尿病并发糖尿病肾病的曲线下面积(AUC)分别为0.794、0.817,截断值分别为8.73 ng·mL^(-1)、1.37 mg·mL^(-1),灵敏度分别为82.4%、78.4%,特异度分别为67.7%、84.6%,且sOX40L和SOCS-3联合诊断的AUC为0.934,灵敏度为98.0%,特异度为83.1%。结论:2型糖尿病并发糖尿病肾病患者血清sOX40L和SOCS-3水平升高,二者联合可较好地诊断2型糖尿病并发糖尿病肾病。 展开更多
关键词 2型糖尿病 ox40配体 细胞因子信号转导抑制因子3 糖尿病肾病
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重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验
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作者 陈志红 赵媛媛 +3 位作者 张守亮 林建扬 魏法星 朱伟 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2013年第1期12-16,共5页
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物... 目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体。再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40Ig基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量。结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确。重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞。得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达。结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白。 展开更多
关键词 ox40-IgG1融合基因 腺病毒载体 ox40 ox40L途径 HL-7702肝细胞 器官移植
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温度对丙烷选择氧化催化剂Mo-V-Te-Ox催化性能的影响分析 被引量:1
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作者 张超超 郑秀慧 《山西化工》 CAS 2024年第2期107-109,共3页
本文采用三氧化钼、水合硫酸氧钒和二氧化锑为主要原料,并添加氧化铈助剂,在不同温度下进行水热合成,并结合微波干燥和常规加热干燥,通过程序升温焙烧活化制备了复合氧化物Mo-V-Te-Ox催化剂。通过自建的气固相微型反应装置和气相色谱的... 本文采用三氧化钼、水合硫酸氧钒和二氧化锑为主要原料,并添加氧化铈助剂,在不同温度下进行水热合成,并结合微波干燥和常规加热干燥,通过程序升温焙烧活化制备了复合氧化物Mo-V-Te-Ox催化剂。通过自建的气固相微型反应装置和气相色谱的联用对催化剂样品进行了活性评价。 展开更多
关键词 Mo-V-Te-ox催化剂 水热合成 微波加热法 焙烧活化
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银杏素调节TGF⁃β1/Smad通路对ox⁃LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响
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作者 李贺 曹慧 冯莉莉 《解剖学研究》 CAS 2024年第1期19-24,39,共7页
目的探讨银杏素调节转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)/Smad信号通路对ox⁃LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组(未处理的HUVEC细胞)、模型组(50μg/mL ox⁃LDL处理的HUVEC细胞)、银杏素组(50μg/mL ox⁃LD... 目的探讨银杏素调节转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)/Smad信号通路对ox⁃LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组(未处理的HUVEC细胞)、模型组(50μg/mL ox⁃LDL处理的HUVEC细胞)、银杏素组(50μg/mL ox⁃LDL+12.5μmol/L银杏素处理HUVEC细胞)、SRI⁃011381组(50μg/mL ox⁃LDL+10μmol/L的TGF⁃β1/Smad激活剂SRI⁃011381处理HUVEC细胞)、银杏素+SRI⁃011381组(50μg/mL ox⁃LDL+12.5μmol/L银杏素+10μmol/L的SRI⁃011381共同处理HUVEC细胞)。ELISA试剂盒检测HUVEC细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃α水平;CCK⁃8法检测HUVEC细胞增殖;流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡率;Western blot检测细胞上皮间质转化(EMT)、TGF⁃β1/Smad通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α、MDA水平、细胞凋亡率、TGF⁃β1、Smad3、神经型钙黏附蛋白(N⁃cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白水平显著增加(P<0.05),A值、GSH、SOD水平、上皮钙黏附素(E⁃cadherin)蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,银杏素组IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α、MDA水平、细胞凋亡率、TGF⁃β1、Smad3、N⁃cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),A值、GSH、SOD水平、E⁃cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),而SRI⁃011381组趋势相反,SRI⁃011381减弱了银杏素对ox⁃LDL诱导的HUVEC细胞损伤的抑制作用。结论银杏素可能通过下调TGF⁃β1/Smad信号通路对ox⁃LDL诱导的血管内皮细胞损伤起到改善作用。 展开更多
关键词 银杏素 TGF⁃β1/Smad信号通路 氧化低密度脂蛋白 血管内皮细胞 氧化损伤
