尖锐湿疣患者组织中P16INK4A、ZnT1的表达及其与HPV感染和预后的关系

目的探讨尖锐湿疣(CA)患者组织中P16INK4A蛋白、锌离子转运体1(ZnT1)mRNA表达水平及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法选取2019年5月至2022年5月在该院就诊的82例CA患者作为CA组,另选取同期在该院进行包皮环切术或外阴整形术的64名皮肤健康者作为对照组。收集CA组疣体组织及对照组的正常包皮或外阴组织,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交技术进行HPV分型检测,比较CA组与对照组,以及不同HPV分型CA患者P16INK4A与ZnT1 mRNA表达水平。所有CA患者均随访治疗8个月,复发的患者纳入复发组,未复发的患者纳入未复发组,比较两组P16INK4A与ZnT1 mRNA表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析P16INK4A、ZnT1单独及2项指标联合检测对CA预后复发的预测价值。结果82例CA患者中,27例为低危型感染(32.93%),25例为高危型感染(30.49%),30例为混合型感染(36.59%),感染HPV亚型包括6、11、16、18、31和51。CA组P16INK4A、ZnT1表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。P16INK4A高表达组45例、低表达组37例;ZnT1高表达组43例、低表达组39例。P16INK4A mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ZnT1 mRNA低表达组与高表达组年龄、性别、疣体数量、疣体位置比较,差异均无统计学意义(P>0.05),疣体直径、病程、HPV分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。混合型、高危型P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于低危型,差异均有统计学意义(P<0.05);高危型P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于混合型,差异均有统计学意义(P<0.05)。CA患者随访8个月后,有29例复发(复发组),53例未复发(未复发组)。复发组P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,P16INK4A、ZnT1 mRNA单独及2项指标联合检测预测CA预后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.840、0.880、0.963,P16INK4A与ZnT1 mRNA联合检测预测CA预后复发的AUC大于2项指标单独检测(Z_(二者联合-P16INK4A)=2.097,P=0.036;Z_(二者联合-ZnT1)=2.074,P=0.038)。结论CA患者疣体组织中P16INK4A、ZnT1 mRNA表达水平明显升高,其表达水平与HPV感染密切相关。

p16INK4a联合人乳头瘤病毒及液基细胞学检查在宫颈上皮内瘤变临床诊断中的应用

目的分析p16INK4a蛋白、人乳头瘤病毒及液基细胞学检查(LCT)在宫颈癌前病变筛查中的检测效率,为宫颈癌的预防和治疗提供依据。方法分析2019年1月—2020年6月广州市妇女儿童医疗中心的139例住院患者的宫颈上皮细胞p16INK4a染色、人乳头瘤病毒检测及宫颈细胞学检测结果。这些病例包括111例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者和28例宫颈炎性疾病患者。比较三种方法单独及联合应用筛查CIN病变的效能。结果在对CIN患者的检测中,p16INK4a、生物微流控芯片和宫颈细胞学检测CIN及以上病变的灵敏度分别为91.89%、94.59%和78.20%,特异度分别为57.14%、17.86%和46.43%,AUC分别为0.75、0.56和0.66。而“p16INK4a+LCT”、“p16INK4a+hrHPV”、“LCT+hrHPV”以及三种方法联合检测的灵敏度分别为96.40%、97.30%、94.59%和99.10%,特异度分别为85.71%、92.86%、89.29%和92.86%,AUC分别为0.91、0.95、0.92和0.96。结论p16INK4a和hrHPV联合检测有助于提高诊断的准确性和早期发现率,从而使得能更早进行干预或治疗。通过这种联合应用,可以更准确地鉴别出低级别和高级别的宫颈上皮内瘤变,为个性化的病患管理提供更多信息。

HPV感染病例与P16^(INK4a)表达的关联研究

目的:研究P16^(INK4a)在宫颈炎症与宫颈鳞状上皮内病变以及癌组织中的免疫表达及其与临床病理特征和HPV-DNA分型的相关性。方法:收集商丘市第一人民医院2020年4月至2023年4月404例宫颈病变组织病理活检,包括炎症组织、宫颈鳞状上皮内病变以及鳞状细胞癌(SCC);统计所有病例的P16^(INK4a)免疫组化染色与HPV-DNA分型结果,并分析各病变组织中的P16^(INK4a)与HPV分型关系。结果:P16^(INK4a)的表达在各种宫颈病变组织中存在显著差异(P<0.05),且P16^(INK4a)的阳性率与表达强度随宫颈病变程度的加深而增加;宫颈组织中P16^(INK4a)的表达在低危型与高危型HPV间有显著差异(P<0.05),P16^(INK4a)的表达强度与高危型HPV有相关性(P<0.001)。结论:P16^(INK4a)免疫染色结合HPV-DNA分型能有助于鉴别高级别CIN和宫颈癌,以及区分这些病变与低级别CIN和正常宫颈组织。

