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猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
被引量:
2
1
作者
刘明明
贾立军
+2 位作者
薛书江
梁晚枫
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期592-594,共3页
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的...
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的OxaA片段进行拼接,获得能够正确翻译膜蛋白的OxaA基因序列,将鉴定正确的pVAX-OxaA重组质粒转染Vero细胞,应用IFA和western blot方法鉴定OxaA基因在Vero细胞中的表达。结果显示,突变的OxaA基因经Overlap PCR扩增获得长度为747 bp的基因片段,与GenBank中M.suis基因组的核苷酸序列同源性为98%,IFA检测OxaA基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为29 ku,具有较好的反应原性。本实验首次在真核细胞中表达了M.suis的QxaA基因,为M.suis基因疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
猪嗜血支原体
oxaa
基因
同义定点突变
真核表达
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职称材料
猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立
被引量:
7
2
作者
夏晓辉
丁晓双
+4 位作者
张晓轩
海旭南
贾立军
张守发
许应天
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期164-169,共6页
根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELIS...
根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。
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关键词
猪附红细胞体
PCR-ELISA
oxaa
基因
原文传递
题名
猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
被引量:
2
1
作者
刘明明
贾立军
薛书江
梁晚枫
张守发
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期592-594,共3页
基金
公益性行业(农业)科研专项(200903036-13)
文摘
为真核表达猪嗜血支原体(Mycoplasma suis)膜蛋白OxaA基因,本实验采用PCR技术扩增包含OxaA基因全长在内的1 561 bp序列,通过引物突变法对OxaA基因内部的两个编码蛋白障碍的碱基进行同义定点突变,应用Overlap PCR技术将3对引物扩增得到的OxaA片段进行拼接,获得能够正确翻译膜蛋白的OxaA基因序列,将鉴定正确的pVAX-OxaA重组质粒转染Vero细胞,应用IFA和western blot方法鉴定OxaA基因在Vero细胞中的表达。结果显示,突变的OxaA基因经Overlap PCR扩增获得长度为747 bp的基因片段,与GenBank中M.suis基因组的核苷酸序列同源性为98%,IFA检测OxaA基因在Vero细胞中获得瞬时表达,western blot分析表达蛋白的分子量为29 ku,具有较好的反应原性。本实验首次在真核细胞中表达了M.suis的QxaA基因,为M.suis基因疫苗的研究奠定了基础。
关键词
猪嗜血支原体
oxaa
基因
同义定点突变
真核表达
Keywords
Mycoplasma suis
oxaa gene
synonymous site directed mutation
eukaryotic expression
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立
被引量:
7
2
作者
夏晓辉
丁晓双
张晓轩
海旭南
贾立军
张守发
许应天
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期164-169,共6页
基金
公益性行业(农业)科研专项(200903036-13)
文摘
根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。
关键词
猪附红细胞体
PCR-ELISA
oxaa
基因
Keywords
Eperythrozoon suis
PCR-ELISA
oxaa gene
分类号
S852.64 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
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被引量
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1
猪嗜血支原体OxaA基因的同义定点突变、克隆及在Vero细胞中的表达
刘明明
贾立军
薛书江
梁晚枫
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
下载PDF
职称材料
2
猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立
夏晓辉
丁晓双
张晓轩
海旭南
贾立军
张守发
许应天
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013
7
原文传递
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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