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抗OX40/EGFR双特异性抗体的制备和活性鉴定
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作者 晋瑞娜 边海波 +2 位作者 张晓敏 杨帆 王晚萍 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期296-301,共6页
目的构建同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和OX40的双特异性抗体,并在体外初步验证其对T细胞的特异性激活作用。方法构建抗OX40/EGFR双特异性抗体的真核表达载体,转染293F细胞进行表达和纯化。构建外... 目的构建同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和OX40的双特异性抗体,并在体外初步验证其对T细胞的特异性激活作用。方法构建抗OX40/EGFR双特异性抗体的真核表达载体,转染293F细胞进行表达和纯化。构建外源表达OX40和EGFR的HEK293T细胞,利用流式细胞术分析双抗与靶蛋白表达细胞的结合活性。并利用Jurkat-OX40-NF-κB-GFP报告细胞,验证双特异性抗体对报告细胞的激活活性。通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)分泌,进一步验证抗OX40/EGFR双抗对原代T细胞的激活。结果成功构建并且纯化了抗OX40/EGFR双特异性抗体,并且验证了该双抗可以特异性地结合表达EGFR和OX40的HEK293T细胞。在表达EGFR的A549肺癌细胞介导的交联作用下,该双特异性抗体较OX40单抗更强地激活OX40-NF-κB报告细胞,并且促进PBMC分泌IL-2和IFN-γ细胞因子。结论抗OX40/EGFR双特异性抗体构建成功,可同时识别OX40和EGFR受体并激活肿瘤特异性T细胞。 展开更多
关键词 ox40 表皮生长因子受体 双特异性抗体 癌症 T细胞激活
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OX40L通过激活树突状细胞促进重组狂犬病病毒免疫早期抗体的产生
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作者 王玉芳 高婷 +6 位作者 邢潇 王勇 字绍美 刘亚萍 胡杨 李康 李莹莹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第5期425-432,共8页
目的明确重组狂犬病病毒(LBNSE-OX40L)过表达的OX40L能否通过激活树突状细胞增强先天性免疫反应进而激活早期抗体的产生。方法体外研究:从Balb/c小鼠股骨提取骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)培养6 d,用感染复数(MO... 目的明确重组狂犬病病毒(LBNSE-OX40L)过表达的OX40L能否通过激活树突状细胞增强先天性免疫反应进而激活早期抗体的产生。方法体外研究:从Balb/c小鼠股骨提取骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)培养6 d,用感染复数(MOI)=1的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L感染培养好的BMDCs,通过流式细胞术分析各病毒对BMDCs成熟情况的影响和ELISA方法检测感染BMDCs上清中与先天性免疫相关细胞因子α干扰素(interferon-α,IFN-α)和白细胞介素12p40(interleukin-12p40,IL-12p40)的表达情况。体内研究:Balb/c雌鼠双后肢肌肉注射106 FFU的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L,免疫后第6天收集小鼠腹股沟淋巴结,经流式细胞术检测成熟DCs比例,在免疫后第6天收集小鼠血清,通过抗病毒中和抗体滴定法检测病毒中和抗体(virus neutralizing antibody,VNA)含量,通过ELISA检测小鼠血清中IgG抗体;在免疫后第2、4、6天通过ELISA检测IgM抗体亚类含量。结果与亲本病毒LBNSE相比,重组病毒LBNSE-OX40L能够在体外激活显著多的BMDCs,并产生显著高水平的IFN-α和IL-12p40,且重组病毒LBNSE-OX40L能刺激体内DCs成熟分化,迅速产生高水平的VNA和RABV特异性IgG和IgM抗体亚类。结论LBNSE-OX40L能激活树突状细胞促进机体先天性免疫反应,进而增强早期抗体的产生,可以作为早期有效的狂犬病疫苗候选。 展开更多
关键词 重组狂犬病病毒 ox40L 树突状细胞 先天性免疫反应 抗体免疫
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程序性死亡配体-1与OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义
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作者 宁华汉 李芊芊 +1 位作者 吴哲丹 李晓飞 《锦州医科大学学报》 CAS 2024年第2期80-85,共6页
目的通过检测程序性死亡配体-1(PD-L1)和OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达,分析PD-L1及OX40L的表达与NK/T细胞淋巴瘤的临床分期、LDH水平、β2微球蛋白水平、Ki-67等之间的关系,通过二者表达水平的相关性分析探讨二者在肿瘤局部微环境的... 目的通过检测程序性死亡配体-1(PD-L1)和OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达,分析PD-L1及OX40L的表达与NK/T细胞淋巴瘤的临床分期、LDH水平、β2微球蛋白水平、Ki-67等之间的关系,通过二者表达水平的相关性分析探讨二者在肿瘤局部微环境的表达关系。方法应用Envision法检测35例NK/T细胞淋巴瘤组织(观察组)和17例慢性鼻-鼻窦炎组织(对照组)中PD-L1及OX40L的表达情况,探讨NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特征与两种因素之间的相互联系,并分析这两种因素表达水平之间的相关性。利用SPSS 26.0软件对所得数据进行综合统计处理。