棕榈酸酯通过调控p16INK4a/Rb信号通路诱导AC16人心肌细胞发生衰老表型改变

目的探讨棕榈酸酯(palmitic acid,PA)在AC16人心肌细胞衰老表型改变中的作用及机制。方法AC16细胞分为(1)对照组PA浓度(0.08、0.19、0.3、0.8 mmol/L)组;(2)对照组,时间(24、36、48、72 h)刺激组。细胞计数试剂盒-8法测细胞总体活性,流式细胞术测细胞周期;活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒测细胞内ROS水平;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色测染色阳性细胞率;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno⁃sorbent assay,ELISA)测衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)相关因子白细胞介素(interleukin,IL)-1A、IL-6、IL-8和干扰素(interferon,IFN)-γ浓度;实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)及Western blot测SASP及p16^(INK4a)/视网膜母细胞瘤抑制蛋白(retinoblasto⁃ma protein,Rb)通路表达。为观察p16^(INK4a)/Rb通路对心肌衰老表型影响,细胞分为4组:对照组、PA组、si-con组和si-p16^(INK4a)组,qRT-PCR测p16^(INK4a) mRNA表达;Western blot测p16^(INK4a)、p-Rb、Rb及IL-1A、IFN-γ蛋白表达;β-半乳糖苷酶染色测阳性细胞率。结果随PA浓度及刺激时间增加,细胞活性不断下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,0.19 mmol/L PA组在G1期比例显著升高,S期显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。0.08~0.3 mmol/L PA组ROS水平高于对照组,PA组中β-半乳糖苷酶染色阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.19 mmol/L PA组IL-1A、IL-6、IL-8、IFN-γ浓度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.19 mmol/LPA组IL-1A、IL-6、IL-8、IFN-γ及p16^(INK4a)、Rb mRNA及蛋白表达明显高于对照组,而p-Rb蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。si-p16^(INK4a)组IL-1A、IFN-γ蛋白表达及SA-β-Gal阳性率低于si-con组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论0.19 mmol/L PA可能通过调控p16^(INK4a)/Rb通路诱导人心肌细胞衰老表型改变。

美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)诱导SKOV3细胞衰老

目的探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)蛋白诱导卵巢癌细胞SKOV3衰老的作用。方法通过CCK-8法测定不同浓度和时间美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖的作用;运用细胞集落形成实验测定美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞周期的变化;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老变化;Western Blotting检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达的变化。结果美洲大蠊提取物CⅡ-3可有效抑制SKOV3细胞增殖,最佳作用浓度为80μg/mL,作用时间为48 h;CⅡ-3作用后,SKOV3细胞集落形成能力下降;阻滞于G_(0)/G_(1)期细胞比例增高,S期细胞比例减少;SA-β-Gal阳性细胞百分比增加;衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达上调。结论美洲大蠊提取物CⅡ-3通过调控衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达诱导SKOV3细胞衰老。

