TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈萨克族食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨TGF-β信号通路关键分子转化生长因子β-1型受体(transforming growth factor-βreceptor 1,TβR1)和磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)蛋白在哈萨克族(哈族)食管鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达及其临床意义。方法采用GEO和TCGA数据库分析食管鳞癌标本与癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的表达;运用免疫组织化学技术检测127例哈族食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的蛋白表达状况,分析及探讨TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与哈族食管鳞癌患者临床病理参数及预后的关系。结果TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈族食管鳞癌中表达上调(P=4.79×10^(-7);P=2.21×10^(-9)),且两者的表达呈正相关(r=0.322,P=0.002);TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度密切相关(P=0.003;P=0.005),且有淋巴结转移的样本中TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移的样本(P=0.028;P<0.001),而TβR1、p-Smad2/3蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别和肿瘤分化程度无明显相关(均P>0.05);Kaplan-Meier生存分析显示TβR1和p-Smad2/3蛋白高表达食管鳞癌患者生存时间明显短于低表达患者(P=0.0013;P=0.0017)。结论TβR1和p-Smad2/3蛋白表达与哈族食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关。

发酵虫草菌粉Cs-4对UUO大鼠肾间质p-Smad2/3表达的影响

目的通过发酵虫草菌粉Cs-4干预UUO大鼠模型,动态观察TGF-β1、p-Smad2/3在梗阻侧肾组织中的表达。方法54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Cs-4治疗组。于术后第7、14、21 d每组分别处死6只大鼠。HE、PAS、Masson染色观察肾间质纤维化指数,免疫组织化学染色法检测肾间质中COL-IV、TGF-β1和p-Smad2/3蛋白的表达,RT-PCR法检测肾组织TGF-β1mRNA的表达。结果Cs-4治疗组肾小管间质纤维化指数、肾间质COL-IV、TGF-β1和p-Smad2/3的蛋白表达以及肾组织TGF-β1的mRNA表达均较模型组明显降低。结论Cs-4能通过抑制小管间质中的细胞内TGF-β依赖性Smad信号通路延缓肾间质纤维化的进展。

皮肤纤维瘤中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白质表达的检测

目的:探讨转化生长因子β(TGF-β)信号转导途径中Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3),磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad4蛋白在皮肤纤维瘤中的表达特点及其意义。方法:采用EliVisionTMplus免疫组化技术检测皮肤纤维瘤与正常对照皮肤中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4的表达情况。结果:与正常皮肤相比,Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白在皮肤纤维瘤的增殖表皮中表达下调,但在真皮内瘤体中大量增殖的梭形细胞中表达却显著上调。结论:皮肤纤维瘤瘤体中梭形细胞Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达上调可促进TGF-β信号转导,有助于皮肤纤维瘤中纤维增殖状态的形成。

PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究

目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P<0.05)。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P<0.05)。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001)。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制。

培哚普利对糖尿病大鼠肾组织内p-smad2及Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂培哚普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型肾组织Smad2活化形式p-smad2及Ⅳ型胶原蛋白表达的影响。方法链脲佐菌素诱导的16只糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和培哚普利治疗组,另以8只正常大鼠作为对照组。于24周末观察血糖、血压、24 h尿蛋白、肾重/体重。免疫组织化学检测肾组织p-smad2、Ⅳ型胶原蛋白表达。Western-blot检测大鼠肾组织p-smad2蛋白表达水平。结果模型组和治疗组血糖明显高于正常组,但治疗组和模型组差异无显著性,模型组尿白蛋白水平均显著高于正常组,治疗组尿蛋白较模型组显著降低。免疫组化半定量结果示p-smad2蛋白在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少,Ⅳ型胶原在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少。Western-blot示p-smad2在治疗组较模型组显著减少。结论培哚普利可以通过影响糖尿病大鼠肾脏内Smad2活化,从而下调Ⅳ型胶原表达来延缓糖尿病纤维化进程。

Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化

目的：观察Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化，探讨Smad3基因敲除小鼠肾是否有Smad2和p-Smad2代偿性增加。方法：4只Smad3基因敲除小鼠，10只野生型小鼠，应用免疫组织化学显色技术，检测Smad2和矿Smad2蛋白的定位和表达情况，并用Modc病理图像分析系统对图像进行半定量分析。结果：野生型小鼠肾Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质中有广泛弱表达，p-Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质、胞核中也有弱表达，而Smad3基因敲除小鼠的Smad2和p-Smad2的表达比野生型小鼠有显著升高。结论：Smad3基因敲除能引起小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的代偿性增加。

TGF-βⅡ受体和磷酸化Smad2蛋白在食管癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β-Ⅱ型受体(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生和发展中的作用。方法应用Western blot技术对38例手术切除的食管癌标本和12例癌旁组织中的TβRⅡ、P-Smad2的表达进行检测。结果食管癌中TβRⅡ、P-Smad2的表达明显低于癌旁组织,具有显著性差异(P<0.05);但TβRⅡ、P-Smad2的表达在不同临床病理特征(年龄、性别构成比、组织分化程度、有无淋巴结转移)中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论食管癌组织中存在TβRⅡ和Smad2的蛋白表达异常,可能与食管癌的发病有关。

TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎相关的间质性肺纤维化小鼠中的作用

目的研究TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)相关的间质性后肺纤维化小鼠中的作用。方法通过小鼠尾根部皮下给药完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白(chickenⅡcollagen,Col-Ⅱ),构建RA小鼠模型。空白组给等量蒸馏水,对照组给等量冰醋酸(溶媒)。监测小鼠足趾肿胀程度(关节肿胀度与关节炎指数)评价小鼠建模情况;通过HE、Masson染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组化法观察肺间质细胞的胞质中TGF-β表达;采用化学发光法测量肺组织中羟脯氨酸水平;Western blot检测肺组织中Smad2、Smad3及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与空白组、溶媒组相比,模型组小鼠关节肿胀、关节炎指数明显升高;给药21 d后,HE染色显示模型组肺间质有炎性改变,Masson染色显示模型组小鼠肺间质胶原纤维沉积,免疫组化染色显示模型组小鼠肺间质细胞的胞质中TGF-β表达升高,呈棕黄色;同时,与空白组、溶媒组相比,模型组肺组织匀浆显示羟脯氨酸表达明显升高;且进一步Western blot研究发现,与空白组、溶媒组相比,p-Smad2与p-Smad3在模型组中表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论RA可导致肺组织纤维化,p-Smad2与p-Smad3表达上调,在肺纤维化和RA相关的间质性后肺纤维化中起重要作用。

烟草烟雾通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN发生上皮间质转化

目的:探讨烟草烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)在诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及机制。方法:以不同浓度(0.25%,0.5%及1%)CSE刺激RLE-6TN细胞株;TGF-β1受体抑制子(SB431542)预处理后,加入1%CSE共培养。实时定量PCR(RT-PCR)检测E-cadherin和Vimentin RNA表达;印迹法(Western blot)检测TGF-β1、Smad2、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达量。结果:经不同浓度的CSE作用,E-cadherin无论是在RNA还是在蛋白水平表达均下调,而Vimentin表达均上调;同时,TGF-β1、p-Smad2和N-cadherin蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制子(SB431542)干预后,p-Smad2表达量明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量较对照组明显增加(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达量较对照组明显降低(P<0.05)。结论:CSE可能通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,从而诱导RLE-6TN发生EMT。