组间差异的比较采用χ^(2)检验,相关性分析采用非参数Spearman秩相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)PD-L1在NK/T细胞淋巴瘤组织(74.3%)中的表达与在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织(76.5%)中的表达,P>0.05表示差异无统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1的阳性表达的关联因素常见为临床分期(Ann Arbor分期)、LDH水平、Ki-67(P<0.05),而与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白关联不明显;(2)OX40L在NK/T细胞淋巴瘤组织(37.1%)中的表达低于对照组(88.2%),差异有统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中OX40L的阳性表达与临床分期有关(P<0.05),与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白水平、LDH水平、Ki-67无明显相关性;(3)NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1、OX40L的表达呈负相关(r=-0.630,P<0.05);(4)PD-L1与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效呈负相关(r=-0.344,P<0.05),而OX40L与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效无相关性。结论PD-L1的高表达及OX40L的低表达可能参与NK/T细胞瘤的发展。PD-L1与临床疗效的相关性,进而说明PD-1/PD-L1信号通路可能成为NK/T细胞淋巴瘤免疫治疗的新靶点。 展开更多
关键词 PD-L1 ox40L 淋巴瘤 NK细胞 免疫组织化学
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Th17细胞功能相关基因OX40L筛选及其与miR-146a-3p靶向关系验证、对Th17细胞迁移调控作用机制探讨
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作者 黄韵 李春美 李作孝 《山东医药》 CAS 2024年第36期29-35,39,共8页
目的筛选Th17细胞功能相关基因OX40L,验证其与微小核糖核酸146a-3p(miR-146a-3p)的靶向关系,并探讨其对Th17细胞迁移的调控作用机制。方法①通过在GEO数据集中搜索multiple sclerosis,筛选出GSE57098基因数据集,R语言获取CD4+T细胞和Th1... 目的筛选Th17细胞功能相关基因OX40L,验证其与微小核糖核酸146a-3p(miR-146a-3p)的靶向关系,并探讨其对Th17细胞迁移的调控作用机制。方法①通过在GEO数据集中搜索multiple sclerosis,筛选出GSE57098基因数据集,R语言获取CD4+T细胞和Th17细胞的差异基因,DAVID 6.8在线分析软件获取GO分析及KEGG分析,STRING在线分析网站获取蛋白互作关系,Cytoscape软件获取Th17细胞功能相关的Hub蛋白,选取关键蛋白OX40L,并用qPCR进行验证。②使用Starbase预测miR-146a-3p与OX40L存在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p与OX40L靶向关系。③体外培养生长良好的Th17细胞,给予miR-146a-3p模拟物和抑制剂及其对照处理,qRT-PCR检测Th17细胞miR-146a-3p mRNA,CCK8增殖实验检测各组Th17细胞增殖情况,Transwell小室侵袭实验检测各组Th17细胞迁移情况,流式细胞术检测各组Th17细胞凋亡比例;qRT-PCR法和Western blot法检测各组OX40L mRNA和蛋白,ELISA法检测各组Th17细胞TNF-α。结果①GSE57098数据集中Th17细胞和CD4+T细胞有差异基因2130个,其中表达上调1515个,表达下调615个,OX40L在表达上调的蛋白中排名靠前。OX40L在KEGG分析中参与Cytokine-cytokinereceptorinteraction途径。②miR-146a-3p与OX40LmRNA3'UTR呈靶向结合关系,miR-146a-3p可抑制OX40L基因的转录表达。③与对照组比较,miR-146a-3pmimic组Th17细胞TLR4和p-NFκBp65蛋白表达降低,分泌TNF-α能力降低,细胞迁移能力降低,P均<0.05。结论OX40L在Th17细胞基因表达谱发生明显变化,其表达上调是造成多发性硬化发病的机制之一;miR-146a-3p通过靶向调节OX40L的表达,进一步抑制TNF-α途径中NF-κB p65的翻译水平,降低Th17细胞的迁移。 展开更多
关键词 多发性硬化 ox40L基因 TH17细胞 微小核糖核酸146a-3p TNF-α途径
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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析
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作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页
赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多
关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(GA2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(VIGS) 表达分析
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紫草素对特应性皮炎小鼠TSLP/OX40L通路及Th1/Th2平衡的影响 被引量:12
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作者 吴金环 郑宝勇 张理涛 《天津医药》 CAS 北大核心 2021年第9期949-954,共6页