细胞学、组织P16~(INK4A)和HPV感染结果与年轻妇女CIN1进展情况的相关性研究

目的 探索在不同细胞学筛查结果、免疫组化染色法体现抑癌基因P16^(INK4A)表达情况和人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染状态下,轻度宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia grade Ⅰ,CIN1)人群的进展状况。方法 回顾性分析2008—2019年149例初次宫颈活检病理为CIN1的年轻妇女的长期随访资料,以中重度宫颈上皮内瘤样病变(CIN2+)为研究终点,使用Kaplan-Meier生存分析计算CIN2+的累积发生率和平均生存时间,使用Log Rank检验比较不同检测结果组间的生存时间差异性,使用Cox回归计算细胞学筛查结果、组织P16^(INK4A)表达情况和HPV感染状态对进展为CIN2+的风险比。结果 149例CIN1人群的中位随访时间为68个月,随访结束时共有16例进展为CIN2+,CIN2+的累积发生率为10.74%。细胞学不除外高级别鳞状上皮内病变/高度鳞状上皮内病变/非典型性腺细胞的妇女进展风险是细胞学阴性/意义不明确的非典型鳞状细胞/低度鳞状上皮内病变妇女的3.04倍(95%CI:1.06~8.76,P=0.04)。组织P16^(INK4A)弥漫性染色阳性妇女CIN2+的累积发生率为14.00%,进展风险是P16^(INK4A)弥漫性染色阴性者的1.70倍(95%CI:0.63~4.58,P=0.29)。HPV-16/18感染、HPV-31/33/45/52/58感染和其他HPV高危型别感染妇女CIN2+的累积发生率分别为34.78%、9.84%和2.63%,进展风险分别是高危HPV阴性者的12.70倍(95%CI:1.58~102.16,P=0.02)、2.96倍(95%CI:0.36~24.60,P=0.32)和0.82倍(95%CI:0.05~13.05,P=0.89)。联合分析HPV感染状态和组织P16^(INK4A)染色结果时发现,HPV-16/18感染且P16^(INK4A)弥漫性阳性人群进展为CIN2+的风险是高危HPV感染和P16^(INK4A)弥漫性染色同时阴性人群的14.43倍(95%CI:1.60~130.49,P=0.02)。结论 细胞学筛查结果和HPV-16/18检测对CIN1的进展具有重要指示作用,而组织P16^(INK4A)染色作为CIN1进展参考指标的可行性还需进一步研究。

P16^(INK4a)与人乳头瘤病毒感染及宫颈上皮内瘤变进展的相关性

目的探讨P16^(INK4a)与人乳头瘤病毒(HPV)感染及宫颈上皮内瘤变(CIN)的相关性。方法选取2020年2月至2023年5月在我院就诊的CIN患者197例(CIN组),其中CIN1患者62例,CIN2患者89例,CIN3患者46例;同时选取接受子宫全切除术且术后病理证实宫颈组织正常患者50例作为对照组;检测2组P16^(INK4a)表达及HPV感染情况。结果对照组P16^(INK4a)阳性表达率和HPV感染率(10.00%和0.00%)显著低于CIN组(72.08%和45.69%,P<0.05);CIN2和CIN3患者P16^(INK4a)阳性表达率(80.90%和91.30%)显著高于CIN1患者(45.16%,P<0.05)。CIN3患者HPV感染率(63.04%)高于CIN1、CIN2患者(33.87%和44.94%,P<0.05)。有HPV感染的CIN患者P16^(INK4a)阳性表达率(93.33%)显著高于无HPV感染的CIN患者(54.21%,P<0.05);HPV16/18感染患者P16^(INK4a)阳性表达率(100.00%)显著高于HPV31/33/53感染患者(85.00%,P<0.05);不同年龄、体重指数CIN患者P16^(INK4a)阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CIN患者P16^(INK4a)表达率明显升高,且与病变程度相关,P16^(INK4a)表达与HPV感染有关。

p16^(INK4a)在细胞衰老调控中的作用

细胞衰老的原因通常包括外在和内在两个方面。外源性因素主要是细胞外基质的改变、炎症反应和衰老相关分泌表型的表达。内源性因素通常源于调节细胞周期基因的影响,如肿瘤抑制基因。p16^(INK4a)是一种肿瘤抑制因子和细胞周期调节因子,与细胞衰老密切相关。在衰老细胞和与年龄相关的病理过程中,p16^(INK4a)表达显著增加,p16^(INK4a)被认为是检测细胞衰老的标志物。p16^(INK4a)高表达是防止受损细胞继续分裂的保护机制,与细胞周期停滞相关,有助于防止癌症发展。因此,p16^(INK4a)的表达调控在衰老细胞的积累、细胞周期的控制和肿瘤抑制中发挥重要作用。