癌相关成纤维细胞通过TGF-βRⅡ/smad7调控前列腺癌细胞株PC-3增殖

目的研究癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)通过TGF-β/Smads信号通路对前列腺癌细胞株PC3、LNCa P增殖能力的影响及通路关键蛋白TGF-βRⅡ、Smad2、Smad7在其中的作用。方法原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs。Western blot检测CAFs、PC3和LNCa P细胞TGF-β受体II型(TGF-βRⅡ)表达。用CAFs原代培养液制备条件培养液CAFs-CM,用TGF-βRⅡ抑制剂(LY2109761)处理CAFs后制备出另一条件培养液CAFs-LY-CM,分别观察PC3和LNCa P在常规培养基、CAFs-CM、CAFs-LY-CM条件培养液中的增殖能力及差异性,以及活性形式磷酸化的Smad2(P-Smad2)、Smad7表达水平的变化。结果 CAFs、PC3细胞阳性表达TGF-βRⅡ,LNCa P细胞呈弱阳性表达。和常规培养基相比,浓度为0.75g/L CAFs-CM的条件培养基可显著提升PC3[分别为(6.36±0.65)和(2.94±0.19),P<0.05]和LNCa P细胞[分别为(5.06±0.38)和(2.86±0.39),P<0.05]的增殖能力。CAFs-CM上调PC3细胞Smad7蛋白表达水平,对LNCa P细胞P-Smad2蛋白表达几无影响。采用10^(-6)mol/L LY2109761处理CAFs后,CAFs-LY-CM可显著抑制PC3细胞增殖[分别为(4.09±0.36)和(6.36±0.65),P<0.05],并呈剂量依赖性,但对LNCa P细胞增殖无显著抑制作用。结论 CAFs通过TGF-βRⅡ/Smad7关键蛋白调控PC3增殖,是PCa潜在的治疗新靶点。CAFs通过TGF-β信号通路调控LNCaP细胞增殖的作用不显著,存在其他的分子机制。

寻常性银屑病皮损表皮中TGF-β受体活化Smad蛋白表达的检测

目的:探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β受体活化Smad——[Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3)]和磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白在寻常性银屑病皮损中的表达及其意义。方法:采用EliVision法免疫组化技术分别检测寻常性银屑病皮损与正常对照皮肤中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白的表达情况。结果:与正常对照皮肤相比,Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白在寻常性银屑病皮损表皮中的表达显著降低。结论:寻常性银屑病皮损表皮中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白表达降低,可通过阻断TGF-β信号转导,有助于寻常性银屑病皮损角质形成细胞过度增殖状态的发生和发展。

金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响

为探索金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响,用热灭活金黄色葡萄球菌(0、10~4、10~5、10~6、10~7和10~8 CFU·mL^(-1))刺激BMFB,24h后采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量。使用TGF-β1受体特异性抑制剂SB-431542预处理细胞,再用10~5 CFU·mL^(-1)热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real-time PCR方法检测α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量,免疫荧光法检测collagen-Ⅰ蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的转录量显著升高(P<0.05或P<0.01),其中以10~5CFU·mL^(-1)刺激组的TGF-β1mRNA的转录量最高。不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量均能显著升高(P<0.05或P<0.01),其中以10~5 CFU·mL^(-1)刺激组的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量最高。抑制剂SB-431542能够极显著抑制α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量(P<0.01)。结果提示,金黄色葡萄球菌能够通过TGF-β1/Smad信号通路诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,本研究为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机制奠定基础。

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。

Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义

目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数(卵巢湿重/体重);酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡刺激素(FSH)水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少(P<0.05),大鼠卵巢指数下降(P<0.05),血清中E2水平降低和FSH水平上升(P<0.05)。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),Smad2磷酸化水平(p-Smad2)表达增高(P<0.05);Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少(P<0.05),p-Smad3表达降低(P<0.05)。结论顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。

淫羊藿次苷Ⅱ通过下调TGF-β1/Smads信号通路抑制球囊损伤后大鼠颈动脉内膜增生（英文）

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(Icariside,Ics Ⅱ)是否影响球囊损伤所致的大鼠颈总动脉内膜增生,并进一步探讨其作用与TGF-β1/Smads信号通路的关系。方法将雄性 SD大鼠随机分为假手术组和球囊损伤组(以球囊损伤法建立大鼠颈动脉模型),术后将球囊损伤大鼠随机再分为模型组(Model组);ICS Ⅱ低、高剂量组(ICSⅡ-L;ICSⅡ-H)。ICSⅡ-L组和ICSⅡ-H组分别给予ICSⅡ(10、20 mg/(kg·d),qd)连续灌胃14d。假手术组和模型组同样给药方式给予同体积的蒸馏水14 d。最后1次给药后24 h,麻醉后取损伤的左颈总动脉。用HE染色法观察血管损伤侧新生内膜增生水平,用Western blot法检测血管损伤部位TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、MMP-2的表达。结果与假手术组比较,模型组损伤侧颈动脉内膜增生明显,其TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、MMP-2蛋白表达显著增高( P <0.05);与Model组相比,ICSⅡ-L组和 ICSⅡ-H组颈动脉内膜增生明显缓解,其TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、MMP-2 蛋白表达显著降低( P< 0.05)。结论 ICSⅡ可明显抑制球囊损伤大鼠颈动脉内膜增生,其机制可能与调控TGFβ1/Smads信号通路有关。

脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中几种Smad蛋白质表达的检测

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β信号转导途径中Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3),磷酸化Smad2,磷酸化Smad3(p-Smad2/3)和Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达特点及其意义。方法:采用EliVisionTMplus免疫组化技术分别检测脂溢性角化病、基底细胞癌、鳞状细胞癌以及正常对照皮肤中Smad1/2/3、p-Smad2/3、和Smad4的表达情况。结果:Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达较正常表皮显著降低。结论:脂溢性角化病、鳞状细胞癌和基底细胞癌中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达降低可能通过阻断TGF-β信号转导,有助于上述表皮肿瘤的形成和发展。

miR-486在低氧诱导肺间质纤维化中的调控作用及机制

目的探索低氧对人胚肺成纤维细胞(MRC5细胞)miR-486表达的调控作用,明确miR-486在低氧相关肺间质纤维化的发病中的调控作用及机制。方法将MRC5细胞进行低氧处理,利用qRT-PCR法检测miR-486、纤维连接蛋白(FN)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,用Western blot检测p-SMAD2及内参GAPDH蛋白的表达。用慢病毒技术将miR-486过表达或沉默后用qRT-PCR检测FN、α-SMA、胶原蛋白I型(CollagenⅠ)及CollagenⅢ的表达情况,用Western blot检测p-SMAD2及GAPDH蛋白的表达。结果低氧可抑制MRC5细胞中miR-486的表达,而促进FN、α-SMA及p-SMAD2的表达;过表达miR-486促进MRC5细胞miR-486的表达,而下调FN、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及p-SMAD2的表达;与之相反,沉默miR-486可以抑制MRC5细胞miR-486的表达,促进FN、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及p-SMAD2的表达。结论低氧可能通过调控miR-486影响p-SMAD2的表达,参与肺间质纤维化发病过程。

脂溢性角化病皮损区受体活化Smad的变化

目的探讨转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号转导通路中受体活化Smads(Smad2,Smad3)在脂溢性角化病皮损区的表达及其意义。方法采用反转录-实时定量聚合酶链式反应(RT and quantitative Real-Time PCR)和免疫组化技术分别检测脂溢性角化病皮损和正常对照皮肤中Smad2及Smad3的mRNA和Smad1/2/3及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白的表达情况。结果与正常对照皮肤组相比,脂溢性角化病皮损中Smad2、Smad3的mR-NA以及Smad1/2/3、p-Smad2/3的表达水平下降。结论脂溢性角化病中受体活化Smads(Smad2、Smad3)和p-Smad2/3表达下调可阻断TGF-β信号转导,可能使TGF-β抑制上皮增生的作用不能有效发挥,从而促进了脂溢性角化病表皮的过度增生。