目的探究紫草素对特应性皮炎(AD)小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)/OX40配体(OX40L)通路及辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡的影响。方法采用局部外涂2,4-二硝基氟苯(DNFB)法制备AD小鼠模型。采用随机数字表法将模型小鼠分为模型组,紫草素低(2... 目的探究紫草素对特应性皮炎(AD)小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)/OX40配体(OX40L)通路及辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡的影响。方法采用局部外涂2,4-二硝基氟苯(DNFB)法制备AD小鼠模型。采用随机数字表法将模型小鼠分为模型组,紫草素低(20 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组和阳性对照组(泼尼松龙,10 mg/kg),每组15只;另取15只作为正常对照组。各给药组大鼠按10 mL/kg灌胃相应药物,模型组和正常对照组灌胃等体积溶剂,每日1次,连续15 d。分别于给药后第5、10和15天观察小鼠搔抓行为;于给药后第7、15天评价小鼠皮损状况;末次给药结束后,HE染色观察小鼠皮损组织病理学变化;流式细胞术检测小鼠外周血中Th1/Th2比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中TSLP、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平;Western blot法检测小鼠皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠搔抓行为增加,皮肤炎性损伤加重;皮损组织中表皮和真皮区域均有密集的炎性细胞浸润,表皮增厚;外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平显著升高(P<0.05),外周血Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平显著下降(P<0.05)。与模型组相比,紫草素低、中、高剂量组小鼠第5、10、15天的搔抓行为减少,第7、15天皮肤炎性损伤依次减轻(P<0.05);小鼠表皮和真皮区域炎性细胞浸润和表皮增厚依次减轻,外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平依次降低(P<0.05),Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平依次升高(P<0.05)。结论紫草素可能通过抑制TSLP/OX40L通路维持AD小鼠外周血中Th1/Th2平衡,改善皮肤炎性损伤。 展开更多
关键词 紫草素 皮炎 特应性 Th1-Th2平衡 ox40配体 胸腺基质淋巴细胞生成素/ox40L通路
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OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义 被引量:4
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作者 朱然然 蒋觉安 +4 位作者 王婷 徐婷 吴敏 刘翠平 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期862-865,共4页
目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表... 目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义。结果与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65%±3.51%vs 5.68%±1.68%,P<0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异。pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76%±3.60%vs 3.15%±1.89%,P<0.01)和CD19+B细胞(4.69%±2.40%vs 2.76%±1.33%,P<0.01)中均高于健康志愿者。活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者。治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降。结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关。 展开更多
关键词 原发性干燥综合征 共刺激分子 ox40 ox40L
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人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究 被引量:2
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作者 王艳艳 白云 +2 位作者 李茂全 宋建勋 许雪青 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-16,共4页
目的 构建人OX4 0 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人OX4 0 Fc融合蛋白。方法 从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增OX4 0膜外区cDNA编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,进行酶切并与人IgG1Fc... 目的 构建人OX4 0 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人OX4 0 Fc融合蛋白。方法 从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增OX4 0膜外区cDNA编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,进行酶切并与人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,采用脂质体法稳定转染COS 7细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与Westernblotting进行鉴定。检测其对活化后Jurkat细胞增殖的抑制活性。结果 测序证实构建的OX4 0膜外区与OX4 0 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实OX4 0 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与Westernblotting证实其为OX4 0 Fc蛋白。增殖实验证明其对活化后的Jurkat细胞有抑制增殖作用。结论 成功构建了人OX4 0 Fc真核表达载体 ,并使有生物学活性的OX4 0 Fc融合蛋白在COS 7细胞上获得了稳定表达。 展开更多
关键词 ox40 ox40-Fc 真核表达 共刺激分子
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过敏性紫癜患儿急性期外周血OX40/OX40L的表达及意义 被引量:3
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作者 王小鹏 封其华 +2 位作者 张建华 王子才 徐敏 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1152-1155,共4页