p16INK4a蛋白可作为乳腺癌特异性分子标志

目的探讨p16INK4a蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集2014年～2015年间手术切除的132例乳腺癌标本,采用罗氏全自动免疫组化染色仪进行免疫组织化学染色,检测ER、PR、Her-2、Ki67、CK5/6、和p16INK4a表达,并按照不同表达模式进行结果判读和分子分型,观察p16INK4在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌免疫表型、分子亚型及临床指标的相关性。结果 132例浸润性乳腺癌中Luminal A型58例、Luminal B型32例、Her-2型21例、basal-like（BLBC）型12例、Normal-like型9例。p16INK4a蛋白表达阴性（0）、弱阳性（1＋）、阳性（2＋）和强阳性（3＋）表达样本分别占总数的5.30%（7/132）、11.36%（15/132）、30.30%（40/132）、53.03%（70/132）。按照p16INK4a表达强度,将阴性（0）和弱阳性（1＋）病例合并为阴性组（≤1＋）、将阳性（2＋）和强阳性（3＋）病例合并为阳性组（≥2＋）,p16INK4a阴性（≤1＋）表达率为16.67%（22/132）、p16INK4a阳性（≥2＋）表达率为83.33%（110/132）。按照构成比进行统计分析,发现p16INK4a蛋白的表达强度除在不同年龄分组中具有统计学差异（P〈0.05）之外,与ER、PR、Her-2及分子分型和是否存在转移之间均无统计学差异（P〉0.50）。结论 p16INK4A代偿性高表达是浸润性乳腺癌细胞周期异常的主要机制,且p16INK4A可作为浸润性乳腺癌细胞特异性的分子标志,采用IHC技术检测p16 INK4a的表达不仅为乳腺癌诊断提供了一种重要方法,也为乳腺癌的机制研究提供有价值的信息。

一种基于适配体的快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的方法

目的提出一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的方法。方法构建重组质粒P16INK4A-pET28a,在大肠埃希菌中表达P16INK4A,利用亲和层析纯化,Western blot法验证。以纯化的重组蛋白作靶标,利用指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选其特异性适配体,通过分析其亲和力最终选出一条高亲和力、高特异性的适配体。枸橼酸钠还原法制备13nm纳米金颗粒并表征。建立基于免标记纳米金和适配体的分析方法,并对其进行方法学的考察。结果成功表达并纯化了P16INK4A蛋白,筛选出一条抗重组P16INK4A的高亲和力、高特异性的适配体,利用该适配体和免标记的纳米金建立了一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的分析方法。结论该方法具有较好的准确度和精密度,有望显著提高早期宫颈癌的检出率。

p16INK4a和Ki-67免疫细胞化学染色在宫颈液基细胞学中的应用价值

目的探讨液基细胞学检测（LCT）剩余细胞学标本中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色筛查宫颈鳞状细胞癌和宫颈癌前病变的价值。方法采用免疫细胞化学和免疫组化法对194例细胞学标本和91例组织活检标本进行p16INK4a、Ki-67检测。结果p16INK4a、Ki-67表达阳性率随着宫颈病变程度的加重而升高,与病变级别呈正相关。Ki-67的标记指数（LI）在HSIL组最高,与其他各组间均数的差异显著（P〈0.05）。LSIL及其以上病变细胞学p16INK4a和Ki-67与组织学诊断符合率分别为87.3%和80.95%。宫颈脱落细胞学Ki-67、p16INK4a的免疫细胞化学染色检出高级别病变及鳞癌病变的敏感度、特异度分别为83.6%、86.7%和87.1%、100%。结论利用LCT液基细胞学涂片中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色作为辅助诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,具有重要意义。

p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达及其意义

目的:检测p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达,探讨其与蒙古族患者宫颈癌发生发展的关系。方法:选取100例蒙古族患者宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤病变组织石蜡切片,分为宫颈癌组25例、CIN组35例、慢性宫颈炎组20例和子宫平滑肌瘤组20例,利用免疫组织化学SP法检测各组石蜡切片组织中p16INK4a蛋白表达。结果:蒙古族患者宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎、子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a蛋白阳性表达率分别为100.0%、74.3%、25.0%和10.0%。多个样本比较的K-W H秩和检验,宫颈癌组p16INK4a蛋白阳性表达率高于CIN组、慢性宫颈炎组和子宫平滑肌瘤组(P<0.05)。结论:p16INK4a蛋白可以作为筛选蒙古族早期宫颈癌患者的一种检测指标。