维立西呱通过环磷酸鸟苷-磷酸化Smad2通路调节慢性心力衰竭C57BL/6小鼠心肌纤维化

目的探讨维立西呱是否通过环磷酸鸟苷(cGMP)-磷酸化Smad2(p-Smad2)通路抑制慢性心力衰竭(心衰)小鼠的心肌纤维化、改善心脏结构与功能。方法动物实验:40只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、心衰组、心衰+3 mg/(kg·d)维立西呱组(心衰-Ver3组)、心衰+10 mg/(kg·d)维立西呱组(心衰-Ver10组),每组10只。腹腔注射阿霉素(5 mg/kg,2次/周,连续6周)构建心衰模型。维立西呱采用灌胃法给药,1次/d,连续8周。心脏超声评价小鼠的心脏结构和功能;天狼猩红染色观察心肌胶原沉积;放射免疫法测cGMP水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原水平;Western-blot法测心肌组织p-Smad2/总Smad2(T-Smad2)水平。细胞实验:组织贴块法培养小鼠心肌成纤维细胞(FBs);以TGF-β_(1)诱导FBsⅠ型胶原、Ⅲ型胶原合成;Western-blot法测FBs p-Smad2/T-Smad2水平;ELISA法测FBs上清液Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原水平。结果动物实验:与空白对照组相比,心衰组舒张末期左心室后壁厚度(LVPWD)、舒张末期室间隔厚度(IVSD)增加,左室射血分数(LVEF)降低(均P<0.05),血浆及左心室心肌组织cGMP水平均降低[血浆cGMP:(4.12±0.86)比(6.24±1.35)nmol/L,P<0.05;左心室心肌组织cGMP:(62.01±9.13)比(145.68±24.29)pmol/mg,P<0.05],心肌组织TGF-β_(1)含量、p-Smad2水平、心肌胶原容积分数(CVF)增加(均P<0.05);与心衰组相比,心衰-Ver3组、心衰-Ver10组LVPWD、IVSD降低,LVEF增加(均P<0.05),血浆及左心室心肌组织cGMP水平增加[血浆cGMP:(6.68±1.13),(15.49±2.07)比(4.12±0.86)nmol/L,P<0.05;左心室心肌组织cGMP:(139.25±21.54),(162.74±30.92)比(62.01±9.13)pmol/mg,P<0.05],心肌组织p-Smad2蛋白水平、CVF降低(均P<0.05),但血浆和心肌组织TGF-β_(1)水平差异无统计学意义(P>0.05)。细胞实验:TGF-β_(1)(1~30 ng/mL)可促进FBsⅠ型胶原、Ⅲ型胶原合成;维立西呱(10-6~10-4mol/L)能抑制TGF-β_(1)(10 ng/mL)诱导的FBsⅠ型胶原、Ⅲ型胶原合成;维立西呱(10-5mol/L)及Smad2抑制剂(10-4mol/L)均可降低TGF-β_(1)(10 ng/mL)处理的FBs的p-Smad2、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原水平(P<0.01);cGMP抑制剂(10-4mol/L)可削弱维立西呱(10-5mol/L)对TGF-β_(1)(10 ng/mL)诱导的FBs p-Smad2、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的抑制作用(P<0.05)。结论维立西呱通过增加cGMP、抑制心肌组织p-Smad2水平,减轻慢性心衰小鼠的心肌纤维化,改善心脏结构与功能。

益肾化瘀方含药血清对NRK52E细胞转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响

目的:观察益肾化瘀方含药血清对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响。方法:将体外培养的NRK52E细胞随机分为6组:正常对照组,TGF-β1刺激组,5%、10%、20%益肾化瘀方含药血清组,缬沙坦含药血清组,培养48h后取出。观察各组细胞形态变化,采用免疫细胞化学法检测NRK52E细胞p-Smad2/3、Smad7的表达。结果:NRK52E细胞经TGF-β1刺激后,失去原有的铺路石样形态,拉长增大呈梭形,而与益肾化瘀方含药血清共同作用后,细胞形态有所修复,细胞梭形改变减轻;免疫组化显示与正常对照组比较,TGF-β1刺激组细胞p-Smad2/3核表达明显增强(P<0.01),Smad7表达却减弱(P<0.01)。而各药物干预组与单纯TGF-β1刺激组相比,p-Smad2/3的表达随药物浓度增加呈下降趋势(P<0.01),而Smad7表达的阳性率明显增强(P<0.01)。其中20%益肾化瘀方含药血清组与缬沙坦含药血清组的表达无显著差异。结论:益肾化瘀方含药血清通过抑制Smad2/3的磷酸化,上调Smad7表达,显示出对TGF-β1刺激的NRK52E细胞转分化过程的阻抑作用,并与剂量呈正相关。