目的探讨共刺激分子OX40/OX40L在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其在过敏性紫癜发病机制中的作用及临床意义。方法选取首次住院的34例HSP患儿作为观察组,另20例健康体检儿童作为对照组。采集分离PBMC,应用逆转录... 目的探讨共刺激分子OX40/OX40L在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其在过敏性紫癜发病机制中的作用及临床意义。方法选取首次住院的34例HSP患儿作为观察组,另20例健康体检儿童作为对照组。采集分离PBMC,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测OX40、OX40L mRNA的表达,并分析其与24 h尿微量白蛋白(24 h UMA)的相关性。结果 HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01)。24 h UMA增高的HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均高于24 h UMA正常者,差异均有统计学意义(P均<0.05),且均与24 h UMA呈正相关(P<0.05)。结论过敏性紫癜患儿PBMC的OX40、OX40L mRNA表达有异常增高并与24 h UMA相关。提示OX40、OX40L可能参与了过敏性紫癜的发病,其或许可以作为监测HSP患儿病情及检测早期肾脏损害的免疫学指标。 展开更多
关键词 过敏性紫癜 ox40 ox40L 逆转录-聚合酶链反应
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OX40OX40L与动脉粥样硬化 被引量:3
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作者 王燃燃 彭道泉 赵水平 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第5期455-457,共3页
动脉粥样硬化为一种慢性炎症疾病。T细胞与动脉粥样斑块炎症反应关系密切。OX40OX40L是机体炎症反应中一对重要的信号通路,参与T细胞的活化、增值、迁移,在动脉粥样硬化的形成和发展中起到重要的作用。本文就OX40OX4OL的生物学特性以及... 动脉粥样硬化为一种慢性炎症疾病。T细胞与动脉粥样斑块炎症反应关系密切。OX40OX40L是机体炎症反应中一对重要的信号通路,参与T细胞的活化、增值、迁移,在动脉粥样硬化的形成和发展中起到重要的作用。本文就OX40OX4OL的生物学特性以及与动脉粥样硬化相关性做一综述。 展开更多
关键词 内科学 动脉粥样硬化 冠心病 ox40 ox40L
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刺络泻血疗法对高血黏度大鼠血清ox-LDL和ox-LP(a)的影响 被引量:3
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作者 陈子晨 赵慧玲 +5 位作者 战慧敏 谭丽 张博 曾蕊 魏丹蕾 陶艳红 《中医药导报》 2017年第17期35-37,47,共4页
目的:观察刺络泻血疗法对高血黏度大鼠血清中ox-LDL和ox-LP(a)及血液流变学的影响。方法:将清洁级雄性SD大鼠32只随机分为空白组、模型组、刺络泻血组和药物治疗组。空白组普通饲料喂养,其余3组喂饲高脂饲料建立高血黏度大鼠模型,按照... 目的:观察刺络泻血疗法对高血黏度大鼠血清中ox-LDL和ox-LP(a)及血液流变学的影响。方法:将清洁级雄性SD大鼠32只随机分为空白组、模型组、刺络泻血组和药物治疗组。空白组普通饲料喂养,其余3组喂饲高脂饲料建立高血黏度大鼠模型,按照不同干预方式分别进行刺络泻血与辛伐他丁药物治疗。8周后,腹主动脉取血,采用ELISA法测定4组大鼠血清ox-LDL和ox-LP(a)含量以及血液流变学指标。结果:模型组全血黏度、血浆黏度、血清中ox-LDL及ox-LP(a)均高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01);刺络泻血组和药物治疗组全血黏度、血浆黏度、血清中ox-LDL及ox-LP(a)均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:刺络泻血疗法可降低高血黏度大鼠的血液黏度以及血清中ox-LDL和ox-LP(a)的表达,改善微循环。 展开更多
关键词 刺络泻血 高黏血症 大鼠 动脉粥样硬化 血液流变学 ox—LDL ox—LP(a)
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系统性红斑狼疮患者外周血共刺激分子OX40/OX40L表达及其意义 被引量:2
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作者 朱婷婷 钱齐宏 杨长志 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期344-346,共3页
目的:探讨外周血共刺激分子OX40和OX40L在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T、B细胞上的表达及其意义。方法:采用流式细胞仪检测技术对62例SLE患者和40例健康志愿者外周血T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析。结果:与健康对照组... 目的:探讨外周血共刺激分子OX40和OX40L在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T、B细胞上的表达及其意义。方法:采用流式细胞仪检测技术对62例SLE患者和40例健康志愿者外周血T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析。结果:与健康对照组比,SLE患者组外周血CD4^+T细胞OX40表达水平显著高于健康对照组,而CD8^+T细胞OX40表达水平较对照组无明显变化;SL正患者组外周血B细胞上OX40L表达率较健康对照组显著升高(P<0.05);SLE活动期患者组外周血CD4^+T细胞上OX40及B细胞上OX40L的表达率明显高于非活动组;SLE患者组治疗后OX40和OX40L表达率随病情好转而下降。结论:SLE患者外周血CD4^+T细胞上OX40及B细胞OX40L表达水平明显上调,随着病情的好转,CD4^+T细胞上OX40及B细胞OX40L表达水平明显下调,提示OX40/OX40L信号在T细胞与B细胞相互作用过程中可能有助于T细胞的持续活化,从而参与SLE的发生发展。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 外周血共刺激分子ox40 外周血共刺激分子ox40L
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