银杏叶提取物对AFB1所致大鼠肝癌基因P16Ink4a mRNA及蛋白表达的影响

目的:动态观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发大鼠肝癌过程中对肝组织相关基因P161nk4a mRNA表达水平的影响,进一步从分子生物学水平揭示银杏叶提取物抗癌的机制及其效果。方法:将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组:AFB1组(25只),AFB1+EGb761组(25只)及对照组(20只)。在诱发肝癌过程中,分别于第13、33及53周对大鼠进行肝组织活检;至第73周处死全部动物取肝组织。应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术动态检测肝组织中P16Ink4a mRNA及相应蛋白的表达情况。结果:AFB1组原发性肝癌发生率为58.8%(10/17);AFB1+EGb761组为29.4%(5/17);对照组为0(0/16) AFB1+EGb761组肝癌发生率显著低于AFB1组(P<0.05)。AFB1+EGb761组的肝组织P16Ink4amRNA及相应蛋白表达水平在第53周及第73周时均明显高于AFB1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠肝癌的作用。其机制可能与调控肝细胞抑癌基因P16Ink4a

结直肠癌患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态观察

目的观察结直肠癌(CRC)患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态。方法 CRC患者50例(肿瘤组)、结直肠良性病变者50例(良性组)、健康体检者50例(正常组),采用甲基化特异度PCR的方法检测各组粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率,并分析其与CRC临床病理参数的关系。根据肠镜病理诊断结果进行验证,比较粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A单独及联合检测诊断CRC的敏感度和特异度。结果肿瘤组、良性组、正常组粪便p16INK4a基因甲基化检出率分别为74%、28%、14%,MGMT基因甲基化检出率分别为56%、24%、12%,RASSF1A基因甲基化检出率分别为72%、20%、10%,肿瘤组分别与正常组、良性组比较,P均<0.05。p16INK4a基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,MGMT基因甲基化状态与CRC淋巴结转移相关,RASSF1A基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,P均<0.05。三者联合检测诊断CRC的敏感度为95.8%,特异度为83.4%,ROC曲线下面积为0.816(95%CI 0.739%~0.894%)。结论 CRC患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率明显高于结直肠良性病变者及健康体检者,联合检测上述指标有助于CRC患者的早期诊断及其生物学行为的判断。

p16INK4a蛋白在人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨p16INK4a蛋白在多种人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义。方法收集2014年至2015年手术切除的肿瘤标本642例。免疫组化染色检测并分析p16INK4在肿瘤组织中的表达。结果 642例肿瘤样本中良性肿瘤120例、恶性肿瘤522例。免疫组化检测p16INK4a在恶性肿瘤组织中表达阴性(-)、弱阳性(+)、中等阳性(++)和强阳性(+++)表达率分别为17.43%(91/522)、11.11%(58/522)、19.16%(100/522)和52.30%(273/522),而在良性病变中表达率分别为34.17%(41/120)、23.33%(28/120)、26.67%(32/120)和15.83%(19/120),差异具有统计学意义(P<0.05)。在不同组织来源的肿瘤中p16INK4a蛋白阳性表达率也并不相同(P<0.05)。分别以阳性免疫组化染色"++"和"+++"作为p16INK4A阳性表达界值,则p16INK4A蛋白作为恶性肿瘤分子标志的灵敏度、特异度和阳性预测值分别为71.46%、57.50%、87.97%和52.30%、84.17%和93.49%。结论 p16INK4A代偿性高表达是人恶性肿瘤特异性的免疫表型,可作为恶性肿瘤诊断、鉴别诊断和分子分型的分子标志。

肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的 :研究抑癌基因位点INK4a ARF在肺肿瘤细胞中的表达状况 ,揭示p14ARF和p16INK4a协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法 :用RT PCR和Westernblot对 6株肺癌细胞 (SPC A 1,Calu 1,H44 6 ,SH77,A5 49,H46 0 )的INK4a ARF基因位点在mRNA、蛋白质水平上进行检测 ,对PCR产物进行纯化和测序分析。结果 :6株肺癌细胞中 ,有 3株细胞 (H46 0 ,Calu 1,A5 49)的p16INK4a基因表达缺失 ,其中 ,Calu 1表达正常p14ARF的mRNA ,而在H46 0和H5 49这两株非小细胞肺癌中 ,p14ARF和p16INK4a发生协同表达缺失。结论 :p14ARF基因与p16INK4a一样 ,是肺肿瘤细胞中的失活靶点之一。揭示了p14ARF缺失导致p5

抑癌蛋白p16INK4a:一种新的衰老调控因子

p16INK4a是一种非常重要的抑癌蛋白,可通过抑制癌细胞的分裂和诱导癌细胞的死亡而减少癌症的发生,因此它的缺失或异常将增加患癌症的概率。最新的研究却发现,p16INK4a还有另外一个重要作用,通过诱发老龄哺乳动物干细胞功能下降而促使衰老的产生,至少在骨髓、前脑、胰岛细胞和角化细胞等类型细胞中被证实。这个发现使人们对p16INK4a功能和衰老分子机制有了新的理解,因此为更好的临床应用提供了重要的材料。

Bcl2转录抑制因子1、E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌不同区域的表达及两者与P16INK4a表达的关系

目的检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及肿瘤中央区失巢凋亡因子Bcl2转录抑制因子1(Bit1)、上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白及P16INK4a的表达情况,探讨Bit1、E-钙黏蛋白在宫颈癌获得高侵袭力过程中的意义及二者与P16INK4a表达的关系。方法收集甘肃省肿瘤医院病理科2014-2018年宫颈鳞状细胞癌石蜡包埋标本77例。采用免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及中央区Bit1、E-钙黏蛋白、P16INK4a的表达情况。以肿瘤中央区及出芽区各蛋白质表达评分的中位数作为分界点,将标本分为高表达组和低表达组,分析在不同P16INK4a表达情况下Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异及二者与患者临床病理特征的关系,并进一步分析在肿瘤中央区及出芽区Bit1与E-钙黏蛋白的相关关系。统计学分析采用χ2检验或连续校正χ2检验和Spearman等级相关分析。结果77例宫颈鳞状细胞癌标本中,肿瘤中央区P16INK4a、E-钙黏蛋白、Bit1高表达率分别为32.5%(25/77)、67.5%(52/77)、63.6%(49/77),而在肿瘤出芽区分别为67.5%(52/77)、33.8%(26/77)、37.7%(29/77),差异有统计学意义(χ2=18.935、17.561、10.391,P均<0.01)。无论在肿瘤出芽区还是中央区,P16INK4a高表达组与P16INK4a低表达组Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。肿瘤中央区Bit1低表达与脉管内癌栓及淋巴结转移有关(χ2=5.053、4.400,P均<0.05),肿瘤出芽区E-钙黏蛋白和Bit1低表达均与淋巴结转移有关(χ2=5.580、7.573,P均<0.05)。Spearman等级相关分析显示,在肿瘤中央区及肿瘤出芽区E-钙黏蛋白与Bit1表达均呈正相关(r=0.287,P=0.011;r=0.236,P=0.039)。结论宫颈癌侵袭力的增高与Bit1及E-钙黏蛋白表达降低及P16INK4a表达增高有关,宫颈癌细胞可能通过抑制Bit1获得失巢凋亡抗性并影响EMT的发生从而获得更高的侵袭能力,但P16INK4a并未参与此过程。

L1壳蛋白和p16INK4a蛋白在不同类型宫颈上皮内瘤变1级中的表达意义

p16属于抑癌基因CDKN2A家族,通过阻断细胞由G0期进入S期抑制细胞的增殖而发挥抑癌作用.在CIN组织中P16INK4a过度表达,可能是人感染高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）后,E7癌蛋白在宫颈细胞内表达,竞争性抑制CDK4与Rb蛋白的结合,使Rb蛋白失活,激活了E2F家族转录因子,基因转录水平上升,从而导致p16INK4a阳性表达[1].

pIRES-p16ink4a-hRb1载体的构建及其对骨肉瘤细胞周期的调控

目的应用内部核糖体插入位点(IRES)序列构建单启动子双顺反子穿梭载体pIRES-p16ink4a-hRb1并鉴定,观察其导入骨肉瘤细胞后对细胞周期的调控。方法利用基因工程技术,将p16ink4a与hRb1全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,质粒构建通过PCR、双酶切与测序鉴定;脂质体转染至p16ink4a表达缺失、hRb1表达阳性的骨肉瘤细胞株MG63,G418筛选获得抗性克隆,通过RT-PCR和Western blot法分析外源基因表达;流式细胞术分析细胞周期特异性和细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。结果成功构建出pIRES-p16ink4a-hRb1载体,外源基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。与对照组比较,双基因导入组细胞生长抑制率显著上升,细胞周期显著阻滞在G1期,且细胞凋亡率极显著升高。结论pIRES-p16ink4a-hRb1双顺反子穿梭载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功,为进一步研究p16ink4a与hRb1相互关系在细胞周期调控中的作用奠定了基础。